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《东北农业大学》 2003年
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转基因生物选择标记基因与对照基因及检测技术初步研究

韩放  
【摘要】: 将外源基因导入到目的生物基因组中,使其获得人们所期望的新性状,并且外源基因可遵循遗传法则稳定遗传至子代,新性状在其子代稳定表达,这类具有全新特性的生物品种及其制成品生物统称为转基因生物。 随着转基因生物商品化程度的日益增加,转基因技术将给农业带来一次根本性的变革。与此同时,转基因生物的安全性问题也变得越来越重要,而且人们各持己见。 由于安全性的问题,转基因生物的检测就变得必不可少,至关重要了。对转基因产品的检测是产品能否获得足够的研究空间和良好市场前景的关键所在。 本文选用了东农培育的玉米品种东农1028、,提取植物总DNA以及质粒psmRS-GFPCD_(327)、pmT5为模板,分别根据Genebank发表的玉米内对照基因——玉米肌动蛋白基因(actin of zea mays)和选择标记链霉素抗性基因(streptomycin)、新霉素磷酸转移酶基因(npt-Ⅱ)序列,利用Primer Premier 5.0及Generuner引物设计软件设计出寡核苷酸引物,进行PCR扩增,产物谱带进行胶回收,将产物连接到pUC-18载体上,转化到Jm109菌株。提取重组质粒并进行酶切、PCR鉴定并进行序列测定,最终得到了三种基因的阳性克隆。 选择多种植物样品,用CTAB法提取总DNA;同时用地高辛对三种已克隆的基因通过PCR法进行标记,制成核酸探针。在此基础之上,采用PCR法和斑点杂交方法进行转基因植物的检测。结果表明:PCR法转基因检测的下限为0.5%(w/w),即当受检材料中的转基因成分占非转基因成分等于或大于0.5%时可以检出。而斑点杂交检测结果证明:当材料转基因含量降低时,检测信号则明显降低,灵敏度较低。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S188

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