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《东北林业大学》 2011年
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油污土壤降解细菌的分离鉴定及生长条件优化

袁婧  
【摘要】:生物修复(尤其是微生物)技术治理石油污染土壤的方法以其费用低、无二次污染等优点被广泛关注。目前,微生物修复石油污染已经在实验室条件下展开,为生物修复技术在实践中的应用提供了参考和指导。本研究从大庆油田长期被石油污染的土壤中采集土壤样品,以原油为唯一碳源筛通过直接分离法选出一组石油烃降解优势菌;选择其中十株纯种菌作为研究对象,利用16SrDNA全序列分析结合形态学观察和部分生理生化试验对高效的石油降解菌株进行初步的鉴定并对其最佳的生长条件进行了摸索(pH值、盐浓度,营养物质),研究了不同影响因素对微生物生长的影响程度及最佳的水平组合;最后在实验室条件下,对石油污染土壤的土壤酶活性惊醒测定。研究结果如下: 1、通过对7个石油污染土壤样品的富集培养,挑选出10株长势较好的细菌。分别命名为15,18,7,9,11,21,L,H,X,4。 2、通过形态学观察,部分生理生化分析和16SrDNA全序列分析相结合,初步确定11菌株鉴定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus),15菌株为根瘤菌属(Rhizobium sp),18菌株为氧化微杆菌氧化微杆菌属(Licrobacterium oxydans),H为节细菌属(Arthrobacter sp),7、9、4、21、L、X菌株均为芽孢杆菌属(Bacillus sp)。若想将各菌株鉴定到种,还有待进一步研究。 3、(1)单因素法改变初始pH值,盐浓度,N源和P源初步探寻各菌株的最适生长条件,结果发现:L菌株的最适生长条件为pH=7,盐浓度1%,氮源和磷源分别为NH4NO3和NaH2PO4。H菌株的最适生长条件:pH=7,盐浓度3%,氮源和磷源分别为KNO3和K2HPO4:KH2PO4为1:2(双磷源)。18菌株最适pH为8,盐浓度为3%,氮源和磷源分别为NH4NO3和K2HPO4。15菌株最适pH为7,盐浓度为3%,氮源和磷源分别为NH4Cl和双磷源。4菌株最适pH为8,盐浓度为3%,氮源和磷源分别为NH4NO3和KH2PO4。X菌株最适pH为7,盐浓度为3%,氮源和磷源分别为NH4Cl和双磷源。11菌株最适pH为7,盐浓度为3%,氮源和磷源分别为NH4C1和KH2PO4。7菌株最适pH为6,盐浓度为1%,氮源和磷源分别为KN03和双磷源。9菌株最适pH为7,盐浓度为3%,氮源和磷源分别为NH4Cl和双磷源。21菌株最适pH为7,盐浓度为1%,氮源和磷源分别为NH4Cl和K2HPO4。 (2)正交试验是为了探究各种影响因素对菌株生长的影响程度,以寻求适合菌株生长的最优条件组合。结果显示各菌株的最优条件组合分别为:L菌株是1B2A3B4D, H菌株是1B2A3B4D,18菌株是1B4B3A2C,15菌株是2B1B4C3A,4菌株是2B3A1B4A, X菌株是1A3D2B4D,7菌株1B2C3D4A,9菌株是1A2A3A4A,21菌株是1B3B2B4B/C,11菌株是1A2A3A4A。 4、石油污染土壤酶活性的测定结果: (1)多酚氧化酶酶活性分别为(mg/g):61深35.78851,61中25.28901,61表22.87682,97深49.79176,97表32.4608,97中32.84066,油土30.55726。 (2)土壤脲酶活性分别是(mg/g):61深0.276984,61表0.904971,61中0.321074,97深0.053245,97表0.320985,97中0.296232,油土0.247786。 (3)土壤转化酶活性分别是(mg/g):61深0.397302,61表0.876511,61中0.425707,97深0.128437,97表0.556353,97中0.395122,油土0.432914。 (4)上壤酶相关性分析结果显示:转化酶与脲酶极显著正相关,转化酶与多酚氧化酶呈显著负相关,多酚氧化酶与脲酶之间的负相关性不显著。
【学位授予单位】:东北林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:X172

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