收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

PRRSV LV毒株N基因克隆与原核表达的研究

刘永刚  
【摘要】: 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)于20世纪80年代中期在世界上首次被发现,此病每年给世界的养猪业造成的世界损失达几十亿美元,间接损失难以计算.我国于1996年首次分离到PRRS病毒,最近几年,该病在我国的发病率呈明显上升趋势,给我国的养猪业仅2000年直接损失达几十亿元人民币,间接损失难以估计,使我国的养猪业的遭受到极大的打击,尤其,最近几年,有的现地反应,在应用PRRSV疫苗后,效果不理想,母猪和仔猪仍有发病,提示我们,国内可能存在PRRSV的变异株或有PRRS欧洲型的存在。本研究以期利用分子生物学方法获得一种PRRSV LV毒株的检测抗原,为我国猪群PRRSV流行病学调查及猪群检疫提供一种成本低、敏感性高和特异性好的诊断试剂。 本研究根据GenBank发表的PRRSV LV毒株的基因序列,设计了一对扩增PRRSV LV毒株N基因的一对引物,利用RT-PCR方法,从PRRSV LV毒株的细胞培养物中成功的扩增出PRRSV LV毒株的N基因,该基因全长387碱基,与国际PRRSV欧洲型毒株的N基因序列的同源率为100%;随后,将该基因与原核表达载体pGEX-6P-1连接,然后转化到宿主菌BL21中进行表达。结果证实;PRRSV LV N基因成功地进行了原核表达,表达的目的蛋白占菌体总蛋白含量的20.8%。本实验的完成,为PRRS欧洲型的诊断抗原的制备及为我国猪群PRRSV欧洲型流行病学调查及猪群检疫提供一种成本低、敏感性高和特异性好的诊断试剂奠定了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘永飞;黄金海;梁智选;李秀梅;杨爱华;郭立力;;荧光定量PCR技术检测PRRS变异病毒的研究[J];畜牧兽医科技信息;2011年08期
2 李金磊;王亚宾;崔保安;陈丽颖;张红英;李珂珂;魏战勇;;猪传染性胃肠炎病毒SYBR-Green I荧光定量PCR检测方法的建立[J];河南农业大学学报;2011年03期
3 周莉;刘志杰;曾智勇;汤德元;李谦;王彬;张晓杰;甘振磊;王凤;;犬瘟热病毒N基因原核表达质粒的构建[J];贵州农业科学;2011年07期
4 陈友贵;;猪繁殖与呼吸障碍综合征流行及防控[J];内江科技;2011年09期
5 杨巍;李广兴;孟凡丹;王鑫;任晓峰;;猪流行性腹泻病毒N基因的克隆及原核表达[J];东北农业大学学报;2011年06期
6 吴金梅;胡迎利;郑保军;郭良兴;;柴胡解毒注射液的制备及体外抗PRRSV作用试验[J];河南畜牧兽医(综合版);2010年06期
7 张磊;韩明远;王建华;宁宜宝;陈坚;;感染强、弱PRRSV毒株的Marc-145细胞差异基因文库的构建[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2011年07期
8 许信刚;赵红妮;童德文;;表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建及动物免疫试验[J];畜牧兽医学报;2011年07期
9 吴金梅;江青东;胡迎利;;柴胡解毒注射液体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒试验[J];中国兽医杂志;2011年06期
10 杨平;吴德;车炼强;方正锋;林燕;谯仕彦;李勇;曾毅;苏祥;;饲粮添加L-精氨酸或N-氨甲酰谷氨酸对感染PRRSV妊娠母猪繁殖性能及免疫功能的影响[J];动物营养学报;2011年08期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王金凤;张岭岭;王娇;赵泽坤;孙继国;袁万哲;;高致病性PRRSV河北地方株的分离鉴定及部分Nsp2基因变异分析[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
2 韩庆安;朱振荣;张永辉;张子佳;刘红;尹克勇;杨刚;王玉清;;2004~2008年河北省规模猪场PRRSV感染情况调查[A];2010畜牧业与低碳经济科技论文集[C];2010年
3 钱洪喜;文心田;曹三杰;黄小波;;美洲型PRRSV N基因毕赤酵母表达载体的构建及表达研究[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
4 夏平安;李艳伍;张红英;杨霞;崔保安;卢中华;;猪繁殖与呼吸综合征和猪流感复合RT-PCR诊断方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
5 蒋文明;姜平;李玉峰;吴胜昔;许家荣;;由减毒沙门氏菌介导的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)DNA疫苗的口服免疫应答[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
6 文明;毛君婷;史开志;周碧君;王开功;;贵州省猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学调查[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
7 张冲;赵钦;孔宁;黄柏成;杜永坤;张昂克;孙鹏;刘洪亮;高继明;姬鹏超;王向鹏;周恩民;;新型PRRSV细胞受体阻断蛋白在猪体内阻断作用初探[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
8 韩先杰;王金宝;王宏伟;;猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)TCID_(50)的测定[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
9 陈义平;刘秀梵;;PRRSV的免疫生物学特性[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
10 张祯涛;王金宝;周顺;李俊;宋玉才;刘长龙;徐文;倪娇;;检测猪繁殖与呼吸综合征病毒中和抗体的重组GP5-ELISA的研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蔡锦顺;PRRSV GP5与M蛋白重组犬2型腺病毒的构建及其免疫特性研究[D];吉林大学;2010年
2 邢凤;猪抗PRRSV相关基因的鉴定及功能分析[D];山东农业大学;2011年
3 周铁忠;辽宁省猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学调查及免疫防制研究[D];吉林大学;2010年
4 张磊;感染PRRSV GD株强弱毒株Marc145细胞的差异表达基因筛选及调控研究[D];西北农林科技大学;2011年
5 刘永宏;高致病性猪繁殖与呼吸综合征病理学研究及其病毒的序列分析[D];内蒙古农业大学;2010年
6 李广明;靶向PRRSV及其PAM细胞病毒受体基因shRNA重组腺病毒的构建与抑制PRRSV复制研究[D];南京农业大学;2009年
7 蔡雪辉;PRRSV流行毒株NSP2遗传变异分析及其活疫苗的安全性评价[D];吉林大学;2012年
8 李红;CD163及其它蛋白在PRRSV感染细胞过程中的相互作用[D];山东农业大学;2011年
9 郑增忍;水疱性口炎病毒N基因克隆表达与诊断技术的研究[D];西北农林科技大学;2004年
10 马凤龙;PRRSV、PRV的分离、鉴定和主要免疫相关基因的克隆、表达及二联核酸疫苗研究[D];中国人民解放军军需大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 荣福龙;高致病性PRRSV在仔猪体内动态分布和体外增殖特性的研究[D];东北农业大学;2010年
2 宫大庆;高致病性PRRSV HuN4株感染仔猪过程中淋巴结蛋白质组学研究[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
3 刘学科;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N基因的RT-PCR与表达方法的建立[D];甘肃农业大学;2004年
4 王美君;临床健康猪群中PRRSV的分离与鉴定[D];山东农业大学;2010年
5 姚雪静;PRRSV安徽株的分离鉴定及感染仔猪病理学的研究[D];安徽农业大学;2010年
6 曹永芝;高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的气溶胶传播机制[D];山东农业大学;2010年
7 李珈莹;PRRSV GP4、GP5基因的克隆及原核表达[D];延边大学;2010年
8 刘永刚;PRRSV LV毒株N基因克隆与原核表达的研究[D];东北农业大学;2003年
9 张冲;野猪源PRRSV Shaanxi-2株分离鉴定、全基因测序及遗传进化分析[D];西北农林科技大学;2010年
10 赵泽坤;高致病性PRRSV的RT-PCR鉴别诊断方法的建立及应用[D];河北农业大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 中牧;PRRSV活疫苗的使用[N];农民日报;2005年
2 农业部动物疫病诊断与流行病学中心主任 崔尚金博士;猪呼吸与繁殖综合征流行特点、危害状况及防制策略[N];中国畜牧兽医报;2005年
3 余木;PRDC和疫苗的效果[N];中国畜牧报;2005年
4 瑞普(保定)生物药业有限公司 李建丽;猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的特点及免疫机制[N];中国畜牧兽医报;2009年
5 北京华都种猪繁育有限责任公司 姚亮;现代养猪场的疾病控制方案[N];中国畜牧报;2004年
6 丁壮 万遂如;我国主要猪传染病防治研究进展[N];中国畜牧报;2002年
7 记者 王攀 常爱玲;从“疑似”到“确诊”为何得十天?[N];新华每日电讯;2004年
8 马利;猪繁殖与呼吸综合症的防治[N];中国畜牧水产报;2001年
9 记者 杨霞 王攀;可能有新的变异冠状病毒[N];新华每日电讯;2004年
10 王锡祯 王泽华 俞燕君 关同应;猪呼吸道疾病的现场诊断和防治[N];中国畜牧报;2002年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978