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《东北林业大学》 2009年
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大豆肽的分离纯化及应用研究

孙莉洁  
【摘要】: 大豆肽具有许多独特的理化特性与生物学活性,同时具有原料来源广泛、价廉,安全性好,无毒副作用,便于产业化生产的优点。本文以两种样品肽作为研究对象,分别对其理化性质,分离纯化方法以及具体的应用进行研究,为大豆肽产品的继续深入研究提供了试验基础。 分析测定两种样品肽的一般成分及理化性质,结果表明:大豆分离蛋白肽和豆粕肽的氨基酸组成基本一致,但蛋白肽含量相差较大;在较广泛的pH值条件下,前者保持更好的溶解状态。随着浓度的增大,两种样品肽的粘度均有增加,但浓度超过60%后,大豆分离蛋白肽保持良好的流动性,而豆粕肽的流动性降低;大豆分离蛋白肽具有更强的还原能力和抗氧化能力,但乳化性及其稳定性却不如豆粕肽。 大豆分离蛋白肽经凝胶过滤层析洗脱分离,选用Sephadex G-25为填料,最佳洗脱条件为:径高比1:35;上样体积3mL;上样浓度0.01g/mL;洗脱流速16mL/h;洗脱液为蒸馏水。高效凝胶渗透色谱(HPGPC)分析结果表明,各洗脱组分均为单一组成,分子量分别为:组分1:1860Da;组分2:1426Da;组分3:853Da;组分4:376Da。红外色谱分析表明:四个组分的峰形基本一致,在3049-3406cm~(-1)处和1690-1630cm~(-1)之间具有典型的酰胺吸收峰。 选用DA021-CⅡ型大孔吸附树脂作为填料洗脱分离豆粕肽,径高比1:30,样品肽液pH值3.0,浓度45mg/mL,上样量为40mL,吸附流速为0.5mL/min,解析流速为1.0mL/min,水解析体积为2BV,经梯度乙醇洗脱可以得到4个组分;继续用Sephadex G-25柱层析洗脱得6个组分,HPGPC测定其分子量分别为:aⅠ:1845Da、209Da;bⅠ:288Da;bⅡ:4019Da、402Da;cⅠ:2314Da、197Da;dⅠ:1318Da、180Da;dⅡ:2719Da、209Da。 采用响应面法(RSM)对大豆肽与钙的螯合工艺条件进行优化,最佳工艺参数为:大豆肽与氯化钙的混合比4.2:1(w/w),水浴时间21.3min,无水乙醇添加6倍,大豆肽-钙的得率可达65.48%,钙含量为7.74g/(100g大豆肽-钙产品)。红外色谱分析表明:在大豆肽与钙的螯合试验中,氨基与羧基均参与了螯合反应。 试验采用活菌计数法和光密度法分析两种样品肽对S.thermophilus生长的影响,结果表明:两种样品肽均促进了S.thermophilus的生长,但随着在培养基中添加量的增加,豆粕肽对S.thermophilus的促生长作用逐渐减弱,而大豆分离蛋白肽的促生长作用则增强。利用光密度法比较两种样品肽对B.infantis生长的影响,结果表明:添加较少量的豆粕肽对B.infantis的促生长作用很明显,但随着添加量的增加,促生长作用减弱;而大豆分离蛋白肽对B.infantis的促生长作用却随着添加量的增加平缓增强。
【学位授予单位】:东北林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:TS201.2

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