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《东北农业大学》 2000年
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新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究

姜永厚  
【摘要】: 本文在成功构建鸡新城疫F基因疫苗,并观察了免疫SPF雏鸡后诱导的免疫应答 及免疫保护作用基础上,首次系统研究了鸡IL-2在鸡新城疫F基因疫苗免疫中的作用, 证实了国内首次克隆成功的鸡IL-2基因的免疫增强作用,及作为免疫佐剂应用于禽类 基因免疫的可行性;在此基础上,为进一步提高F基因疫苗免疫效率,又成功地构建 了鸡新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗,研究了其接种SPF雏鸡后免疫鸡只 T、B淋巴细胞增殖反应和抗体变化规律,以及强毒攻击后的免疫保护作用。研究结果 如下: 1.新城疫病毒F基因疫苗研究 用新城疫病毒D26株F基因的cDNA与含人巨细胞病毒CMV启动子的真核表达 载体pcDNA3重组,构建了新城疫F基因疫苗(pcDNA-F)。直接免疫接种SPF鸡后 免疫鸡产生了针对新城疫病毒的抗体,免疫接种后前2周,免疫鸡的抗体产生并不明 显,第3周后出现稍为明显的抗体反应。攻毒后,免疫鸡的抗体回忆反应十分迅速和 强烈,出现一个较陡而又较高的峰值。而非免疫鸡在攻毒后,抗体反应相当弱。免疫组 有部分试验鸡(30%)耐过强毒攻击。说明重组质粒的F基因已在体内得到表达,并诱 导了机体的免疫应答反应和免疫保护作用。证明以F基因做为新城疫基因免疫的免疫原 基因是可行的。 2.鸡IL-2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用研究 用含鸡IL-2基因真核质粒与新城疫F基因疫苗联合免疫SPF雏鸡。抗体监测结果 显示添加鸡IL-2质粒试验鸡的抗体滴度高于单独接种F基因疫苗试验鸡的抗体滴度; 其中两种质粒混合接种组(pcDNA-F+IL2)抗体滴度又明显高于这两种质粒的分别接 种组(pcDNA-F/IL-2)抗体滴度。 MTT法检测免疫鸡T、B淋巴细胞增殖反应:免疫后不同周龄,各免疫组试验鸡 胸腺T淋巴细胞对ConA、法氏囊B淋巴细胞对PMA均有明显的反应性。接种鸡IL-2 质粒试验鸡胸腺T淋巴细胞对ConA的反应性、法氏囊B淋巴细胞对PMA的反应性又 显著高于单独接种F基因疫苗组,差异极显著(P<0.01)。说明接种鸡IL-2表达质粒后, F基因疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫应答均得到了加强。在添加IL-2质粒的两组中, 混和接种IL-2质粒组的T、B淋巴细胞增殖反应又明显高于分别接种组,差异极显著 (P<0.01)。表明鸡IL-2质粒免疫增强作用的发挥有赖于同抗原基因的共同接种。 攻毒保护试验显示:混合接种组(pcDNA-F+IL2)中有50%的试验鸡耐过;分别 接种组(pcDNA-F/IL-2)有40%试验鸡耐过。 添加IL-2质粒组试验鸡体液免疫、细胞免疫的增强及免疫保护率(50%)的提高, 说明IL-2真核质粒在鸡体内得到表达,并且具有免疫增强作用。一方面刺激T淋巴细 东北农业大学 中文摘要 博士学位论文 胞的增殖、分化,增强细胞免疫应答;另一方面作用B细胞,促进其活化分泌Ig,加 速抗体生成,进而加强体液免疫。 3.新城疫病毒F基因与鸡thZ重组DNA疫苗的研究 利用国内首次克隆得到的鸡IL2与新城疫弱毒D26株的F基因,经载体改建,将 二者以非融合表达形式共同克隆于真核表达质粒pCDNA3上,经酶切分析、PCR鉴定 证实成功构建了共表达鸡 IL-2与新城疫 F蛋白的重组质粒(pCDNA-F-ILZ)。采用胸肌 多点注射方法接种 14日龄 SPF雏鸡,免疫后每周采集试验鸡胸腺、法氏囊、血液,无 菌分离T、B淋巴细胞和血清,以 MTT法和 ELISA分别检测免疫鸡 T。B淋巴细胞增 殖反应和抗体变化规律。结果显示:与单独接种F基因疫苗试验组相比,接种重组质 粒试验组鸡只的体液免疫和细胞免疫均明显增强;且免疫效果优于两种质粒的混合注 射。免疫后以新城疫标准强毒F。。巳攻击,接种重组质粒试验鸡有70%存活;混合接种 F基因和几-2质粒试验鸡有 5()%存活;单独接种 F基因疫苗试验鸡只有 3()%存活。试 验结果表明共表达IL.2可极大提高新城疫DNA疫亩的效力。 新城疫F基因与鸡IL。二重组质粒的成功构建在国内外尚未见报道,不仅首次证实 了鸡IL-2在新城疫基因免疫中的免疫增强作用,而且为鸡IL2这一新型佐剂在禽类基 因免疫中的应用提供了试验依据。同时山为探讨禽类重组基因疫苗的构建奠定了基础。 4.新城疫基因疫苗、鸡IL.2质粒免疫SPF雏鸡免疫器官的组织学变化 新城疫基因疫苗免疫后.试验鸡胸腺皮质增厚,其中淋巴细胞数目增客。法氏囊 淋巴滤泡明显增大,淋巳细胞数目增多。脾脏白髓区增大,淋巴小结数量增多,体积增 大,其中淋巴细胞数量增多。以上主要免疫器官在免疫后的组织学变化再次证实了基因 疫苗免疫可以诱导体液免疫和细胞免疫的结论。 另外,将几.2免疫鸡与空白对照鸡、F基固疫苗免疫鸡进行了形态学和组织学的 比较,接种IL.2质粒试验鸡剖检末见病理变化:整个免疫过程中,接种几-2质粒试验 鸡的
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:S858.31

【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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【共引文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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【二级参考文献】
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【相似文献】
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3 杨玉菊;王君伟;马德滨;李俊艳;;表达鹅副粘病毒F基因的禽痘重组病毒构建[J];中国预防兽医学报;2009年06期
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4 李晓杰;鹌鹑新城疫的诊断与防治[N];河北科技报;2006年
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3 沈志强;NDV强毒株的分离鉴定与复合新城疫蜂胶灭活疫苗的研究[D];中国农业大学;2004年
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9 邓明俊;新城疫病毒F基因真核表达质粒的构建及动物免疫试验[D];西北农林科技大学;2003年
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