香石竹抗衰老遗传转化主要影响因素的研究

【摘要】： 以香石竹的愈伤组织和下胚轴为受体材料，分别采用农杆菌介导法和基因枪介导法进行遗传转化，探讨各个影响因子，建立了稳定高效的遗传转化体系，筛选出抗性愈伤组织和抗性芽，最终获得转化的再生植株。对转化体进行了Gus（B-Glurcuronidase）活性检测和PCR（Polymerase Chain Reaction）检测，结果均呈现阳性，证明外源基因EFE （Ethylene Formation Enzyme）已在抗性愈伤和植株中整合并表达。本研究得出如下结论： 1.建立高效香石竹再生体系的最佳培养基为诱导培养基MS_3：MSZ+2.4-D0.1mg/L+BA0.2mg/L；分化培养基MS_5：MSZ+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L；生根培养基MSR_2：1/2MS+IBA1.0mg/L+GA_30.1mg/L+AC0.8mg/L。 2.适合的农杆菌转化因子菌液浓度5X，共培养时间3d、受体材料为愈伤组织。 3.基因枪转化的优化参数组合轰击压力1100Psi，轰击距离6cm的组合。 4.两种方法转化的受体都有卡那霉素抗性，在选择培养基上生长良好。并有抗性不定芽的分化及再生植株的形成。 5.两种方法转化的转化体均检测出Gus基因活性，PCR检测结果呈阳性，从分子水平证明外源基因已在转化体中整合。

【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：S681.5

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	【引证文献】
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前2条

1	王伟;黄瓜衰老过程中叶绿素降解相关酶基因cDNA片段的克隆与表达初步研究[D];华中农业大学;2011年
2	陈旭;根癌农杆菌介导的中国石竹遗传转化体系的建立及几丁质酶基因的导入[D];西南大学;2006年

	【参考文献】
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前10条

1	韩卫民;香石竹切花在衰老过程中乙烯生物合成的变异[J];北方园艺;1995年05期
2	苏焕然，张丹，汪清胤，黄永芬;花卉基因工程研究进展[J];北方园艺;1996年04期
3	姚瑞亮,关雄,李杨瑞,陈如凯;植物激素乙烯的分子生物学研究进展[J];广西农业生物科学;1999年02期
4	刘春林，阮颖，董延瑜;转基因实验中愈伤组织受体培养和工厂化扩增技术[J];湖南农学院学报;1994年06期
5	李宝健,欧阳学智,许耀;应用农杆菌Ti质粒系统将外源基因转入籼稻细胞研究[J];中国科学(B辑化学生命科学地学);1990年02期
6	李宝健,许新萍,石和平,柯遐义;应用电注射法将外源基因导入水稻种胚及获得转基因水稻植株研究[J];中国科学(B辑化学生命科学地学);1991年03期
7	李慧芬，张晓明，宋凤斌，李殿申;农杆菌及基因枪在禾谷类作物遗传转化中的应用[J];吉林农业科学;1998年02期
8	汤福强,刘愚,施教耐,白永延,毛慧珠,洪熠,D.VanDerStraeten;ACC合酶基因及其反义基因转化番茄获得转基因植株[J];科学通报;1994年24期
9	陈瑛，黄永芬，汪清胤;用反义技术解决番茄保鲜的研究进展[J];生物化学与生物物理进展;1996年02期
10	叶健明,唐克轩,沈大棱;植物转基因方法概述[J];生命科学;1999年02期

	【共引文献】
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前10条

1	刘金元,时香玉,陈晓,曾昭海,周柱华,陈建爱,王兴军;利用基因枪技术转化小麦、玉米的研究[J];山东农业科学;1999年02期
2	王升吉,尚佑芬,杨崇良,李长松,赵玖华,吴元华,刘忠智;基因转化技术在大豆育种上的应用现状[J];山东农业科学;2000年02期
3	薛炳烨,束怀瑞;应用基因工程改良果实成熟特性研究进展[J];山东农业科学;2002年04期
4	赵志文,崔德才;生物技术在三叶草遗传育种研究中的应用[J];山东农业科学;2005年02期
5	刘香玲,王玉珍,罗景兰;水稻成熟胚愈伤组织的诱导和分化因素的研究[J];山东农业科学;2005年05期
6	刘玲绯;方晨;许文一;周德茂;姜长阳;;长蕊丝石竹组织培养及无性系的建立[J];山东农业科学;2008年08期
7	张晓东;李利斌;宋宜现;李化银;刘立峰;高玲;高建伟;;大白菜高效稳定遗传转化体系的建立[J];山东农业科学;2010年02期
8	于德;;不同保鲜剂对非洲菊切花保鲜的研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年09期
9	余前媛;;百合切花化学保鲜研究进展综述[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年21期
10	向太和,倪大虎,张盘娣,吴家道,杨剑波,贾士荣;抗菌肽Shiva A基因导入杂交水稻恢复系明恢63的初步研究[J];安徽农业科学;1999年06期

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前10条

1	郭韬;吕长平;栾爱萍;刘湘平;;非洲菊采后生理及冷藏保鲜技术的研究进展[A];园艺学文集5[C];2010年
2	常尚连;张立宾;;农杆菌介导西瓜转基因提高糖度的研究[A];山东园艺学会第七次会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2011年
3	马慧;赵开军;徐正进;;含芥菜几丁质酶基因的双元表达载体的构建[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
4	高方远;王宗阳;李浩杰;陆贤军;任光俊;;反义Wx基因导入杂交籼稻保持系[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
5	彭镇华;汪政科;;观赏植物基因工程研究进展[A];中国花卉科技进展——第二届全国花卉科技信息交流会论文集[C];2001年
6	包满珠;林荣呈;余义勋;张俊卫;陈龙清;孙振元;;香石竹分子育种研究进展[A];中国花卉科技进展——第二届全国花卉科技信息交流会论文集[C];2001年
7	陈建勋;许志强;廖毅;刘伟;;乙烯和脱落酸在姜花切花衰老中的作用[A];中国园艺学会成立70周年纪念优秀论文选编[C];1999年
8	杨广东;李艳娥;上官晓霞;;大白菜遗传转化系统优化的研究[A];中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文集[C];2000年
9	吴成钢;杨柏去;罗丽萍;蔡奇英;;试管植物玻璃化的产生及防治[A];植物组织培养与脱毒快繁技术——全国植物组培、脱毒快繁及工厂化生产技术学术研讨会论文集[C];2001年
10	王浩波;高秀武;郭金华;程国旺;吴李君;余增亮;;低能离子束介导南瓜DNA转化西瓜及转化后代的研究[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年

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前10条

1	马进;水稻条纹病毒（RSV）RNA3、RNA4的克隆与抗RSV转基因水稻的培育[D];山东农业大学;2011年
2	张来;竹节参离体培养与鲨烯合酶（squalene synthase，SS）基因的克隆及代谢研究[D];西南大学;2011年
3	郝金凤;无载体无选择标记转基因耐贮藏甜瓜的培育[D];内蒙古大学;2010年
4	石凤敏;蒙古冰草MwLEA3基因功能研究及MwRRT基因的克隆[D];内蒙古农业大学;2011年
5	田露申;甘蓝型油菜异源白花性状的遗传及相关基因的克隆与分析[D];四川农业大学;2011年
6	宋小勇;园艺产品真空预冷过程温度检测与品质变化研究[D];上海交通大学;2011年
7	刘峰;八仙花和艳果金丝桃再生与遗传转化体系研究[D];华中农业大学;2011年
8	苏晶;采后苹果果实机械伤诱导的抗病性机理研究[D];南京农业大学;2011年
9	郝征;农杆菌介导的枣树遗传转化研究[D];河北农业大学;2012年
10	包永霞;转DREBIA基因和转BADH-CMO基因多年生黑麦草矮化机理与抗逆性研究[D];北京林业大学;2012年

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前10条

1	魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
2	卢小三;两个杨树无性系再生体系的建立及抗虫基因Cry1C+9C转化的初步研究[D];华中农业大学;2010年
3	王长宪;利用基因工程创造香樟抗寒树种新种质技术研究[D];山东农业大学;2009年
4	闻小霞;甜瓜果实蔗糖合成酶基因（SS）的克隆、表达分析及遗传转化[D];山东农业大学;2010年
5	杨科家;元宝枫叶色、叶形与翅果的变异研究[D];山东农业大学;2010年
6	程明珠;杨树优良无性系再生体系的建立及转Bt基因的研究[D];安徽农业大学;2010年
7	颉瑞霞;油用亚麻（胡麻）再生体系和农杆菌介导的遗传转化体系研究[D];甘肃农业大学;2010年
8	赵鑫;特异性启动子调控ACC氧化酶反义基因载体构建及对甜瓜‘玉金香’的转化[D];甘肃农业大学;2010年
9	庄志扬;农杆菌介导玉米幼胚遗传转化研究[D];甘肃农业大学;2010年
10	孙琦;水稻OsCOI基因表达载体构建及其遗传转化[D];甘肃农业大学;2010年

	【同被引文献】
	【同被引文献】

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前10条

1	王卜琼,李枝林;我国花卉育种现状及对策[J];安徽农业科学;2004年06期
2	高疆生,张卫芳,段黄金,赵书珍;克服香石竹试管苗玻璃化研究[J];北方园艺;2001年03期
3	周相娟,姜微波,胡小松,周立刚;赤霉素和乙烯对香菜叶片衰老的影响[J];北方园艺;2003年03期
4	王志坤;秦智伟;周秀艳;;挂蔓黄瓜果实成熟衰老鉴定指标的筛选[J];东北农业大学学报;2010年08期
5	饶景萍,任小林;果实成熟过程中组织超微结构的变化[J];西北植物学报;1997年01期
6	孙艳;梁宇柱;陈敬东;丁勤;徐伟君;徐向东;;黄瓜叶片衰老过程中抗坏血酸含量与生理指标关系的研究[J];西北植物学报;2008年03期
7	郭素枝;高华娟;王湘平;;含笑花被片发育和衰老过程中细胞超微结构的变化[J];电子显微学报;2009年05期
8	严波;陈国平;胡宗利;罗敏;陈绪清;;滞绿突变体的研究现状及应用前景[J];重庆大学学报(自然科学版);2007年07期
9	林河通;橄榄果实采后呼吸变化和外源乙烯处理的生理效应[J];福建农业大学学报;1997年04期
10	刘振威;孙丽;刘宏;李新峥;;南瓜自交系及其杂交组合叶绿素变化规律分析[J];贵州农业科学;2009年09期

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前10条

1	奚亚军;叶片衰老抑制基因P_（SAG12）-ITP转化小麦的研究[D];西北农林科技大学;2002年
2	曹慧;水分胁迫诱导苹果属植物叶片衰老机理的研究[D];中国农业大学;2003年
3	王阳光;采后青梅果实叶绿素降解机制及保绿措施的研究[D];浙江大学;2003年
4	张玉;水杨酸对采后猕猴桃果实成熟衰老的调控及其机理研究[D];浙江大学;2004年
5	沈法富;短季棉衰老的激素变化及衰老相关基因的克隆[D];中国农业科学院;2004年
6	赖齐贤;基因枪介导P_（SAG12）-IPT基因转化非洲菊及其抗衰老机理的研究[D];浙江大学;2006年
7	朱树华;一氧化氮对草莓和肥城桃果实成熟衰老的调控机理研究[D];山东农业大学;2006年
8	宋美珍;短季棉早熟不早衰生化遗传机制及QTL定位[D];中国农业科学院;2006年
9	张鹏;黄瓜叶片衰老过程中内肽酶变化及其生化特性的研究[D];南京农业大学;2006年
10	王家保;采后荔枝果皮衰老过程中生理变化与基因差异表达分析[D];华南热带农业大学;2007年

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前10条

1	陆万香;根癌农杆菌介导几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因转入甘蓝型油菜[D];西南农业大学;2001年
2	鲁秀敏;农杆菌介导棉花胚性愈伤转化体系的建立及转AFP-SPCEMA基因棉花的获得[D];西南农业大学;2003年
3	李晶;马铃薯再生体系的建立及遗传转化的研究[D];东北农业大学;2003年
4	杨树华;石竹自交系的初步选育与花药培养的研究[D];华中农业大学;2003年
5	徐幸福;桂花切花花瓣衰老过程中的蛋白质变化分析[D];华中农业大学;2003年
6	程正渭;桂花花瓣衰老过程的生理生化及细胞学初步研究[D];华中农业大学;2003年
7	曾雪嘉;转不同抗菌肽和几丁质酶基因烟草的抗病性研究[D];西南农业大学;2004年
8	彭晓莉;叶片衰老抑制基因P_(SAG12)-IPT转化马铃薯的研究[D];甘肃农业大学;2005年
9	田长河;1-MCP处理对柿果实成熟衰老过程中超微结构变化的影响[D];西北农林科技大学;2005年
10	兰海波;萘乙酸（NAA）对盆栽冬红果衰老的影响[D];河北农业大学;2006年

	【二级引证文献】
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前2条

1	吴萍;金山绣线菊遗传转化体系的建立[D];东北林业大学;2011年
2	李春水;转AtDREB1A基因地被菊花杂交后代新材料选育[D];东北林业大学;2010年

	【二级参考文献】
	【二级参考文献】

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前10条

1	郑志亮;花卉作物的花色基因工程[J];北方园艺;1994年03期
2	刘春林，董延瑜;美味猕猴桃遗传转化研究初报[J];湖南农学院学报;1994年03期
3	田煦，熊兴耀，尹邦奇;鲜切花衰老机理及保鲜技术研究进展[J];湖南农业大学学报;1995年04期
4	蒋爱风,姚连芳,王鹏辉,曹信;PP_(333)促进金鱼草开花效果初探[J];河南职技师院学报;1993年04期
5	蒋兴邨,邵启全,周泽其,王连铮,尹光初,雷勃钧;含T-DNA大豆细胞系的建立[J];中国科学(B辑化学生物学农学医学地学);1985年11期
6	刘博林,岳绍先,胡乃璧,李小兵,翟文学,李诺,朱荣焕,朱立煌,毛大璋,周佩珍;龙葵Atrazine抗性基因向大豆叶绿体的转移及在转基因植株中的表达[J];中国科学(B辑化学生命科学地学);1989年07期
7	李宝健,欧阳学智,许耀;应用农杆菌Ti质粒系统将外源基因转入籼稻细胞研究[J];中国科学(B辑化学生命科学地学);1990年02期
8	吴世宣,赵淑珍,张春霞,王革娇,杨希才,王昕,田波;通过卫星核糖核酸的表达获得的抗黄瓜花叶病毒的烟草基因工程植株[J];科学通报;1988年06期
9	胡天华,吴琳,刘玮,米景九,潘乃穟,陈章良;黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因的cDNA克隆和全序列测定及比较[J];科学通报;1989年21期
10	汤福强,刘愚,施教耐,白永延,毛慧珠,洪熠,D.VanDerStraeten;ACC合酶基因及其反义基因转化番茄获得转基因植株[J];科学通报;1994年24期

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前10条

1	续勇波,郑毅,刘宏斌,张维理;保护地香石竹干物质积累和养分吸收特性研究[J];北方园艺;2004年04期
2	黄坤,于莲,李视水;切花香石竹的栽培技术[J];吉林蔬菜;2005年04期
3	包志毅;;国外香石竹生产、消费和技术进展[J];中国花卉盆景;1992年01期
4	雷毅,杨晓东;香石竹干花加工技术[J];农村新技术;1995年11期
5	辛通美,付德玲,隋振宏;康乃馨的栽培技术[J];吉林农业;2001年10期
6	包志毅 ,黄哲;1991—1998年美国切花香石竹产销情况[J];中国花卉园艺;2002年13期
7	林大维;香石竹新品种“林隆2号”、“林隆3号”[J];中国花卉园艺;2004年20期
8	黄雪龙;切花香石竹栽培技术[J];中国花卉园艺;2005年10期
9	张昌俊;;香石竹扦插繁苗技术[J];新农村;2007年01期
10	谭小勇;付建峰;;矮化香石竹[J];园林;2007年05期

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前10条

1	王明轩;范利花;段良飞;李池丽;段军雄;官会林;高旭红;;香石竹植物伤流液及其中有机成分的提取研究[A];战略性新兴产业的培育和发展——首届云南省科协学术年会论文集[C];2011年
2	王明元;蔡新育;;不同瓶插液对‘俏新郎'香石竹保鲜效果的影响[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
3	史娟;李剑婷;;宁夏花卉种植区发现香石竹孔雀眼斑病[A];第二次全国植物抗病虫和病害流行与控制学术研讨会论文集[C];2010年
4	徐同;;水培系统中香石竹镰刀菌枯萎病生物防治[A];全国生物防治学术讨论会论文集[C];1991年
5	罗焕荣;何郁如;李宗湘;陈德华;罗望村;;广州地区香石竹扦插繁殖研究初报[A];花卉研究20年——广东省农业科学院花卉研究所建所20周年论文选集（1984-2004）[C];2004年
6	罗焕荣;肖建成;;香石竹的引种栽培试验[A];花卉研究20年——广东省农业科学院花卉研究所建所20周年论文选集（1984-2004）[C];2004年
7	高旭红;何松涛;官会林;唐蜀昆;李文均;陈晓波;;香石竹设施栽培根际土壤微生物区系的16S rRNA系统遗传多样性分析[A];战略性新兴产业的培育和发展——首届云南省科协学术年会论文集[C];2011年
8	包满珠;林荣呈;余义勋;张俊卫;陈龙清;孙振元;;香石竹分子育种研究进展[A];中国花卉科技进展——第二届全国花卉科技信息交流会论文集[C];2001年
9	孔宝华;蔡红;范静华;王辉;付小萍;李凡;陈海如;杨泮川;;云南省香石竹病害的种类和发生概况分析[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
10	武雯;蔡友铭;邹惠渝;黄敏仁;;利用RAPD分子标记研究中国石竹与香石竹的遗传多样性[A];第六届全国系统与进化植物学青年学术研讨会论文摘要集[C];2000年

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前10条

1	柏斌;云南香石竹又出新花样[N];中国花卉报;2004年
2	柏斌　;培育大花香石竹新品　[N];中国花卉报;2003年
3	薛守纪;盆栽香石竹[N];中国花卉报;2004年
4	上海黄桂华;香石竹冬春季扦插[N];中国花卉报;2005年
5	陈云芬;香石竹育种技术国内领先[N];云南日报;2008年
6	柏斌;云南省农科院育成大花香石竹新品种[N];中国绿色时报;2004年
7	山东翟洪民宋在江;香石竹三大病害防治[N];中国花卉报;2005年
8	上海林木花卉育种中心;盆栽香石竹新品种选育相关技术开发[N];中国花卉报;2006年
9	华中农业大学王捷整理;转基因延长香石竹瓶插期[N];中国花卉报;2006年
10	山东省沂水县职教中心侯和菊;冬春扦插香石竹[N];河北科技报;2007年

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前10条

1	余义勋;根癌农杆菌介导的ACC氧化酶基因转化香石竹的研究[D];华中农业大学;2004年
2	赵明富;我国一些Potyvirus属和Carlavirus属成员的鉴定和分子变异研究[D];浙江大学;2003年
3	吴姗;农杆菌及基因枪介导的茶树外源基因导入体系优化研究[D];浙江大学;2004年
4	齐春辉;日本结楼草（Zoysia japonica Steud.）植株再生体系建立与DREB1A基因转化研究[D];北京林业大学;2005年
5	吴延军;桃组织培养及遗传转化的研究[D];浙江大学;2004年
6	李南羿;利用转录因子OsiWRKY和OPBP1基因提高水稻抗病及耐盐性研究[D];浙江大学;2005年
7	陈智勇;外源基因转化冷季型草坪草培育抗除草剂、抗旱新种质的研究[D];湖南农业大学;2006年
8	王洪利;桑树转水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Oryzacystatin）基因的研究[D];浙江大学;2002年
9	王华;酿酒葡萄遗传转化体系的建立及抗病基因双价表达载体的构建[D];西北农林科技大学;2003年
10	张云;N-酰基乙醇胺延缓香石竹切花（Dianthus caryophyllus L.）衰老机理的研究[D];南京农业大学;2006年

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前10条

1	葛欣;香石竹抗衰老遗传转化主要影响因素的研究[D];东北农业大学;2000年
2	曾海涛;靛蓝基因表达载体的构建及香石竹CHS启动子克隆研究[D];南京林业大学;2004年
3	张浩;棉花茎尖基因枪—农杆菌转化体系的建立和GLU-CHI基因的导入[D];西南农业大学;2002年
4	张燕琴;切花菊和香石竹采后主要衰老生理特性研究[D];浙江大学;2004年
5	黄宇翔;无病毒香石竹（Dianthus caryophyllus L.）组培玻璃化控制研究[D];福建农林大学;2005年
6	耿福建;8-HQ，Al_2(SO_4)_3和SA对切花月季、香石竹和菊花延缓衰老的影响[D];天津大学;2012年
7	苏晓瑜;香石竹再生体系的建立及根癌农杆菌介导的遗传转化体系的研究[D];西南大学;2007年
8	房立晶;香石竹的离体培养与试管开花研究[D];西南大学;2008年
9	张晓宁;香石竹种质资源小滴玻璃化法超低温保存技术研究[D];华中农业大学;2011年
10	周春丽;海藻糖合酶基因转化佛手（Citrus medica L.var.sarcodactylis）方法的研究[D];西北农林科技大学;2005年

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