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用PCR方法对虎DNA进行特异性检测的研究

张琼  
【摘要】: 为了建立对虎DNA进行特异性检测的有效、精确的方法,本研究中,从Genbank下载虎及其他6种猫科动物和6种鹿科动物的mtDNA细胞色素b基因序列,并用Wdnasis(V2.5)软件进行了种间序列比较。发现在361-381位点之间和565-585位点之间,虎的DNA碱基序列与其他猫科动物、鹿科动物有多个位点不同。根据设计引物的原则,以此区域的互补序列作为鉴定虎的特异引物,并用该对引物对从6种猫科动物和6非猫科动物的肌肉、组织、皮或毛发中提取的总DNA或mtDNA的细胞色素b段进行PCR扩增。结果表明,所设计的引物为对虎DNA特异,即在PCR反应中,该引物只能特异地扩增虎DNA,而其它猫科动物或非猫科动物的DNA不能被扩增,从而达到虎的物种鉴定的目的。盲测获得了100%正确率,表明本方法灵敏、可靠。 本文建立了从动物毛干中提取mtDNA的方法,与以往的研究相比,进一步放宽了对毛发新鲜程度的要求,使不带毛囊的保存多年的脱落毛发具有鉴定价值,为野外调查中虎的残余物及虎产品的识别提供了方便、可靠的检测手段。


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