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核酸探针与PCR方法对重组病毒vFV282株的鉴定研究

贾雷立  
【摘要】: 本研究应用核酸探针和PCR方法,对由本室构建的共表达新城疫病毒F和传染性囊病毒VP0蛋白的多价重组鸡痘病毒vFV282进行了鉴定。 以源于含鸡新城疫病毒(NDV)四平株F基因重组质粒(pKSF)的EcoRⅤ及XbaⅠ双酶切片段,制备了地高辛标记的cDNA探针。特异性检测表明,该探针对含NDV F基因的pKSF呈现特异性,而对照载体质粒及鸡痘病毒(FPV 282E4)的核酸提取物呈阴性;敏感性检测表明,该探针对同源DNA的检出限量为4pg。应用该探针对含NDV F基因的vFV282进行杂交检测,结果呈阳性。以上结果表明,该探针可成功用于含NDV F基因的重组鸡痘病毒的鉴定。 分别以NDV四平株F基因序列和传染性法氏囊病毒(IBDV)VP0基因序列为依据,设计并合成了两对引物P1、P2和P3、P4。特异性检测表明,引物P1、P2以pKSF为模板,扩增出一条特异的DNA片段(585bp),以对照FPV 282E4及CEF的提取核酸为模板扩增结果均呈阴性;引物P3、P4以含IBDV VP0特定基因的重组质粒(pEX IBDV VP0)为模板,扩增出一条特异的DNA片段(837bp),以对照FPV 282E4及CEF的核酸为模板扩增结果均呈阴性;敏感性检测表明,P3、P4对pEX IBDV VP0的检出限量约为20pg总DNA。应用P1、P2和P3、P4分别对vFV282进行PCR检测,结果均呈阳性。以上结果表明,P1、P2和P3、P4可成功用于含NDV F基因和IBDV VP0基因的重组鸡痘病毒的鉴定。


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