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《东北农业大学》 2001年
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农杆菌介导的大豆遗传转化研究

刘昭军  
【摘要】: 根据农杆菌转化和大豆子叶节再生系统的特点,对大豆子叶节农杆菌转化系统进 行优化,并成功地将Bt抗虫基因(cryLA)导入大豆,转基因植株进行了PCR及PCR- Sorthem杂交的检测,结果4个株系均呈现阳性,证明Bt抗虫基因已整合到受体大豆 的基因组内。 1.以三个品种的大豆子叶节为外植体进行子叶节再生系统的优化,结果表明: MS培养基在提高不定芽产生方面明显高于B5BA及MS培养基,三种发芽培养 基B5BA、B5、琼脂水培养基发芽实验对不定芽诱导效果表明:BA的添加在发芽阶 段即对不定芽产生有明显影响。通过优化,MMS培养基中BA、NAA、脯氨酸的最 适浓度分别为2mg/l、0.02mg/l、2g/l。大豆子叶节外植体上子叶的数目影响不定芽的 产生,以1/2个子叶产生的不定芽为最多。 2.以发芽7天的大豆无菌苗下胚轴切段为外植体,以抗性愈伤为指标,对影响大豆 子叶节转化的几个因素进行优化,结果表明: 感染农杆菌之前,在高渗培养基上予培养一段时间能提高转化效率,最适予培养 时间为1d。农杆菌感染和共培养阶段的AS浓度与PH值均对大豆的转化频率有明显 影响,PH值以5.4~5.6为宜、大于5.8时转化效率明显下降,AS最佳浓度为100μM. 感染农杆菌后外植体经适当时间的超声波处理,明显提高转化频率,处理时间以60 秒为最佳。外植体的年龄影响大豆转化频率,以1周苗龄无菌苗的子叶节外植体转化 频率为最高。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S565.103.5

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
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【参考文献】
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【同被引文献】
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