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《东北农业大学》 2007年
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农杆菌介导iaaM基因创造单性结实酸浆种质资源

王蕾  
【摘要】: 本文研究通过农杆菌介导转化iaaM基因,使iaaM基因在酸浆果实中特异表达,提高果实中生长素浓度,创造遗传稳定的酸浆单性结实品种,为酸浆单性结实育种提供了新的种质资源。本研究获得的主要结果如下: 1、以MS为基本培养基,采用TDZ、6-BA、NAA等多种激素不同配比的组合,同时对酸浆的外植体筛选、再生芽的伸长和生根进行了研究。经过对比试验,确定了最佳再生体系。筛选出酸浆高效的再生培养基为:MS+TDZ 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L;生根培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L,生根苗移栽存活率达到90%以上。同时还研究了不同的外植体类型、外植体种类以及激素浓度对再生的影响,发现叶片是最佳的外植体,TDZ对酸浆的诱导有很大的影响,并且不同基因型对TDZ浓度的响应不同。 2、本试验明确了不同酸浆品种不定芽分化及生根培养分别用以筛选转化植株的卡那霉素浓度,并通过侵染试验对比转化率,建立农杆菌侵染苦职叶片的遗传转化受体体系:70mg/L的Km是苦职叶片外植体筛选培养的临界耐受浓度,20mg/L Km是苦职生根筛选培养的临界浓度;培养基中浓度为350mg/L的头孢霉索能够很好的抑制农杆菌的生长,且对叶片外植体的再生率和不定芽影响最小,可作为苦职的抑菌性抗生素。 3、在建立苦职遗传受体体系的基础上,通过GUS组织染色法研究了影响转化效果的各因子,建立高效苦职的遗传转化体系:以预培养24h的苦职叶片为转化材料,用OD600为0.6的携带有iaaM基因的农杆菌菌液侵染8min,24℃接种在附加100μmol/L乙酰丁香酮、pH为5.4的共培养基上共培养2d,延迟培养2d,用选择压为70mg/L的Km连续筛选直至不定芽生成,待不定芽长至1cm左右时转入附加20mg/L Km的生根培养基中,继续筛选,并对生根抗性植株进行了PCR和Southern blotting检测,其中28.2%的被检植株产生Southern杂交信号,证明iaaM基因已整合到苦职基因组中,外源基因主要是多拷贝插入。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S641.4

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