用PCR方法对虎DNA进行特异性检测的研究

【摘要】： 为了建立对虎DNA进行特异性检测的有效、精确的方法，本研究中，从Genbank下载虎及其他6种猫科动物和6种鹿科动物的mtDNA细胞色素b基因序列，并用Wdnasis(V2.5)软件进行了种间序列比较。发现在361-381位点之间和565-585位点之间，虎的DNA碱基序列与其他猫科动物、鹿科动物有多个位点不同。根据设计引物的原则，以此区域的互补序列作为鉴定虎的特异引物，并用该对引物对从6种猫科动物和6非猫科动物的肌肉、组织、皮或毛发中提取的总DNA或mtDNA的细胞色素b段进行PCR扩增。结果表明，所设计的引物为对虎DNA特异，即在PCR反应中，该引物只能特异地扩增虎DNA，而其它猫科动物或非猫科动物的DNA不能被扩增，从而达到虎的物种鉴定的目的。盲测获得了100％正确率，表明本方法灵敏、可靠。 本文建立了从动物毛干中提取mtDNA的方法，与以往的研究相比，进一步放宽了对毛发新鲜程度的要求，使不带毛囊的保存多年的脱落毛发具有鉴定价值，为野外调查中虎的残余物及虎产品的识别提供了方便、可靠的检测手段。