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甜菜无融合生殖M14品系易位系的创制、筛选及鉴定方法的建立

曲波  
【摘要】: 甜菜单体附加系M14品系是我国特有的无融合生殖材料。筛选和鉴定从M14后代中分离出来的带有白花甜菜染色体片段的易位系,将会加快从遗传性状到基因克隆和功能鉴定的速度,对克隆无融合生殖基因有重大意义。 本文采用γ射线照射的方法加速产生易位系。首先利用γ射线处理栽培甜菜单体附加系M14种子,然后在温室中播种、调查不同放射剂量种子的成活率,并进行细胞学观察,最后对发生染色体变异的株系利用白花甜菜特异探针进行DNA分子杂交。共得到11株易位系,易位系发生率4.54%,明显高于自发易位0.26%的发生率,诱导作用明显。研究结果表明γ射线的剂量对甜菜的成活率及易位系产生的几率有很大影响。辐射强度越大,甜菜成活率越低,而染色体变异率和易位系发生率越高。综合两方面因素,强度为60Kr和80Kr的辐射效果较好。本文还对16个株系共264株易位系的后代进行斑点杂交,计算其总传递率为50.4%,这与理论值相符合。其中株系11的传递率为100%,株系14也达到83.3%,基本属于高频传递。最后本文对荧光原位杂交的染色体制片、变性、杂交、洗涤、信号检测等过程的实验条件进行了各种对比实验,摸索出一套较成功的实验方案,建立了易位系鉴定的基本程序。


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