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《东北农业大学》 2007年
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利迪链霉菌A02拮抗产物的分离纯化和鉴定

隋勤  
【摘要】: 利迪链霉菌A02是本研究室分离到的一株拮抗链霉菌,本文对该菌株产生拮抗产物的分离纯化方法、理化性质、结构以及毒力等方面进行了系统分析研究。结果如下: 1明确了拮抗菌A02发酵液的理化性质。 A02菌株发酵液中拮抗产物具有良好的热稳定性和耐酸碱性,在70℃以下、pH5~8的条件下活性成分稳定;A02发酵液在4℃以下的低温条件下储藏稳定性较好,高温条件下活性损失较大;A02发酵液在日光灯和自然光下较稳定,对紫外光敏感;极性试验可知A02发酵液中拮抗产物为中性、多烯类抗生素。 2研究A02菌株拮抗产物的分离提取和纯化方法,利用此技术得到了高纯度A02拮抗产物纯品。 分离提取方法如下:①发酵液预处理;②树脂与预处理的发酵液(浓缩5倍)按体积比1∶1上样,用2倍体积的无离子水洗脱后用2倍体积的30%甲醇洗脱,最后用70%乙醇洗脱,分管收集,合并活性成分,浓缩;③浓缩液上样于硅胶柱,选用乙醇∶氨水∶水(8∶1∶1,v/v)溶剂系统洗脱,收集活性成分,浓缩;④浓缩液上样于HPLC,流动相为70%甲醇,收集活性峰,浓缩;⑤浓缩液盛放于培养皿中,放于45℃恒温干燥箱中干燥得乳白色固体粉末状纯品,经HPLC测定纯度为99.845%。 3测定菌株A02拮抗产物纯品结构,明确了纯品的分子式和结构式。 通过紫外光谱测定表明,A02拮抗产物纯品是四烯类农用抗生素;红外光谱结果表明,A02拮抗产物纯品结构式中含有-OH、-NH_2、-CH_3、-CH_2、-C=O、-C=C-等基团;质谱测定A02产物纯品的分子量为665,分子式为C_(33)H_(47)NO_(13);从核磁共振~(13)C谱的化学位移数值可以看出,结构中含有羧基碳原子,多烯环上不饱和四碳原子,己糖上的五个碳原子,甲基碳原子,碳原子上连接氨基,碳原子连接氧;核磁共振~1H谱中可以看山,多烯环上和四个双健相连的质子氢、与碳连接氧上的质子氢、与羧基连接的质子氢存在的化学位移。通过光谱分析,推测出了A02拮抗产物纯品的化学结构式。 4研究了菌株A02拮抗产物纯品的溶解性和官能团反应。 A02拮抗产物纯品可溶于甲醇、二甲基亚砜、冰醋酸,略溶于丙二醇、正丁醇,极微溶解于乙醇,难溶于水。官能团反应试验可以看出,A02拮抗产物纯品结构式中含有糖苷键、伯氨基和醛基,不含还原糖和酚基。与高锰酸钾和浓硫酸反应,说明A02拮抗产物纯品与多烯大环内酯类抗生素相似。 5测定了菌株A02拮抗产物纯品对灰霉菌的室内毒力,明确其EC_(50)和EC_(95)值。 测定结果表明,A02拮抗产物纯品对番茄灰霉病菌菌丝生长具有良好的抑制作用,其抑制中浓度(EC_(50))和亚致死浓度(EC_(95))值分别为2.9373mg/L和53.0919mg/L,明显优于对照的化学药剂利得(EC_(50)和EC_(95)值分别为7.6245mg/L和277.6080mg/L)。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S476.8

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1 隋勤;利迪链霉菌A02拮抗产物的分离纯化和鉴定[D];东北农业大学;2007年
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