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《东北农业大学》 2017年
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牛肠道病毒2A和3C蛋白酶通过负调控MAVS抑制牛β干扰素表达的研究

安东  
【摘要】:牛肠道病毒(bovine enterovirus,BEV)属于小RNA病毒科肠道病毒属,为单股正链RNA病毒。BEV可通过粪口传播,常和多种病原体一起引发动物混合感染,因其可感染消化道且物理性质稳定,故可通过宿主排便而暴露于水源环境中,从而对牧场造成潜在危害。本实验室之前的研究发现,BEV病毒可以感染幼兔和白化豚鼠,并引起感染动物肺脏、肝脏明显的充血肿胀,病毒粒子可以在肺、肠、脾、肝和肾等内脏组织中增殖。BEV感染会引起机体带毒,可能会降低宿主的免疫反应而为其他细菌和病毒复制提供可乘之机,为继续探索BEV是如何逃逸宿主天然免疫本研究进行了以下探索。检测BEV感染对牛I型干扰素(Interferons,IFNs)、干扰素效应分子(IFN-stimulated genes,ISGs)和RLR信号通路关键分子表达的影响,结果发现BEV感染不能明显引起Bo IFN-β、ISGs和RLR信号通路关键分子表达增多;说明BEV感染细胞中I型干扰素应答反应较弱。为进一步探究BEV是如何拮抗牛I型IFN干扰素的生成,本研究克隆表达了BEV的非结构蛋白2A、3C,通过在MDBK、BL细胞中过表达2A、3C检测其对Bo IFN-β、ISGs和RLR信号通路关键分子表达的影响;实时荧光定量PCR结果显示2A、3C可抑制BoIFN-β、Mx1、ISG15和RIG-I、MAVS的转录表达;Western Blot结果显示2A、3C负调控MAVS的蛋白表达,且抑制过表达MAVS引起的Mx1和NF-κB p65蛋白的表达;2A、3C在敲减MAVS表达的MDBK细胞中不抑制BoIFN-β、ISGs的转录表达;说明2A、3C通过MAVS拮抗干扰素的生成。双荧光素酶系统检测结果显示2A、3C抑制IFN-β启动子、ISRE和NF-κB所调控的荧光素酶活性。此外q PCR和TCID50检测结果显示BEV感染基因敲减Bo MAVS的MDBKpsiMAVS和MDBKsh MAVS细胞中的病毒滴度,高于BEV感染正常MDBK细胞的病毒滴度。本研究发现BEV感染细胞中I型干扰素应答反应较弱,2A、3C可以负调控RLR信号通路关键接头分子MAVS的转录和蛋白表达以及抑制Bo IFN-β启动子、ISRE和NF-κB等调控的荧光素酶活性,BEV可通过其非结构蛋白酶2A、3C来拮抗宿主产生干扰素。综上所述,本研究旨在为牛肠道病毒抗宿主天然免疫应答的研究提供思路。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.653

【参考文献】
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