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《东北农业大学》 2007年
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小鼠乳腺上皮细胞培养体系的建立及初步应用

张以涛  
【摘要】: 体外培养系统可以模拟体内激素环境和体内构造来控制细胞的生长,还可以研究不同培养条件下细胞的生长潜能,既快捷又便利。小鼠作为实验动物的易获得性和可操作性是细胞水平研究乳腺的理想动物模型,而现有的小鼠乳腺上皮细胞的分离、培养技术缺乏统一的操作规范,可重复性相对不足。因此,改进小鼠乳腺上皮细胞分离、培养技术及建立完善的新的体外培养体系已成为乳腺发育和功能研究的重要任务。 Heregulin-α是细胞间信号蛋白,它可增强体外培养的乳腺上皮细胞对催乳素的敏感性,在乳腺上皮细胞形态发生、导管形成,以及诱导乳腺上皮细胞分化成分泌腺泡中扮演了重要角色,对乳腺发育和乳腺功能调控具有重要作用。 本研究旨在建立完善的小鼠乳腺上皮细胞体外培养体系,探讨Heregulin-α对该体系乳腺上皮细胞增殖及代谢的影响,为进一步深入研究乳腺上皮细胞的形态、结构和功能,揭示Heregulin-α在小鼠乳腺发育中的作用及其规律提供重要理论依据。为寻求人工调控促进乳腺发育和乳腺功能的新方法和新途径,提高乳产量和乳质量,提供可行的技术手段和可信的理论支持。 本研究采用胶原酶一步消化法、胰蛋白酶和胶原酶分段消化法分离培养小鼠乳腺上皮细胞,对比两种分离培养方法获得乳腺上皮细胞的形态。结果表明:采用胰蛋白酶和胶原酶分段消化法可以获得大量高纯度并且形态均一的乳腺上皮细胞。具有方法简便、易于操作等优点。 本研究比较不同pH、不同血清浓度配比的生长培养液对小鼠乳腺上皮细胞生长的影响。结果表明:pH 7.4的含10%血清的培养基为最佳生长液。pH为6.8、7.6与pH为7.2、7.4的两组细胞数量均有显著差异(p<0.01),pH为7.2、7.4两组之间差异不显著(p>0.05)。FBS为5%时与各组均差异显著(p<0.01),10%、15%之间差异不显著(p>0.05)。 本研究运用相差显微镜技术,采用MTT方法比较不同取材时期获得的乳腺上皮细胞生物学特性,结果揭示妊娠期细胞生存、增殖能力均强于泌乳期细胞,妊娠期小鼠乳腺为获得细胞的最佳取材时期。 本研究采用免疫组化和RT-PCR(转录水平)方法分别对细胞重要的标志蛋白角蛋白-18和特异性分泌蛋白β-酪蛋白进行了鉴定,结果表明所获得的细胞为乳腺上皮细胞,并具有正常分泌乳蛋白的功能,成功建立小鼠乳腺上皮细胞体外培养体系。 利用所建立的小鼠乳腺上皮细胞体外培养体系,采用液相色谱技术及MTT方法,初步探讨了Heregulin-α对小鼠乳腺上皮细胞的影响。结果表明:适宜量Heregulin-α对小鼠乳腺上皮细胞生长和分泌总蛋白、乳糖均有显著促进作用。0.1~20ng/ml的Heregulin-α可促进小鼠乳腺上皮细胞的增殖和总蛋白、乳糖含量的增加,20ng/ml时达到最大值(p<0.01),50ng/ml、100ng/ml Heregulin-α抑制小鼠乳腺上皮细胞的增殖,降低小鼠乳腺上皮细胞的总蛋白、乳糖含量(p<0.05)。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q813

【参考文献】
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