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《东北农业大学》 2000年
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表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究

贾永清  
【摘要】: 本研究利用RT-PCR方法扩增到一条1.7kb的A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)(GD3) DNA片段,经酶切分析后平端克隆到pUC18中进行了序列测定和分析。结果表明所扩增 到的HA基因cDNA全长1731,包含了HA基因完整的开放阅读框架,共编码568个氨基酸, 其中信号肽16个氨基酸,HA1 330个氨基酸,HA2 222个氨基酸,并含有起始密码子和终 止密码子。GD3与GD1、HK156和HK258核苷酸同源率分别为99.4%、98.6%和98.3%, 其受体结合位点和裂解位点的核苷酸与氨基酸组成完全一致。酶切位点的氨基酸序列为一 P-Q-R-E-R-R-R-K-K-R-G-L-P-,共有连续5个碱性氨基酸插入。 本试验以LacZ作为报告基因构建了AIV HA基因禽痘病毒转移载体。经转染、蓝 斑克隆、筛选和纯化,获得了遗传形状稳定的AIV HA基因重组禽痘病毒。提取感染 重组病毒的CEF细胞的DNA进行PCR,扩增出1.7kb的HA基因片段,证明所获得 的重组病毒携带有外源目的基因片段。收集纯化的重组病毒CEF细胞培养物无上清液 的细胞,用H5亚型AIV多克隆血清作一抗,碱性磷酸酶标记的兔抗鸡IgG为二抗进 行Dot-ELISA检测,结果表明重组病毒能在体外的CEF细胞培养中表达HA糖蛋白。 Western-blot检测结果证实HA基因表达产物为44kDa(HA1)和23kDa(HA2)的两 条带,这两条带都具有与多克隆抗体结合的能力;未发现没有裂解的HAO的存在。 用该重组病毒鸡翅刺种免疫60日龄SPF鸡,免疫3周后,每只鸡用50×LD_50的 GD1株HPAIV攻毒,免疫组无一发病和死亡,攻毒保护率100%。而对照组鸡只全部 发病并在攻毒后3~9天相继死亡,发病率和死亡率均为100%。HI抗体效价检测结果 表明重组病毒免疫组鸡在免疫后7天即可检测到高效价的HI抗体,抗体效价在免疫后 14天达到高峰,随后在较高水平上缓慢下降,攻毒试验对抗体效价及其变化没有影响。 灭活苗免疫组鸡在免疫后14天方可检测到HI抗体,抗体效价于免疫后第五周达到高 峰。对照组鸡免疫和攻毒前后无HI抗体检出。三组免疫组鸡不同组织器官病毒分离结 果全为阴性,而所有对照组鸡都分离到病毒,且肺脏病毒分离率最高(83.9%),脾脏 最低(12.9%)。T淋巴细胞亚类检测结果表明:重组病毒免疫后激发了机体的细胞免 疫应答,使免疫活性T淋巴细胞活化,攻毒后,免疫鸡CD4~+、CD8~+T细胞和TCR1~+T 细胞的数量增高或不变,而对照组鸡CD4~+、CD8~+T细胞和TCR1~+T细胞的数量急剧下 降。 总之,通过本试验研究,已经成功地获得了遗传性状稳定,目的基因表达效率 高的AIV HA基因重组禽痘病毒,SPF鸡免疫和攻毒试验结果表明,该重组病毒疫 苗能全面诱导机体的细胞免疫和体液免疫反应,对强毒攻击产生坚强的免疫保护。 本论文基本完成了该基因工程新型疫苗的实验室研究工作,为进一步开展疫苗中试 和投入现地使用奠定科学的理论和实验基础,也为我国高致病力禽流感的防制提供 了物质储备。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:S852.65

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 乔传玲,张建林,贾永清,邓国华,姜永萍,王秀荣,孟庆文,于康震;禽流感病毒血凝素与核蛋白在重组禽痘病毒中的共表达[J];动物医学进展;2003年01期
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1 曾寒飞;四川省鸡场禽流感免疫程序调查及抗体水平监测[D];四川农业大学;2014年
2 李春景;永春县家禽高致病性禽流感的免疫与监测[D];福建农林大学;2013年
3 张凤霞;A型流感病毒HA受体在犬、貉子、蓝狐和水貂主要器官的分布[D];山东农业大学;2013年
4 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
5 方敏;江苏省越冬野鸭禽流感病毒的亚型鉴定及主要基因信息的研究[D];南京农业大学;2009年
6 王艳丽;表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的评估[D];新疆农业大学;2008年
7 刘畅;H5亚型禽流感病毒的生物学特性及其基因重组疫苗株的构建[D];内蒙古农业大学;2007年
8 夏俊;禽流感DNA疫苗的体内分布与制备工艺研究[D];新疆农业大学;2007年
9 温峰琴;高致病性禽流感病毒A/Duck/Guangxi/53/02株感染性克隆构建及分子演化研究[D];甘肃农业大学;2006年
10 王彬;H9N2亚型AIV HA2基因在重组杆状病毒和毕赤酵母菌中的表达[D];东北农业大学;2006年
【参考文献】
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1 贾永清,陈化兰,邓国华,唐秀英,田国斌,于康震,刘保全;禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因序列分析[J];中国预防兽医学报;2000年01期
2 陈化兰,于康震,步志高;一株鹅源高致病力禽流感病毒分离株血凝素基因的分析[J];中国农业科学;1999年02期
3 李一经,刘宝全,李海滨,杨庆霞,刘胜旺,卢景良;马立克氏病强毒株感染鸡T细胞受体亚群动态变化的研究[J];畜牧兽医学报;1999年02期
4 邓国华,马文军,于康震;禽流感病毒核蛋白基因在重组杆状病毒中的表达[J];中国预防兽医学报;1999年02期
5 田国斌,赵增连,唐秀英,林祥梅,于康震,陈溥言;鸭源禽流感病毒的分离和鉴定[J];中国预防兽医学报;1999年01期
6 李一经,刘宝全,李海滨,杨庆霞,刘胜旺,卢景良;马立克氏病病毒感染鸡TCR1与TCR2T细胞动态变化观察[J];东北农业大学学报;1998年04期
7 郭元吉,徐西雁,万秀峰,王敏,郭俊峰;一株鹅H5N1亚型流感病毒基因特性的分析[J];中华实验和临床病毒学杂志;1998年04期
8 李一经,刘胜旺,陈立君,刘宝全,杨艳艳,卢景良;马立克氏病弱毒苗接种雏鸡T细胞亚群观察[J];中国畜禽传染病;1998年06期
9 陈化兰,于康震,田国滨,唐秀英,卢景良;DNA免疫诱导鸡对禽流感病毒的免疫保护反应[J];中国农业科学;1998年05期
10 李一经,刘宝全,陈立君,刘胜旺,卢景良,杨艳艳;马立克病毒强毒株感染鸡T细胞表型动态变化的研究[J];上海免疫学杂志;1998年05期
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1 刘明;H5和H7亚型禽流感分子防制技术的研究[D];中国农业科学院;2000年
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1 张建林;禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)分离株全基因克隆及序列分析[D];中国农业科学院;2000年
【共引文献】
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1 曾伟;刘庆亮;孔强;张文东;胡媛媛;胡挺松;赵焕云;段博芳;邱薇;范泉水;张应国;宋建领;张富强;;2009年-2014年云南边境禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶基因进化分析[J];动物医学进展;2015年07期
2 湛琳丽;;禽流感亚单位疫苗和核酸疫苗的研究进展[J];畜禽业;2015年06期
3 申翰钦;吴波良;陈一珉;谢青梅;;1株重组的H5N2亚型禽流感病毒全基因组序列分析[J];中国兽医学报;2015年05期
4 任丽花;辛蕊华;罗永江;王贵波;罗超应;谢家声;李锦宇;郑继方;;禽流感的诊断与防治[J];黑龙江畜牧兽医;2014年19期
5 赵双成;柳金雄;陈普成;曾显营;葛金英;乔传玲;田国彬;姜永萍;陈化兰;;不同类型H5亚型禽流感疫苗的免疫保护效力比较研究[J];中国农业科技导报;2014年01期
6 张毅;王幼明;王芳;王静静;毕玉海;尹燕博;丁家波;;我国禽流感研究进展及成就[J];微生物学通报;2014年03期
7 李宁求;付小哲;赖迎迢;王亚军;任燕;石存斌;吴淑勤;;水产立体养殖模式传播禽流感的风险分析[J];动物医学进展;2013年12期
8 刘军骅;;猪瘟DNA疫苗的研究进展[J];现代畜牧兽医;2013年05期
9 王明芳;邓国华;杨孝朴;施建忠;丁晴微;罗维玉;张文亮;陈化兰;;两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒的序列分析及致病性研究[J];中国预防兽医学报;2012年11期
10 王家敏;沈武玲;于国伟;;禽流感研究进展[J];吉林农业科学;2012年05期
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1 张树梅;NP突变体抑制流感病毒复制的机制及形成流感病毒病毒样颗粒的关键蛋白[D];内蒙古农业大学;2011年
2 刘学东;禽流感病毒H5N1亚型基因工程疫苗的设计、表达制备及动物实验研究[D];中国海洋大学;2010年
3 李宝全;H9亚型禽流感病毒抗独特型抗体的研制与其免疫原性的初步分析[D];山东农业大学;2005年
4 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
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1 冯琳琳;H7N3亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立[D];内蒙古农业大学;2015年
2 孙洪伟;猪源H5N1亚型禽流感病毒的分离、鉴定及其进化分析[D];吉林农业大学;2012年
3 左青山;共表达禽流感病毒HA5和HA9基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];新疆农业大学;2007年
【同被引文献】
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1 邓国华,马文军,于康震;禽流感病毒核蛋白基因在重组杆状病毒中的表达[J];中国预防兽医学报;1999年02期
2 陈化兰,于康震,田国滨,唐秀英,卢景良;DNA免疫诱导鸡对禽流感病毒的免疫保护反应[J];中国农业科学;1998年05期
3 唐秀英,田国斌,赵传删,周金法,于康震;中国禽流感流行株的分离鉴定[J];中国畜禽传染病;1998年01期
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1 刘海军;H9亚型禽流感病毒(重庆株)的分离鉴定及疫苗研究[D];重庆理工大学;2011年
2 程小文;表达绿色荧光蛋白的重组山羊痘病毒的构建以及牛流热G蛋白在痘苗病毒中的表达[D];南京农业大学;2006年
3 邱美珍;禽流感核酸疫苗免疫保护性研究[D];湖南师范大学;2005年
4 唐志芬;AIV地方分离株(H9N2)HA和NA基因克隆、序列分析及HA的原核表达[D];东北农业大学;2004年
5 张小荣;以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗及其免疫生物学特性[D];扬州大学;2003年
【二级引证文献】
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1 杨玉菊;李曦;王君伟;马德滨;魏红;吴伟峰;吴疆;;GPMV HN基因于禽痘病毒载体中的构建与表达[J];东北农业大学学报;2009年05期
2 杨若松;李明义;赵雪丽;张志;;H5N1亚型禽流感病毒HA、NA基因在杆状病毒中的重组体的构建[J];上海畜牧兽医通讯;2006年01期
3 戚凤春,盛军;禽流感病毒与人流感的关系[J];微生物学杂志;2004年05期
4 曹梅,田夫林,庄文忠;禽流感病毒血凝素分子生物学研究进展[J];动物医学进展;2004年02期
5 段明星,何宏轩,张强哲;禽流感及其免疫防制研究[J];生物化学与生物物理进展;2004年03期
6 闫若潜,杜向党;流感病毒基因组结构及其编码蛋白研究进展[J];动物医学进展;2004年01期
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1 康超;白城地区四种强制免疫动物疫病的流行病学调查及防控建议[D];吉林农业大学;2016年
2 忻悦;长春地区H1N1流感病毒HA、NA基因分析及抗原性变异研究[D];甘肃农业大学;2013年
3 杨奇林;肉鸡IBD,AI抗体消长规律、免疫程序制定及效果监测[D];河北农业大学;2013年
4 黄海琼;表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组马立克病毒疫苗株的构建[D];扬州大学;2013年
5 胡阿勇;鸡IL-5基因的克隆表达及其重组鸡痘病毒的构建[D];河南科技大学;2011年
6 郭亮;禽流感病毒H3N8野鸭分离株分子生物学特征研究及遗传进化分析[D];东北林业大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 陈化兰,于康震,步志高;一株鹅源高致病力禽流感病毒分离株血凝素基因的分析[J];中国农业科学;1999年02期
2 唐秀英,田国斌,赵传删,周金法,于康震;中国禽流感流行株的分离鉴定[J];中国畜禽传染病;1998年01期
3 郭元吉,王敏,金粉根,王平,朱既明,孟凡义,高淑琴,刘丽力,金俐,王永新,张志强;我国家鸭及野鸭中正粘与副粘病毒的调查[J];中国医学科学院学报;1982年01期
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2 陈红英;黄青云;崔保安;李新生;管倩;;表达H_5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-18基因重组禽痘病毒的构建[J];微生物学报;2008年08期
3 乔传玲,常洪涛,于康震,陈化兰;共表达禽流感病毒HA和NA基因重组禽痘病毒的遗传稳定性[J];微生物学报;2004年05期
4 陈全姣,金梅林,陈焕春;禽流感病毒HA部分基因的克隆及其表达[J];中国病毒学;2005年01期
5 赵朴;郑玉姝;贾贝贝;乔传玲;陈化兰;刘兴友;李海燕;;猪流感病毒HA基因的克隆及杆状病毒转移载体的构建[J];生物技术通报;2009年09期
6 邓迎春;柳青;黄强;;禽流感病毒HA蛋白与人受体的分子对接[J];物理化学学报;2017年03期
7 高彦斌;;投资担保公司风险管理能力的模糊综合评价——以HA投资担保公司为例[J];发展研究;2015年07期
8 ;“还土壤本色”,舍我(HA)其谁[J];中国农资;2017年17期
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6 邵晨;窦森;李艳;崔婷婷;;木质素液体培养条件下细菌对类HA结构性质的影响[A];面向未来的土壤科学(上册)——中国土壤学会第十二次全国会员代表大会暨第九届海峡两岸土壤肥料学术交流研讨会论文集[C];2012年
7 钱忠明;张评浒;薛峰;刘秀梵;;华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
8 杨旭东;;小剂量HA与G-CSF治疗老年急性髓系白血病的疗效观察[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
9 孟凡义;徐丹;宋兰林;杨柳;江千里;刘晓力;徐兵;冯茹;孙竞;刘启发;周淑芸;;格列卫或联合HA方案治疗82例慢性粒细胞白血病疗效分析[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
10 贾永清;乔传玲;张建林;于康震;刘宝全;;表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
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1 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
2 王峰;模拟体液法合成HA纳米晶须的工艺、相关机理及性能研究[D];山东大学;2005年
3 杨玉菊;GPMVF、HN及NP基因的多表达系统与DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2005年
4 胡江;激光快速成形制备钛表面HA涂层及其成骨相关性能研究[D];第四军医大学;2011年
5 田明尧;A型流感病毒16种HA血清型DNA微阵列检测方法研究[D];吉林大学;2013年
6 胡志鹏;表达H5N1高致病性禽流感血凝素蛋白(HA)的新型重组杆状病毒载体疫苗在小鼠中诱导免疫应答的初步研究[D];复旦大学;2009年
7 颜健华;猪群中2009甲型H1N1流感病毒分离鉴定和HA基因点突变对小鼠致病性的研究[D];广西大学;2013年
8 范根成;H5N1亚型禽流感病毒HA基因序列变异与免疫保护相关性分析及灭活疫苗免疫程序制定和应用[D];南京农业大学;2011年
9 徐峰;电纺聚乳酸、Ⅰ型胶原和HA构建仿生骨基质材料的生物相容性研究[D];吉林大学;2009年
10 智海东;表达新城疫病毒F基因和传染性喉气管炎病毒gB基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];中国农业科学院;2002年
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1 王艳丽;表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的评估[D];新疆农业大学;2008年
2 焦同路;表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒的构建及其免疫效力初评[D];中国农业科学院;2012年
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8 范恒;改性膨润土强化混凝处理微污染水中HA的研究[D];广东工业大学;2014年
9 胡珂嘉;HA公司汽车后市场应用软件项目计划与控制管理研究[D];北京工业大学;2017年
10 李斌;HA卫生巾多品牌战略重塑研究[D];广东工业大学;2014年
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