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《东北林业大学》 2005年
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96-Ⅱ喜树组织培养及其转CMO基因遗传转化的研究

董凤丽  
【摘要】:喜树因体内含有特效抗癌药物——喜树碱而闻名,是长江流域以南各省(区)普遍用材树种。适宜在温暖湿润的环境中生长,不耐干旱,扩大栽种范围有一定的难度。利用植物基因工程手段在分子水平上定向重组遗传物质,改良喜树这一药用植物及珍稀物种性状,培育优质的喜树新品种具有重大意义。目前,根癌农杆菌Ti质粒基因转化系统是应用最成熟、最广泛的转化途径。本文对引入的新品种96-Ⅱ喜树进行腋芽增殖和愈伤组织再生途径的再生体系建立,并对所获得组培苗定植后与实生苗进行了对比研究。在此基础上,利用根癌农杆菌介导的方法将抗旱基因—胆碱单加氧酶基因(CMO)转入到96-Ⅱ喜树体内,通过目的基因的表达提高喜树的抗旱性,解决96-Ⅱ喜树扩大栽种范围及适应现有环境旱化等问题。本文主要研究结果如下: 1、从腋芽建立初始培养,研究各阶段影响再生诸因素的作用,建立起96-Ⅱ喜树腋芽增殖和愈伤组织再生两种途径的组培系统。愈伤组织诱导率达95%以上,分化率达90%以上,生根率达94%以上,移栽成活率达95%以上。 2、96-Ⅱ喜树组培再生苗移栽成活率高,移栽30天左右,完全适应了外界环境后与具四片真叶的实生苗对比,结果表明96-Ⅱ喜树组培苗能较快适应坏境。同四川金堂产地的喜树实生苗相比,在生长速率、光合能力、喜树碱含量等方面表现出一定优势。 3、通过根癌农杆菌介导,建立了高效的96-Ⅱ喜树遗传转化体系:卡那霉素浓度20mg/L为叶片最佳的抗生素筛选浓度、30mg/L为转化苗生根的最佳选择压力;叶片预培养时间为3天;菌液浓度为OD_(600)=0.5左右;侵染时间为15min;共培养时间为3天。首次获得96-Ⅱ喜树抗旱转基因植株,经PCR和Southern blot检测,结果证明目的基因已完全整合到96-Ⅱ喜树的基因组中,转化率为6.7%。
【学位授予单位】:东北林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S567.19

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 杨国峥;喜树高效再生体系的建立与农杆菌介导的遗传转化研究[D];贵州大学;2007年
2 任艳;花生组织培养技术的优化研究[D];中国海洋大学;2012年
【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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1 张梅;孙治军;杨守军;;多效唑(PP_(333))在马铃薯组培快繁中的应用[J];山东农业科学;2006年04期
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【二级引证文献】
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10 崔海涛;李春霞;王红艳;陈红运;竺晓平;时呈奎;李向东;;本生烟组织培养及遗传转化体系的建立[J];山东科学;2006年01期
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1 董凤丽;96-Ⅱ喜树组织培养及其转CMO基因遗传转化的研究[D];东北林业大学;2005年
2 樊晓莉;日本结缕草植株再生体系优化及根癌农杆菌介导的遗传转化的初步研究[D];华中农业大学;2005年
3 徐美隆;丽格海棠遗传转化及离体诱变体系的研究[D];四川农业大学;2007年
4 宋书锋;普那菊苣高频再生体系建立和遗传转化研究[D];西北农林科技大学;2006年
5 满若君;蝴蝶兰、文心兰再生体系的建立及遗传转化体系的初步研究[D];广西大学;2007年
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9 黄丽云;非洲菊高效再生体系的建立与双抗虫基因转化的研究[D];华南热带农业大学;2006年
10 梁华;多年生黑麦草高频再生体系的建立及农杆菌介导遗传转化因素的初步研究[D];西南大学;2009年
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