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《东北农业大学》 2001年
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猪细小病毒VP2基因克隆及伪狂犬病毒转移载体的构建

李昌文  
【摘要】: 猪细小病毒(PPV)与伪狂犬病毒(PrV)是引起猪繁殖障碍的两个主要病原。PPV 和PrV引起的疾病在我国有很高的感染率和发病率,给我国的养猪业造成了巨大的经济 损失。传统的常规疫苗对防制PPV和PrV的感染有一定的效果,但是存在不可避免的缺 陷,为了更好的控制PPV和PrV感染,研制更加安全有效的PPV-PrV二价基因工程疫 苗是解决这一问题的最好途径。 本实验分离得到了一株PPV新毒株,从病原学、血清学、分子生物学等几个方面对 其进行了鉴定,将其命名为SY-99株然后提取该病毒DNA,以之为模板,利用PCR技术 扩增其主要免疫原性基因即VP2基因,将VP2基因克隆到从酵母表达载体PpicZ α-B 上,为研制PPV重组亚单位疫苗打下了基础。 通过序列分析,表明PPV VP2基因由1740个碱基组成,编码580个氨基酸。利用 DNAsis、GeneDoc分析软件分析SY-99株VP2基因序列,并分别比较SY-99株与 NADL-2(4973)株、NADL-2(5075)株、Kresse株、US-1株VP2基因核苷酸与氨基 酸同一性。结果显示PPV SY-99株VP2基因与NADL-2(4973)株、NADL-2(5075)株、 Kresse株、US-1株的核苷酸序列同一性分别为99.2%、99.3%、99.5%、99%;PPV SY-99 株与NADL-2(4973)株、NADL-2(5075)株、Kresse株、US-1株VP2基因编码的氨基 酸同一性分别为98.1%、98.3%、98.8%、96.6%,表明PPV SY-99株与Kresse株VP2基 因的同源性最高,提示PPV SY-99株与Kresse株的病毒特性可能有相似之处。 以质粒PCR3-uni为模板,利用PCR技术扩增跨越人巨细胞病毒(CMV)极早期启 动子和牛生长激素基因(BGH)polyA信号基因片断,然后将其克隆到经AccI酶切处理 后的载体PTA上,得到了通用伪狂犬病毒表达载体pBdTK,将PPV SY-99株VP2基因 亚克隆到pBdTK上,同时在TK同源臂上加上荧光素酶报告基因盒,得到了含有PPV VP2 基因的PrV转移质粒。为构建表达PPV VP2基因的重组伪狂犬病毒从而研制PPV-PrV 二价基因工程疫苗打下了基础。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S852.65

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【参考文献】
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【同被引文献】
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