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《东北农业大学》 2002年
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大白菜转芜菁花叶病毒外壳蛋白基因的研究

马伟  
【摘要】: 大白菜是人们喜爱的大众蔬菜。而以芜菁花叶病毒(TuMV)为主的大白菜病害一直没有得到很好解决。蔬菜遗传转化可以利用的目的基因很多,但在大白菜转基因方面研究工作却很少。利用农杆菌介导法转化大白菜抗病基因的研究工作在国内外未见报道。本课试验采用农杆菌介导法将TuMV-CP基因导入大白菜中,建立了高效的大白菜离体再生、遗传转化体系,并对转基因植株进行分子生物学检测,证实得到的再生植株为转基因植株,目的基因已在部分植株上表达。同时,对转基因植株的后代进行检测,分析该基因所控制性状的遗传稳定性以及基因表达情况,为大白菜基因工程抗病育种提供理论依据。 试验得到结论如下: 1.建立了高效的大白菜离体再生体系 5日龄的大白菜二牛心品种的子叶,置于诱导芽分化的培养基(MS+5mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+5mg/L AgNO_3)上,诱导不定芽数最多。置于生根培养基(1/2MS+0.2mg/L IBA),生根效果好,得到的再生植株多。 2.建立了大白菜遗传转化体系。 a.确立了大白菜转化过程中筛选剂及抑菌剂的种类及浓度。筛选剂为卡那霉素,最适筛选浓度为10mg/L;头孢曲松那的抑菌效果最好,最适浓度为300~500mg/L。 b.确立了农杆菌介导转化过程中基因型是影响转化率的主要因素。通过极差分析,基因型为“二牛心”,菌液浓度15倍的,外植体为子叶,感染方法为浸泡法是最佳的组合。农杆菌与外植体共培养的时间为28h。 c.试验表明所用的四个大白菜品种,品种“二牛心”子叶再生频率较高,品种“东农901”下胚轴再生频率较高。 d.比较了R1000与EHA105介导转化对抗性芽的影响:发根杆菌在浸染外植体时得到的抗性芽较多,得到的转基因植株相对少。而根癌农杆菌浸染外植体时得到抗性芽相 马 伟 摘 要2002年5月 对少,得到的转基因植株相对多。 3.获得了大白菜抗病转基因植株。 大白菜转基因植株TO代,经PCR、PCR-Southern检测己证实导入目的基因己整合 到植物基因组中,得到转基因植株15株己完全整合,但经RTNR检测,只有12株表 达,证明一部分植株中有基因沉默现象。大白菜转基因植株乃代,经PCR、PCRSouthl 检测,后代有分离现象,分离比例趋于3:l,符合盂德尔分离规律。 4.接病毒实验 经病毒接种试验表明:转基因*代植株接种hlMv病毒后,发病率和病情指数明 显低于对照品种。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S432.41

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
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9 马慧;赵开军;徐正进;;含芥菜几丁质酶基因的双元表达载体的构建[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
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1 耿小丽;苜蓿单倍体、纯合四倍体的诱导及愈伤组织DNA含量变异的研究[D];甘肃农业大学;2010年
2 孙国清;不同抗虫棉品种杀虫蛋白表达研究及影响抗虫性分析[D];新疆农业大学;2010年
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4 刘宏波;甘蓝型油菜抗病虫基因遗传转化及转基因植株抗性鉴定的研究[D];浙江大学;2010年
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7 刘缙;银杏种仁抗菌蛋白基因工程研究及小麦胚乳特异启动子的鉴定和评估[D];西北农林科技大学;2010年
8 王丽丽;大白菜核基因雄性不育系定向转育及分子标记辅助育种研究[D];沈阳农业大学;2010年
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10 马进;水稻条纹病毒(RSV)RNA3、RNA4的克隆与抗RSV转基因水稻的培育[D];山东农业大学;2011年
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1 王瑞文;紫薇开花生物学特性及杂交育种的初步研究[D];华中农业大学;2010年
2 张帆;dsRNA介导的番木瓜环斑病毒(PRSV)的抗病性研究[D];华中农业大学;2010年
3 付雪林;转Bt基因甘蓝的抗虫性研究[D];华中农业大学;2010年
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6 魏仕伟;番茄抗青枯病自交系选育及其杂交配组试验[D];华中农业大学;2010年
7 秦华伟;黄瓜再生体系的建立及耐热材料的筛选[D];华中农业大学;2010年
8 刘鹍;苦瓜单倍体诱导的初步研究[D];华中农业大学;2010年
9 侯萌萌;烟草茄尼醇合成途径中dxps基因的克隆与表达[D];郑州大学;2010年
10 徐娟;农杆菌介导的Ac/Ds转座系统转化甘蓝型油菜的研究[D];郑州大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王芙蓉;张传云;刘国栋;刘任重;刘勤红;张军;;利用花粉管通道技术创造棉花变异种质及其SSR标记分析[J];山东农业科学;2006年01期
2 侯丽霞;何启伟;卜丽霞;王崇启;董玉梅;焦自高;;花粉管通道法转化甜瓜自交系的技术研究初报[J];山东农业科学;2007年03期
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中国博士学位论文全文数据库 前5条
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【二级引证文献】
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【二级参考文献】
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4 本报记者 李竞立 刘云;安宁农民种出“巨型”大白菜[N];云南日报;2007年
5 本报记者 刘丽娜;胶州大白菜品牌成就规模[N];青岛日报;2009年
6 李荣云;大白菜贮藏措施[N];中国特产报;2004年
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8 魏雅华;评“卖彩电不如卖大白菜”[N];中国信息报;2003年
9 记者张悦;货源紧俏 今秋大白菜价格有点高[N];新农村商报;2009年
10 河北省农科院经作所 戴素英;大白菜受冻后说“捆菜”[N];河北科技报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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10 屈淑平;结球白菜软腐病菌致病过程中基因表达序列标签(EST)分析[D];东北农业大学;2003年
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3 阎瑾琦;大白菜抗芜菁花叶病毒病基因的RAPD分子标记研究[D];中国农业科学院;2000年
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