收藏本站
《东北林业大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

天花粉蛋白基因表达载体的构建及转化杨树的研究

邹莉  
【摘要】:杨树在我国分布广泛,种类繁多,繁殖容易,栽培简便,适应性强,生长速度快,材质优良,是用材、防风、绿化的主要造林树种。但杨树的病虫害种类繁多,危害严重,加之长期使用有机化学农药,更给我国的林业生产和生态建设造成了巨大的经济损失。所以,杨树病虫害防治是目前林业生产亟待解决的问题,也是林木遗传育种工作者的首要任务。 天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)是从葫芦科药用植物栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim)块根中分离得到的单链核糖体失活蛋白(Ribosome Inactivating Protein,RIP),能够抗烟草花叶病毒等7种病毒、稻瘟病菌等9种病原真菌及蚜虫等4类害虫。利用基因工程手段,将具有抗病和抗虫特性的天花粉蛋白基因转入杨树,增强杨树抗逆性,使杨树免遭病虫危害,具有无污染,不杀伤天敌,保护生物多样性,维持生态平衡等特点,且意义重大。 本研究构建了含有TCS启动子及结构基因的植物表达载体pC-tPro-TCS-GUS和pC-tPro-TCS,及受PAL(Phenylalanine Ammonia-Lyase)诱导型启动子调控的植物表达载体pC-pPro-2-TCS、pC-pPro-1-TCS-GUS和pC-pPro-1-TCS。pC-tPro-TCS-GUS是在pCambia1381表达载体的GUS报告基因上游嵌合入TCS启动子及结构基因而成。pC-tPro-TCS是在pCambia1301多克隆位点中插入TCS启动子及结构基因,该基因下游不具有GUS报告基因。pC-pPro-2-TCS是在pPPG表达载体的PAL诱导型启动子下游嵌合入TCS基因,TCS基因在串联启动子PAL控制下;在天花粉蛋白基因的起始密码子ATG前12bp处有原载体中的起始密码子ATG,表达后形成了4个融合的氨基酸位于重组天花粉蛋白的N端;TCS基因下游为转录终止信号。pC-pPro-1-TCS和pC-pPro-1-TCS-GUS是将TCS基因插入到pPPG表达载体的PAL启动子的非翻译区与GUS报告基因上游,TCS基因在串联启动子PAL控制下;天花粉蛋白基因的起始密码子与原载体中的起始密码子是同一ATG,在重组天花粉蛋白的N端不会形成融合的氨基酸。在表达载体pC-pPro-1-TCS-GUS中,TCS基因下游没有转录终止信号,具有GUS报告基因;在表达载体pC-pPro-1-TCS中,TCS基因下游有转录终止信号。 将构建好的植物表达载体转化农杆菌LBA4404,提质粒进行特异引物PCR扩增。PCR扩增结果验证了植物表达载体pC-tPro-TCS-GUS、pC-tPro-TCS、pC-pPro-2-TCS、pC-pPro-1-TCS-GUS和pC-pPro-1-TCS都已转入进农杆菌中。以小黑杨(Populus simonii×P.nigra)为材料,采用农杆菌介导法首次将天花粉蛋白基因(TCS)导入杨树,为进一步探讨TCS对杨树病虫害的广谱抗性提供了材料,也为获得更多抗病虫转基因树木奠定了理论基础。
【学位授予单位】:东北林业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q943.2;S792.11

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 许继飞;欧美杨108再生体系的优化及转天花粉蛋白基因的研究[D];东北林业大学;2006年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨新科,陈章良,段淑敏,李玉英,吴淑华,侯云德;天花粉蛋白在组织培养上抗病毒作用的研究[J];病毒学报;1990年03期
2 林善枝,肖基浒,张志毅;杨树抗性基因工程研究进展[J];北京林业大学学报;2000年06期
3 高宝嘉,张炬红,王永芳,王进茂,梁海永,高翠君;转基因741杨抗虫性研究[J];河北农业大学学报;2004年03期
4 何锶洁,徐琼芳,唐祚舜,叶松青,储成才,邵鹏柱,田文忠;天花粉蛋白基因在水稻中转化及抗虫研究[J];高技术通讯;2000年05期
5 向邦平,金善炜,曹伯巽,傅桂香,汪猷;栝楼蛋白——Ⅱ.栝楼蛋白部分化学结构的初步测定[J];化学学报;1998年03期
6 鲍一明,储瑞银,韩晋华,张会,潘乃禾遂,顾孝诚,陈章良;天花粉蛋白基因的克隆、序列测定及在大肠杆菌和烟草中的表达[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1992年09期
7 ;Resistance to rice blast (Pyricularia oryzae) caused by the expression of trichosanthin gene in transgenic rice plants transferred through agrobacterium method[J];Chinese Science Bulletin;2000年19期
8 ;The sense and antisense expression of gibberellin 20-oxidase gene (rga5) in rice and its effects on GA_1 level and agronomic traits[J];Chinese Science Bulletin;2003年05期
9 伍宁丰,范云六;含苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因的杨树工程植株的建立[J];科学通报;1991年09期
10 金善炜;顾梓伟;叶国杰;;天花粉蛋白活性区域的推测[J];科学通报;1993年07期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 王健美;烟草MARs序列的克隆、功能研究及其在杨树中的应用[D];山东农业大学;2002年
2 严飞;棉花油菜素内酯合成酶基因(GhDET2)在杨树上的遗传转化及转基因植株的表型分析[D];西南农业大学;2004年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 姜先荣;杨杰;周衍茂;;转基因技术应用及转基因产品安全性研究进展[J];合肥师范学院学报;2008年03期
2 姜国勇,郭宝太,金德敏,王斌;转TCS基因番茄及其后代性状稳定性的比较与分析[J];山东农业科学;1999年06期
3 宋振巧,王洪刚,王建华;栝楼的研究进展[J];山东农业科学;2005年05期
4 王鹏;赵强;刘蕾;;植物源抗虫基因在作物育种中的应用[J];山东农业科学;2007年02期
5 郭淼;张廷婷;高建强;崔德才;;拟南芥PLDα1突变体的繁殖及形态和生理特性分析[J];山东农业科学;2007年02期
6 刘源霞;兰进好;杜景平;孙洪岩;;转基因玉米研究进展[J];山东农业科学;2007年06期
7 孙建全;张倩;马建军;赵新华;;基因工程技术在食品工业中的应用[J];山东农业科学;2008年02期
8 张颖;王猛;柴娜;;杨树叶片离体再生系统的构建[J];山东农业科学;2010年05期
9 王瑞霞;钱兆国;丛新军;牟秋焕;米勇;孙宪印;王超;;转反义PLDγ基因小麦的品质性状分析[J];山东农业科学;2011年07期
10 郭法杰;;瓜蒌属药用植物研究概述[J];中医药临床杂志;2007年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 朱林;江昌俊;叶爱华;李叶云;余梅;邓威威;;茶树ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基转移酶基因植物表达载体的构建[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
3 樊荣辉;黄敏玲;钟淮钦;吴建设;林兵;叶秀仙;罗远华;;鹤望兰蓝色花相关基因克隆及表达分析[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
4 彭文涛;汪峰;崔中利;曹慧;;转基因棉花种植对土壤卡那霉素抗性细菌多样性的影响[A];第五次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2009年
5 杨洋;汤青林;宋明;;番茄CMV抗性育种主要进展[A];重庆市园艺学会会员代表大会论文集[C];2005年
6 马慧;赵开军;徐正进;;含芥菜几丁质酶基因的双元表达载体的构建[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
7 徐庆国;殷绪明;李海林;;籼稻成熟胚的组织培养特性研究[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
8 张燕;吴国良;丁春刚;;核桃生物技术研究进展[A];第三届全国干果生产与科研进展学术研讨会论文集[C];2003年
9 张志忠;吴菁华;吕柳新;何承坤;黄碧琦;;番茄几丁质酶基因转化西瓜研究初报[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
10 陈国菊;雷建军;曹必好;曾国平;;商陆和美洲商陆基因组PAP基因的克隆及序列分析[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
2 王猛;马尾松抑制消减文库的构建及抗病性相关基因的克隆[D];中南林业科技大学;2010年
3 陈少雄;桉树中大径材培育理论及关键技术研究[D];中南林业科技大学;2010年
4 杨艳丽;外源茉莉酸影响马铃薯对晚疫病抗性的初步研究[D];湖南农业大学;2010年
5 徐伟荣;中国华东葡萄抗白粉病芪合成酶基因及启动子克隆与功能分析[D];西北农林科技大学;2010年
6 咸洪泉;菌寄生真菌几丁质酶基因的克隆及功能研究[D];山东农业大学;2011年
7 孙翊;瓜叶菊PCFH基因对花青素苷合成及花色的影响[D];北京林业大学;2011年
8 景峰;滨海泥质盐碱地盐土造林技术研究[D];北京林业大学;2011年
9 宋莎莎;木材细胞堆砌构造图案的分形表征与情感表达[D];北京林业大学;2011年
10 蔡英卿;龙眼体胚发生过程中SERK等胚性相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘红梅;农杆菌介导百子莲抗寒基因CBF1高效转化体系的建立[D];华中农业大学;2010年
2 刘冉冉;枫香遗传转化体系的优化及转化PaFT基因的研究[D];华中农业大学;2010年
3 刘鑫;利用分子标记辅助选择培育和评价三种BT基因(CRY1AC、CRY1C~*和CRY2A~*)抗虫水稻[D];华中农业大学;2010年
4 曹玲;AM真菌孢子萌发及其与紫云英转化根双重培养体系建立的研究[D];华中农业大学;2009年
5 陈龚莉;不同居群栝楼分子遗传多样性及生物碱分析[D];华中农业大学;2010年
6 卢小三;两个杨树无性系再生体系的建立及抗虫基因Cry1C+9C转化的初步研究[D];华中农业大学;2010年
7 徐娟;农杆菌介导的Ac/Ds转座系统转化甘蓝型油菜的研究[D];郑州大学;2010年
8 于军伟;苹果α-法尼烯合成酶基因转化番茄研究[D];山东农业大学;2010年
9 张景涛;小麦TaPHR1基因表达载体的构建及遗传转化研究[D];山东农业大学;2010年
10 闻小霞;甜瓜果实蔗糖合成酶基因(SS)的克隆、表达分析及遗传转化[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨新科,陈章良,段淑敏,李玉英,吴淑华,侯云德;天花粉蛋白在组织培养上抗病毒作用的研究[J];病毒学报;1990年03期
2 朱大保;国外杨树组培微繁技术的进展[J];北京林业大学学报;1990年01期
3 林善枝,肖基浒,张志毅;杨树抗性基因工程研究进展[J];北京林业大学学报;2000年06期
4 王永芳,高宝嘉,郑均宝,梁海永;青杨双价抗虫基因转化系统研究[J];河北农业大学学报;2003年02期
5 郑均宝,张玉满,杨文芝,裴东,田颖川,莽克强;741杨离体叶片再生及抗虫基因转化[J];河北农业大学学报;1995年03期
6 常玉广,刘桂丰,姜静,王玉成,王大海;小黑杨抗虫基因的遗传转化[J];东北林业大学学报;2004年06期
7 何锶洁,徐琼芳,唐祚舜,叶松青,储成才,邵鹏柱,田文忠;天花粉蛋白基因在水稻中转化及抗虫研究[J];高技术通讯;2000年05期
8 王永芳,高宝嘉,郑均宝,甄志先;杨树抗虫基因工程研究进展[J];河北林果研究;2001年01期
9 鲍一明,储瑞银,韩晋华,张会,潘乃禾遂,顾孝诚,陈章良;天花粉蛋白基因的克隆、序列测定及在大肠杆菌和烟草中的表达[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1992年09期
10 伍宁丰,范云六;含苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因的杨树工程植株的建立[J];科学通报;1991年09期
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 王健美;烟草MARs序列的克隆、功能研究及其在杨树中的应用[D];山东农业大学;2002年
2 周长梅;农杆菌介导法将天花粉蛋白基因导入葡萄的研究[D];东北农业大学;2002年
3 严飞;棉花油菜素内酯合成酶基因(GhDET2)在杨树上的遗传转化及转基因植株的表型分析[D];西南农业大学;2004年
4 邹维华;反义磷脂酶Dγ基因与几丁质酶基因转化杨树的研究[D];山东农业大学;2004年
5 孟亮;抗真菌病害转基因杨树的获得[D];山东农业大学;2004年
6 李红;杨树高频再生体系的建立及耐盐碱基因转化的研究[D];辽宁师范大学;2004年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 文艺;农杆菌介导TCS基因导入大豆的遗传转化研究[D];东北林业大学;2009年
2 王丹;农杆菌介导TCS基因转入山新杨的遗传转化研究[D];东北林业大学;2009年
3 遇文婧;欧美杨108号遗传转化条件筛选及抗虫性测定[D];东北林业大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨新科,陈章良,段淑敏,李玉英,吴淑华,侯云德;天花粉蛋白在组织培养上抗病毒作用的研究[J];病毒学报;1990年03期
2 朱广廉,张建国;对BR促进绿豆上胚轴生长的有关因素的探讨[J];北京大学学报(自然科学版);1994年05期
3 林善枝,肖基浒,张志毅;杨树抗性基因工程研究进展[J];北京林业大学学报;2000年06期
4 郝贵霞,朱祯,朱之悌;毛白杨叶片组培再生芽的玻璃化问题探讨[J];北京林业大学学报;1999年01期
5 唐嘉义,杨美林,闻寿,李宗全;BR-120在番茄上的应用效果[J];长江蔬菜;1996年02期
6 王永芳,高宝嘉,郑均宝,张炬红;转基因741杨对桑天牛的抗性鉴定[J];河北农业大学学报;2002年02期
7 郑均宝,张玉满,杨文芝,裴东,田颖川,莽克强;741杨离体叶片再生及抗虫基因转化[J];河北农业大学学报;1995年03期
8 吕均良,杉山和美;盛花期喷布油菜素内酯和赤霉素防止脐橙前期落果的效果[J];中国柑桔;1990年01期
9 张步阔;油菜素内酯对烤烟生长发育和产值的影响[J];贵州农业科学;2001年04期
10 李旭刚,朱祯,徐军望,徐鸿林,肖桂芳;核基质结合区在转基因烟草中提高报导基因的表达水平[J];高技术通讯;2000年09期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘发央,侯路珍,谢小冬;启动子Actin1的克隆及植物表达载体的构建[J];草原与草坪;2005年03期
2 任清;刘光杰;郭秀林;沈世华;;PpDREB2基因植物表达载体的构建[J];华北农学报;2006年02期
3 王文秀;顾节清;陈德坤;邓文;潘丽;王宝琴;王永录;张永光;;转亚洲Ⅱ型口蹄疫病毒VP1基因烟草研究[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2007年01期
4 黄东杰;张树珍;冯翠莲;顾丽红;范海阔;;无机焦磷酸化酶基因的克隆与植物表达载体的构建[J];热带作物学报;2007年02期
5 蓝海燕,田颖川,张丽华,刘桂珍,王兰岚,陈正华;烟草β-1,3-葡聚糖酶cDNA克隆、大肠杆菌表达及植物表达载体的构建[J];生物工程学报;1998年04期
6 张竞秋,邢燕平,哈斯阿古拉;苜蓿花叶病毒复制酶基因全长cDNA植物表达载体的构建和对烟草的转化[J];内蒙古大学学报(自然科学版);2004年04期
7 任雪艳,陈创夫,孔庆军,高剑锋,祝建波;大肠杆菌菌毛抗原K88与热稳定肠毒素ST融合基因植物表达载体的构建及其在烟草中的初步表达[J];石河子大学学报(自然科学版);2005年01期
8 李伟;陈晓阳;杜金友;高琼;;PttGA20ox1基因在转化烟草植株中的表达[J];西北植物学报;2006年01期
9 郝岗平;张友灿;苗苗;王健美;李艳玲;;广范围高效的植物乙型肝炎病毒表面抗原表达载体构建及鉴定[J];泰山医学院学报;2006年06期
10 刘显军;刘忠松;;RNAi研究及在植物中的应用[J];作物研究;2006年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春台;;一个新的烟草糖基转移酶的初步研究[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
2 田爱梅;曹家树;;白菜雄性不育相关基因BcMF15启动子的克隆、序列分析及植物表达载体的构建[A];中国园艺学会十届二次理事会暨学术研讨会论文摘要集[C];2007年
3 郝建江;刘望夷;谢伟军;黄骏麒;龚蓁蓁;;抗真菌蛋白(AFP)基因转化棉花和烟草的研究[A];植物分子育种——第四届全国植物分子育种学术研讨会论文集[C];2004年
4 林炳英;李梅;;乙肝表面抗原基因植物表达载体的构建[A];2006中国植物细胞发育与分子生物学学术研讨会论文集[C];2006年
5 陈红漫;祝令香;董志扬;;酿酒酵母海藻糖-6-磷酸合成酶基因克隆及植物表达载体的构建[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
6 高水平;范丙友;刘改秀;史国安;李嘉珏;孔祥生;;牡丹ACS反义基因植物表达载体的构建[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
7 罗齐军;朱昌叁;周鹏;曾富华;;Rs-AFP2基因植物表达载体的构建及其转化辣椒的研究[A];2005年全国植物逆境生理与分子生物学研讨会论文摘要汇编[C];2005年
8 胡根海;喻树迅;范述丽;宋美珍;王清连;付远志;;陆地棉叶绿体超氧化物歧化酶基因的克隆与植物表达载体的构建[A];中国棉花学会2007年年会论文汇编[C];2007年
9 周庆丰;曹永长;毕英佐;;传染性法氏囊病病毒VP2基因植物表达载体的构建[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
10 谢会;张春荣;陈云凤;黄霞;黄学林;;苜蓿TPP基因cDNA全长序列的克隆及植物表达载体的构建[A];全国“植物生物技术及其产业化”研讨会论文摘要集[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 本报记者 薛冬  通讯员 潘楠;我国何以开展转基因抗虫棉研究[N];光明日报;2002年
2 王星海 本报记者 刘传书;从特区走出国门[N];科技日报;2003年
3 铁铮;基因技术消除杨树虫害[N];人民日报海外版;2003年
4 范天舒 郑爱中 关尔;“创世纪”:扬起转基因产业旗帜[N];大众科技报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 Shahjahan Shabbir Ahmed Rana;辣椒多聚半乳糖醛酸酶基因(CaPG)在茄科植物上的表达与功能分析[D];西北农林科技大学;2012年
2 冷华妮;植物栓塞修复机制与质膜内在水通道蛋白基因的克隆、表达和转基因研究[D];中国林业科学研究院;2012年
3 周晓红;弓形虫MAG和tSAG1在转基因番茄中的表达研究[D];第一军医大学;2004年
4 唐前君;双生病毒外壳蛋白和传毒相关蛋白基因介导的病毒抗性研究[D];湖南农业大学;2010年
5 李丽娅;铁(Ⅲ)螯合物还原酶在植物铁代谢中的作用研究[D];哈尔滨师范大学;2011年
6 韩小娇;杨树木质部细胞程序化死亡的类Caspase、PtVPE与PtCDD作用研究[D];中国林业科学研究院;2011年
7 唐宏琨;激发子基因peaT1转化棉花和烟草体系的建立及功能分析[D];中国农业科学院;2010年
8 刘学奋;银杏黄酮相关基因的克隆及转化[D];复旦大学;2006年
9 范爱丽;大白菜细胞质雄性不育基因orf224和orf138表达载体构建及遗传转化[D];西北农林科技大学;2009年
10 杨应华;人源多肽抗生素LL-37/hCAP-18的初步研究[D];中国协和医科大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 马鑫;柚柠檬苦素葡萄糖基转移酶基因的克隆、表达及植物表达载体的构建[D];西南大学;2011年
2 郁萌萌;光叶楮再生体系的建立及农杆菌介导的AtNHX1基因转化光叶楮的初步研究[D];南京师范大学;2005年
3 蔺晓忠;密码子优化的O型口蹄疫病毒VPI基因转化饲草玉米的高效表达载体构建[D];甘肃农业大学;2007年
4 王心宇;番茄DR8基因启动子转化烟草及其定性研究[D];重庆大学;2009年
5 芮志佩;金属硫蛋白(MT)基因植物表达载体的构建及其在水生美人蕉中表达的初步研究[D];扬州大学;2009年
6 于丹丹;番茄转录因子SlMYB12介导的类黄酮合成过程中的功能研究以及水稻抗病相关基因OsDRxoc5的功能分析[D];山东农业大学;2011年
7 苏月焱;多基因植物表达载体的构建及转化分析[D];中国农业科学院;2013年
8 刘娜;无核荔枝中果胶乙酯酶基因转化番茄的研究[D];海南大学;2012年
9 王爱连;阔叶猕猴桃GalDH基因植物表达载体的构建及转化番茄的研究[D];西北农林科技大学;2011年
10 刘晓娜;植物凝集素基因植物表达载体的构建及遗传转化甘蔗[D];海南大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026