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《东北林业大学》 2017年
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黑加仑中四种主要花色苷成分提取纯化工艺的研究

黄玉岩  
【摘要】:在本实验中使用绿色环保的低共熔溶剂作为提取溶剂并结合微波对黑加仑飞燕草素3-O-葡萄糖苷、飞燕草素3-O-芸香糖苷、矢车菊素3-O-葡萄糖苷和矢车菊素3-O-芸香糖苷进行绿色高效提取,同时对提取液中黑加仑四种主要花色苷进行大孔吸附树脂结合中压快速色谱的富集和纯化。研究了低共熔溶剂微波辅助提取的方法工艺,并对工艺参数进行了优化,并利用pH示差法和快速简便的高效液相分析检测方法对花色苷成分进行快速准确的定性及定量检测,为开拓黑加仑资源提供了重要的数据支持。主要研究结果如下:1.建立了非常快速简便的定量检测黑加仑中花色苷含量的pH示差法,并建立了高效液相色谱同时分析检测黑加仑中飞燕草素3-O-葡萄糖苷、飞燕草素3-O-芸香糖苷、矢车菊素3-O-葡萄糖苷和矢车菊素3-O-芸香糖苷四种主要花色苷的方法:流动相:10%甲酸水(A)-乙腈:甲醇(85:15,B);色谱柱:Luna C_(18)(5μm,250 mm×4.6 mm i.d.);梯度洗脱条件为:0-4 min,15-20%(B);4-6 min,20-22%(B);6-14min,22-24%(B);14-24 min,24-26%(B);24-35 min,30-35%(B);进样量:5μL;流速1 m L/min;检测波长:520 nm;柱温30 ~oC。2.对黑加仑中四种主要花色苷的提取的工艺参数进行了Box-Behnken Design(BBD)实验设计工艺优化,确定了最优提取的参数:低共熔溶剂:氯化胆碱/乳酸,摩尔比1:2,含水量20%提取温度:45 ℃液固比:13:1 m L/g提取时间:14 min通过上述优化的条件进行了验证性实验,测得黑加仑花色苷的提取平均得率为2.03mg/g(n=3),提取率优于使用低共熔溶剂超声提取法以及80%乙醇微波辅助提取法。3.确定了大孔吸附树脂结合中压快速色谱速快速分离纯化黑加仑中四种主要花色苷的工艺。(1).确定了通过大孔吸附树脂富集花色苷的工艺参数:树脂型号:D101型上样体积:6 BV解吸溶液及体积:3 BV去离子水和5 BV 40%乙醇(2).确定了快速色谱分离纯化D101型树脂富集产物中飞燕草素3-O-葡萄糖苷、飞燕草素3-O-芸香糖苷、矢车菊素3-O-葡萄糖苷和矢车菊素3-O-芸香糖苷的工艺参数:固定相类型:ODS-C_(18)反相硅胶洗脱流程:选用流动相A-水:甲酸(90:10),流动相B-乙腈:甲醇(85:15),A:B=93:7等梯度洗脱样品与硅胶质量比:1/150(g/g)洗脱流速:25 m L/min在上述优化条件下,通过一次大孔吸附树脂的富集,结合中压快速色谱的分离纯化和重结晶后,分别得到飞燕草素3-O-葡萄糖苷、飞燕草素3-O-芸香糖苷、矢车菊素3-O-葡萄糖苷和矢车菊素3-O-芸香糖苷22.31 mg、35.47 mg、11.83 mg和31.36 mg,纯度均在95%以上,最终得率依次为0.32 mg/g、0.47 mg/g、0.18 mg/g、0.43 mg/g。该工艺不仅具有简单易行、得到的产品纯度高和易于扩大化生产等特点,同时为大规模生产花色苷类成分提供了重要的理论基础。
【学位授予单位】:东北林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S663.9

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