唐菖蒲常见品种RAPD分析
【摘要】:
本文从生物学特性、同工酶标记和RAPD分子标记三方面对12份常见的唐菖蒲品种进行了系统研究和探讨。结果如下:
(1)通过对唐菖蒲12个品种生物学特性的研究,发现唐菖蒲存在同名异物现象,分类不科学,亲缘关系不清等现象。
(2)用唐菖蒲种球中提取的同工酶分析表明:过氧化物同工酶谱带效果最好,但多态性差;过氧化氢同工酶其次,多态性好于过氧化物同工酶;酯酶同工酶效果不好。
(3)利用改良的SDS法提取DNA效果很好,RAPD反应时,DNA模板中RNA对扩增结果无影响,SDS、氯仿、异丙醇等小分子物质对扩增结果有干扰作用。优化的RAPD体系为;反应总体积25ul,其中含10倍扩增缓冲液2.5ul,Mg~(2+)2m mol/1,dNTP为150umol/1,引物为0.4u mol/1,基因组DNA为20ng,Taq酶1U,其他成分为无菌双蒸馏水。优化的程序为:94℃ 10min 1个循环:94℃ 30s,37℃ 60s,72℃ 90s 40个循环;72℃ 5rmin 1个循环;4℃保存。用筛选出的26个引物对12个唐菖蒲进行了RAPD分析,共得到164条谱带,其中多态带为151条,多态百分率为92.1%。以遗传相似度0.660为阈值,经UPGMA聚类分析共分为4类,其结果与传统分类方法有一定的差距。
【关键词】:唐菖蒲 同工酶 RAPD 【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S682.24
【目录】:
- 中文摘要5-6
- 英文摘要6-7
- 1 前言7-16
- 1.1 研究现状8-15
- 1.1.1 唐菖蒲生物学特性及形态学研究8-9
- 1.1.2 同工酶标记9-10
- 1.1.3 DNA分子标记10-15
- 1.2 研究目的和意义15-16
- 2 材料与方法16-26
- 2.1 试验材料16
- 2.2 试验方法16-26
- 2.2.1 生物学特性16-17
- 2.2.2 同工酶标记17-19
- 2.2.3 RAPD标记19-26
- 3 结果与分析26-40
- 3.1 唐菖蒲生物学特性及形态学研究26-28
- 3.2 同工酶标记28
- 3.3 RAPD标记28-40
- 3.3.1 唐菖蒲DNA的提取28
- 3.3.2 最优化反应条件的研究28-29
- 3.3.3 引物的筛选29-31
- 3.3.4 扩增条带分析31-36
- 3.3.5 唐菖蒲RAPD分析36-40
- 4 讨论40-43
- 4.1 唐菖蒲生物学特性40
- 4.2 唐菖蒲同工酶标记40
- 4.3 RAPD标记40-43
- 4.3.1 RAPD可靠性的研究40-41
- 4.3.2 DNA的提取41
- 4.3.3 RAPD最优化反应条件41-43
- 5 结论43-44
- 5.1 生物学特性43
- 5.2 同工酶标记43
- 5.3 RAPD标记43-44
- 参考文献44-48
- 图版说明48-52
- 图版52-62
- 致谢62
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