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《东北农业大学》 2006年
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猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗的研究

邵美丽  
【摘要】: 猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的高度接触性传染病。自1957年Pattison首次报道本病以来,该病在世界范围内广泛流行,并给各国养猪业带来了严重的经济损失。由于APP极易产生耐药性,疫苗接种是防控本病的主要措施。目前,国内主要使用灭活疫苗预防和控制本病。但由于APP血清型较多,灭活疫苗的保护效果十分有限。因此,开发新型疫苗已经成为研究热点。研究表明,通过分子生物学手段构建的一些PCP弱毒疫苗和新兴起的一种ghosts疫苗较灭活疫苗的免疫保护效果有明显提高,但这两种疫苗也存在一些问题,弱毒疫苗随着毒力降低,其免疫原性也有所降低,且存在毒力返强的可能性,而ghosts疫苗则存在菌体裂解不彻底等缺点。 以天然提取的APP毒力因子为组份的亚单位疫苗则不存在上述缺点,且这种疫苗能诱导产生很好的免疫保护,但就其制备方法而言,存在着提取成本高、产量低和不适于大量生产等缺点。鉴于此,本试验通过基因工程方法,重组表达APP的多种毒力因子,制备多组份重组亚单位疫苗,并进行了免疫保护效果的探讨。 研究表明,APP分泌的外毒素(ApxI、ApxII、ApxIII)和外膜蛋白(OMP)等不仅是APP重要的毒力因子,同时也是重要的免疫原性因子,它们已经作为4种重要的候选抗原应用于APP亚单位疫苗的研究,但APP菌毛(ApfA)和最近发现的的外毒素IV(ApxIV)作为APP的另外两个重要毒力因子,尚未见其应用于亚单位疫苗的研究报道。根据ApfA在定居宿主细胞过程中发挥的重要作用及ApxIV能刺激机体产生较高的抗体水平这一点,推测二者可能会在交叉保护方面起促进作用。因此,本试验首次将Apfa和ApxIV也作为疫苗组份进行了研究,并首次制备以4种和6种重组蛋白为组份的重组亚单位疫苗,通过对BALB/c小鼠的免疫攻毒保护试验,与灭活疫苗进行了保护效力的比较。具体试验内容与结果如下: 1采用PCR方法分别从APP2型S1536株、APP1型72-1株和APP7型25-4株中扩增到APP的重要保护性抗原基因apxⅢA(3114bp),apxIVA(2553bp)和omp(963bp)。序列测定后与GenBank发表的其他菌株进行同源性比较。结果表明,所扩增的apxⅢA基因与血清2型和血清8型405株的核苷酸同源性分别为98.4%和97.8%,氨基酸同源性分别为98.9%和97.1% ;apxIVA基因与血清1型4074株和3型HV114株的核苷酸同源性分别为99.9%和99.2%;氨基酸同源性分别为99.9%和98.9%;omp基因与血清3型S1421株、血清6型Femo株和血清7型WF83株的核苷酸同源性分别为98.3%、98.2%和100%,氨基酸同源性分别为98.8%、98.8%和100%。以上结果说明所扩增的目的基因在不同血清型之间非常保守,尤其是apxIVA和omp基因。 2成功构建了重组表达载体pGEX-apxⅢA,pGEX- apxⅣA和pGEX-omp。并将6种重组表达载体pGEX-apxⅢA,pGEX- apxⅣA、pGEX-omp、pGEX-apxIA、pGEX-apxⅡA和pGEX-apfa(后三种为实验室已经构建好)分别在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,获得6种重组蛋白GST-Apx(IrApxI)、GST-ApxⅡ(rApxⅡ)、GST-ApxⅢ(rApxⅢ)、GST-ApxⅣ(rApxⅣ)、GST-Apfa(rApfa)和GST-OMP(rOMP),大小分别约116、110、140、118、42和62Ku。Western-blot分析表明,6种重组蛋白具有良好的抗原性。 3将rApxI、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP组合作为疫苗I组,rApxI、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP组合作为疫苗Ⅱ组,APP1型菌制备的灭活疫苗作为疫苗Ⅲ组,PBS
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S852.5

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 贺英;胸膜肺炎放线杆菌ApxⅢA基因的克隆表达及毒力因子免疫原性的测定[D];中国农业科学院;2007年
2 李淑娜;鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌二联多价蜂胶疫苗的研制及其免疫应答反应的动态研究[D];四川农业大学;2008年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前4条
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4 刘建杰;猪传染性胸膜肺炎新型基因工程类毒素菌苗的研究[D];华中农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 陈凡;胸膜肺炎放线杆菌血清学分型和基因分型的研究[D];华中农业大学;2004年
2 梁望旺;猪传染性胸膜肺炎ELISA诊断方法的建立及初步应用[D];华中农业大学;2004年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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2 梁望旺;伍锐;杨克礼;熊忠良;刘泽文;徐涤平;;猪传染性胸膜肺炎病原学研究进展[J];安徽农业科学;2008年13期
3 希尼尼根;申宏旺;关平原;;黑白花奶牛白细胞介素-2基因的克隆和表达[J];安徽农业科学;2008年35期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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10 陈静;阮昊;陈枢青;;大肠杆菌T蛋白PDH结构域的高效融合表达纯化与活性测定[A];首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姜珊;两种水产动物抗菌肽的重组表达工艺优化与药理药效研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
2 刘翠权;广西395个规模猪场猪呼吸道疾病综合征的病原学调查及防控措施[D];南京农业大学;2011年
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5 王春来;胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的结构与功能分析及其突变体的研究[D];中国农业科学院;2004年
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7 崔志芳;温敏型聚N-异丙基丙烯酰胺凝胶协助蛋白质体外复性的基础研究[D];浙江大学;2004年
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9 刘建杰;猪传染性胸膜肺炎新型基因工程类毒素菌苗的研究[D];华中农业大学;2004年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 师丽敏;胸膜肺炎放线杆菌体内诱导抗原的筛选与鉴定[D];华中农业大学;2010年
2 梁晓艳;人脂联素基因的原核表达纯化、抗体制备及应用[D];郑州大学;2010年
3 岳晖;DsbC对植酸酶体外折叠及功能影响的研究[D];山东农业大学;2010年
4 赵秀新;牛消化道Ⅰ型肽载体(bPepTⅠ)部分序列的克隆、表达及多克隆抗体的制备[D];山东农业大学;2010年
5 宋锐;小鼠精原干细胞的分离培养及诱导分化[D];安徽农业大学;2010年
6 黄伟玲;SSCs相关抗原在不同家畜睾丸组织中的定位[D];安徽农业大学;2010年
7 彭福中;链霉亲和素的原核表达及复性[D];江西师范大学;2010年
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9 杨帆;新疆新孢子虫株tNcSRS2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立[D];新疆农业大学;2010年
10 陈小平;主动免疫重组绵羊β_2-肾上腺素受体对大鼠生长及血清生化指标的影响[D];新疆农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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10 曹素芳,黄青云,温纳相,陈红英;禽大肠杆菌O_2、O_(78)菌株外膜蛋白A基因扩增及序列分析[J];华南农业大学学报;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 王春来;胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的结构与功能分析及其突变体的研究[D];中国农业科学院;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
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2 杨学山;猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法及其外膜脂蛋白基因的表达[D];甘肃农业大学;2004年
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4 李贺;H7亚型禽流感基因工程亚单位疫苗的研究[D];新疆农业大学;2006年
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【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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中国硕士学位论文全文数据库 前5条
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中国期刊全文数据库 前10条
1 王芳;何孔旺;邱索平;彭小华;倪艳秀;张雪寒;郭容利;俞正玉;;猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素I基因的克隆、序列分析及表达[J];中国预防兽医学报;2006年02期
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3 汤君;文心田;曹三杰;黄小波;杨利;;猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白B基因的克隆与表达[J];中国预防兽医学报;2007年12期
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5 记者 姚备;复星重整克隆公司股权[N];中国证券报;2000年
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9 本报记者 姚福泰;中国会克隆国际“6+3”的格局吗[N];中国汽车报;2002年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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3 郭东华;牛羊腐蹄病坏死梭杆菌白细胞毒素重组亚单位疫苗的研究[D];东北农业大学;2007年
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10 康巧珍;幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白基因克隆表达及免疫评价[D];郑州大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭焕成;产纳豆激酶菌株的筛选及纳豆激酶酶原基因的克隆与表达研究[D];吉林大学;2005年
2 刘茜;水稻蛋白激酶的克隆及体外表达[D];河北农业大学;2005年
3 胡晓航;银狐生长激素基因克隆与基因表达研究[D];东北林业大学;2005年
4 邱重晏;酸性蛋白酶基因的克隆及表达[D];江南大学;2005年
5 孙树民;旋毛虫肌幼虫p53 kDa和p45 kDa抗原基因的克隆、表达及鉴定[D];吉林大学;2006年
6 柯晓静;黑曲霉WP1植酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达[D];河北农业大学;2007年
7 李旺;耐热纤维素酶产生菌的筛选、鉴定及纤维素酶基因的克隆与表达[D];西北农林科技大学;2007年
8 万修红;镰形扇头蜱IgG结合蛋白基因的克隆及表达[D];上海师范大学;2007年
9 任燕;致病性嗜水气单胞菌的检测与一种温敏胞外蛋白酶基因的克隆、表达及其免疫性研究[D];南京农业大学;2005年
10 高长玲;旋毛虫新生幼虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ基因家族的克隆与分析[D];吉林大学;2005年
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