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《东北农业大学》 2005年
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渗透胁迫相关基因对烟草的遗传转化及基因功能的研究

齐岩  
【摘要】:干旱、高盐和低温是严重影响作物生长发育及产量的3 种不同形式的环境胁迫因子,是影响我国乃至世界农业生产的重大问题。因此,如何提高作物抗干旱、高盐和低温的能力是一个全世界都亟待解决的问题。随着基因工程技术的迅猛发展,人们已将一些抗逆功能基因导入植物,但植物抗逆能力的提高有限,无法满足生产上的需要。目前,抗逆反应中的调控基因已逐渐成为研究热点,如果能将调控基因导入植物,将有望使转基因植物抗逆性状获得综合改良,而进行调控基因的克隆和功能鉴定,并从中筛选出能显著提高植物抗逆性的基因是培育抗逆农作物新品种(系)的重要前提条件,也是植物抗渗透胁迫基因工程研究的关键。 本研究构建了分别由E12 强组成型启动子和rd29A 渗透胁迫诱导型启动子调控的OsMAPK4 和OsCDPK7 基因的植物表达载体,并优化了烟草遗传转化体系;利用农杆菌介导法将DREB2A、OsCDPK7 和OsMAPK4 基因导入烟草,获得了转基因植株。通过对T1代的抗逆性检测,分析各基因的抗渗透胁迫功能,探讨这些调节基因在植物抗逆基因工程方面的应用前景,为利用这些调节基因进行抗逆基因工程研究奠定基础。主要研究结果如下: 1. 植物表达载体构建 构建了4 个植物表达载体,分别命名为pBM29A、pBME12、pBC729A 和pBC7E12。其中pBM29A 用于OsMAPK4 基因在双子叶植物中的渗透胁迫诱导型表达,pBME12 用于OsMAPK4 基因在双子叶植物中的组成型表达,pBC729A 用于OsCDPK7 基因在双子叶植物中的渗透胁迫诱导型表达,pBC7E12 用于OsCDPK7 基因在双子叶植物中的组成型表达。 2. 遗传转化体系优化 (1) 确定了不定芽分化阶段Km 的筛选压力为20 mg/L。 (2) 确定了最佳除菌剂为阿莫西林:克拉维酸钾(2:1),其使用浓度为100 mg/L。 3. 遗传转化 利用农杆菌介导法将分别由E12启动子和rd29A启动子调控的DREB2A基因、OsMAPK4基因和OsCDPK7 基因对烟草“龙江911”进行遗传转化,获得了大量的抗性苗。 4. 抗性苗PCR 检测 获得了转化pB2A29A 质粒的PCR 阳性植株66 株,转化pB2AE12 质粒的PCR 阳性植株17 株,转化pBM29A 质粒的PCR 阳性植株13 株,转化pBME12 质粒的PCR 阳性植株45 株,转化pBC729A 质粒的PCR 阳性植株11 株,转化pBC7E12 质粒的PCR 阳性植株36 株。 5. Southern 印迹杂交检测 检测了转OsCDPK7 基因的PCR 阳性植株15 株,9 株呈阳性,其中转pBC729A 质粒的
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S332

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【引证文献】
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1 刘兵;苹果属两种植物组织培养及耐盐性研究[D];天津农学院;2011年
【共引文献】
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2 程烽;盛燕;施静艺;陈漪;徐潮;刘智;梁军;潘春明;朱忠勇;宋怀东;;重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体[J];癌变.畸变.突变;2007年01期
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5 王继英;武英;郭建凤;呼红梅;张印;;莱芜黑猪保种群促卵泡素β亚基和雌激素受体基因、基因型变化情况[J];山东农业科学;2007年01期
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7 陈长宝;朱树华;周杰;;改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA[J];山东农业科学;2009年05期
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10 朱美霞,孟艳玲,陈良兵;大豆与棉花抗性基因类似物的同源性比较及其进化分析[J];安徽农业科学;2005年02期
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2 徐波;张莉;李启云;王景会;姜媛媛;杨贞耐;;牛凝乳酶成熟肽基因在大肠杆菌中的表达[A];中国奶业协会年会论文集2008(下册)[C];2008年
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10 王英;滕齐辉;曹慧;胡锋;崔中利;;淹水和旱作水稻土中细菌群落多样性的空间分布[A];第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2007年
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10 朱彦涛;甘蓝型油菜Polima CMS和陕2A CMS的形态和生化特征及其胞质遗传物质的比较研究[D];西北农林科技大学;2010年
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10 李善文;蟾蜍灵对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响[D];南京医科大学;2009年
【同被引文献】
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2 武春霞;吴海燕;朱文碧;杨静慧;YU JI SAKAI;刘艳军;;盐生植物在不同盐碱土壤中的生理反应及耐盐性[J];安徽农业科学;2008年20期
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5 耿建;常新文;佘永杰;;耐盐碱植物—珠美海棠的离体快繁技术[J];现代农业科技;2007年17期
6 孔祥生,张妙霞,张益民;甜柿组织培养中玻璃化现象的发生与防治[J];北方园艺;1999年04期
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8 李云,田砚亭,罗晓芳;珠美海棠试管苗玻璃化发生机理的初步研究[J];北京林业大学学报;1996年01期
9 姚洪军,罗晓芳,田砚亭;植物组织培养外植体褐变的研究进展[J];北京林业大学学报;1999年03期
10 奚彪,刘祖生;外植体性质对茶腋芽组培快繁的影响[J];茶叶;1994年04期
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1 谭冬梅;干旱胁迫诱导新疆野苹果和平邑甜茶细胞程序性死亡的研究[D];中国农业大学;2005年
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【二级引证文献】
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1 王锴;盐胁迫下苹果属两种植物愈伤组织和组培苗的生长发育以及耐盐机理研究[D];西北农林科技大学;2013年
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