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《东北林业大学》 2009年
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二色补血草LbGRP基因的克隆和抗逆性分析

张大伟  
【摘要】: 干旱、低温和高盐是严重影响作物生长发育及产量的环境胁迫因子。许多研究表明LbGRP(glycine-rich RNA-binding protein)基因在植物的抗寒和抗盐胁迫过程中发挥着重要的作用。本研究从二色补血草(Limonium bicolor)中克隆得到的LbGRP基因。首先,研究了该基因在不同胁迫下在二色补血草茎、叶中的表达情况。然后将该基因构建到酵母表达载体pYES2中,对其进行酿酒酵母的遗传转化;并对重组酵母进行不同逆境胁迫,以验证二色补血草LbGRP基因的抗逆性;为了深入研究LbGRP基因的功能,利用农杆菌介导法将LbGRP基因导入烟草基因组中,通过对转基因烟草的盐碱胁迫试验,对LbGRP基因进行进一步的功能验证。 主要研究结果如下: (1)克隆了二色补血草LbGRP基因的全长cDNA序列,并研究了该基因在不同胁迫下在二色补血草根、叶中的表达情况。用实时定量RT-PCR方法检测该基因对低温、NaCl、KCl、NaHCO_3、Na_2CO_3和聚二乙醇(PEG)胁迫的基因表达模式的结果表明,低温能诱导LbGRP基因在二色补血草根和叶中表达,而在NaCl胁迫下,LbGRP基因在二色补血草根和叶中表达均受抑制。 (2)将LbGRP基因与酵母表达载体pYES2连接,获得了pYES2-LbGRP重组质粒,并将其转化到酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1(pYES2-LbGRP)。对INVSc1(pYES2-LbGRP)和对照菌株进行半乳糖诱导,以研究外源基因LbGRP在酵母中的的表达情况;Northern杂交结果表明,INVSc1(pYES2-LbGRP)重组酵母经诱导后能够表达外源LbLbGRP基因。 (3)对重组酵母INVSc1(pYES2-LbGRP)进行了NaCl、KCl、Na2CO_3、NaHCO_3、PEG和低温胁迫处理,处理结果证实INVSc1(pYES2-LbGRP)酵母的抗逆性明显高于对照INVSc1(pYES2)菌株;初步认为重组酵母处于逆境胁迫时,通过LbGRP基因的表达,增强了酵母对逆境的耐受能力。 (4)采用根癌农杆菌介导的转化法对烟草进行遗传转化,共获得20株卡那霉素抗性芽,对其中9株进行PCR检测,结果9株全部为阳性转基因植株;进一步进行Northern杂交检测,结果表明外源基因能够在烟草中表达。 (5)对5个转基因株系进行了NaCl胁迫处理,分析了逆境胁迫条件下转基因烟草与非转基因对照的丙二醛(MDA)含量、过氧化物酶(POD)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、脯氨酸含量和可溶性蛋白等指标的变化。结果表明:NaCl胁迫处理后,转基因株系的POD活性、SOD活性、CAT活性、可溶性蛋白含量均较非转基因植物有所提高,5个株系中B14株系表现更佳。 综合以上结果,LbGRP基因的表达能够不同程度提高转基因烟草逆境胁迫下的耐受能力,证实LbGRP基因具有提高植物耐盐性的功能;同时综合各个转基因株系几项生理指标的变化,认为转基因株系14号对盐碱胁迫的抗性更强,是理想的耐逆株系。
【学位授予单位】:东北林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S682.19

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【引证文献】
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1 魏少华;拟南芥、小麦及玉米脂肪酸Alpha-DOX基因研究[D];西北农林科技大学;2010年
【参考文献】
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1 汪耀富,蔡寒玉;烟草抗旱生理生化研究进展[J];安徽农业科学;2005年03期
2 赵自国,陆静梅;植物耐盐性研究及发展[J];长春师范学院学报;2002年02期
3 陈雅君;冯淑华;陈桂芬;;植物抗旱性鉴定指标的研究现状与进展[J];中国林副特产;2005年06期
4 王玉成,薄海侠,杨传平;胡杨、柽柳总RNA提取方法的建立[J];东北林业大学学报;2003年05期
5 肖雯,贾恢先,蒲陆梅;几种盐生植物抗盐生理指标的研究[J];西北植物学报;2000年05期
6 王俊刚,陈国仓,张承烈;水分胁迫对2种生态型芦苇(Phragmites communis)的可溶性蛋白含量、SOD、POD、CAT活性的影响[J];西北植物学报;2002年03期
7 白爽;宋启平;刘桂丰;姜莹;林士杰;;转betA基因的小黑杨花粉植株耐盐性分析[J];分子植物育种;2006年01期
8 姜立智,梁宗锁;干旱胁迫对植物基因的诱导及基因产物的变化[J];干旱地区农业研究;2001年03期
9 王霞,侯平,尹林克,冯大千,潘伯荣;水分胁迫对柽柳植物可溶性物质的影响[J];干旱区研究;1999年02期
10 张彤,齐麟;植物抗旱机理研究进展[J];湖北农业科学;2005年04期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 俞嘉宁;小麦耐旱、耐盐相关基因的克隆、分析与功能研究[D];西北农林科技大学;2003年
2 段晓光;转基因聚合提高烟草耐盐性的研究[D];山东大学;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘丽云;侯传本;王明友;郑延海;贺明荣;;外源钙离子对盐胁迫下小麦萌发的影响[J];山东农业科学;2007年05期
2 朱妍妍;张卫华;于玉梅;王志峰;曹齐卫;王秀峰;孙小镭;;激素配比对黄瓜子叶再生和抗氧化酶活性的影响[J];山东农业科学;2008年02期
3 张清霞;杨晓云;张淑霞;王媛;司朝光;;大白菜花药培养影响因素的研究[J];山东农业科学;2009年01期
4 杨宁;刘仲兰;王克安;郑东峰;焦自高;孙小镭;王冰;许莉;;福施壮对黄瓜幼苗生长发育指标的影响[J];山东农业科学;2009年03期
5 洪晓晓;于晓英;;园林地被植物抗旱机制研究进展[J];山东农业科学;2009年05期
6 王思思;张吉旺;刘鹏;董树亭;王空军;;干旱对不同玉米品种苗期根系生理生化特性的影响[J];山东农业科学;2009年06期
7 马箐;于立峰;孙宏丽;唐琪;王宝山;杜希华;;NaCl胁迫对不同甘薯品种体内离子分配的影响[J];山东农业科学;2012年01期
8 刘建才;姜远茂;彭福田;魏绍冲;公艳;;锰过量对平邑甜茶生长及~(15)N吸收、利用与分配的影响[J];山东农业科学;2012年02期
9 牛永强;高鹏;路来明;杨华;;草坪草的低温胁迫及抗寒性的研究进展[J];山东农业科学;2012年03期
10 武德;曹帮华;郑黎明;张大鹏;;碱式盐胁迫对绒毛白蜡保护酶系统的影响[J];安徽农学通报;2007年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张清霞;司朝光;王媛;张淑霞;吕享华;杨晓云;;抗根肿病大白菜的花药培养[A];山东园艺学会第七次会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2011年
2 段世萍;臧新洲;祝新建;杜尧东;;植物受低温危害的生理生态机制[A];经济策论(下)[C];2011年
3 王则金;胡亮;童金华;陈纯;;贮藏温度和成熟度对番木瓜冷害影响研究[A];走中国创造之路——2011中国制冷学会学术年会论文集[C];2011年
4 黄苏珍;;铅、盐胁迫对喜盐鸢尾生长及生理抗性的影响[A];第二届重金属污染监测风险评价及修复技术高级研讨会论文集[C];2008年
5 王海光;李自超;;植物干旱胁迫应答基因及其产物研究进展[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
6 王巧燕;陈明;邱志刚;程宪国;徐兆师;李连城;马有志;;一个新的编码大豆DREB转录因子基因的克隆及鉴定[A];2005年全国作物遗传育种学术研讨会暨中国作物学会分子育种分会成立大会论文集(二)[C];2005年
7 程林梅;孙毅;任永玲;;转基因耐盐植物研究进展[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
8 史金丽;王立刚;刘景辉;邱建军;;水分胁迫下燕麦生理指标的变化及其与产量的相关关系[A];中国作物学会2007年学术年会论文集[C];2007年
9 包云飞;程鹏;熊兴耀;洪亚辉;;马铃薯盐胁迫下生理生化变化研究[A];马铃薯产业与科技扶贫(2011)[C];2011年
10 许竞早;朱虹;汪世龙;孙晓宇;朱融融;姚思德;;高剂量率电子束诱变筛选高产量耐高温酒精酵母[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(一)[C];2007年
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1 杨守军;根系调控对枣树(冬枣)生长及代谢影响的效应研究[D];山东农业大学;2010年
2 王庆莲;苹果多胺和脯氨酸合成代谢相关基因的功能鉴定[D];山东农业大学;2009年
3 种培芳;荒漠植物红砂、白刺和沙拐枣抗旱指标及抗旱性综合评价研究[D];甘肃农业大学;2010年
4 李惠华;龙眼体胚发生过程中激素代谢和信号转导相关基因的克隆与表达[D];福建农林大学;2010年
5 李培英;新疆草坪用野生偃麦草种质资源评价[D];新疆农业大学;2010年
6 盖玉红;盐生和中生植物对盐害的响应及其抗性结构机制研究[D];东北师范大学;2010年
7 李瑞利;两种典型盐生植物耐盐机理及应用耐盐植物改良盐渍土研究[D];南开大学;2010年
8 田生科;超积累东南景天(Sedum alfredii Hance)对重金属(Zn/Cd/Pb)的解毒机制[D];浙江大学;2010年
9 韩莹琰;白菜花粉发育相关的C2H2型锌指蛋白新基因BcMF20的克隆与功能验证[D];浙江大学;2011年
10 童旭宏;抗草甘膦棉花突变体R1098的选育及其抗性机理研究[D];浙江大学;2011年
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1 刘红梅;农杆菌介导百子莲抗寒基因CBF1高效转化体系的建立[D];华中农业大学;2010年
2 于晓霞;三个扇子花品种对光照与土壤的适应性及对高温与干旱胁迫生理响应[D];华中农业大学;2010年
3 宋俊乔;水稻叶片形态、解剖结构与抗旱性的关系研究[D];华中农业大学;2010年
4 高胡静;百合离体条件下的耐盐性评价和EMS诱变育种初步研究[D];华中农业大学;2010年
5 吴娟;印度酸橘CrNCED3基因的克隆与功能鉴定[D];华中农业大学;2010年
6 马明勇;环境胁迫对莲草直胸跳甲生存与繁殖的影响[D];中南林业科技大学;2009年
7 冯玖玲;杜氏盐藻RbcS基因家族新成员的克隆及功能研究[D];郑州大学;2010年
8 杨洛滨;盐胁迫下5个树种根系活力及Na~+,K~+含量影响的研究[D];山东农业大学;2009年
9 张璐;丛枝菌根真菌(AMF)对紫花苜蓿耐盐性的影响[D];山东农业大学;2010年
10 吴耀领;抗旱型与丰产型小麦品种对干旱高温胁迫的响应[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
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1 齐宏飞;阳小成;;植物抗逆性研究概述[J];安徽农业科学;2008年32期
2 梁慧敏,夏阳,王太明;植物抗寒冻、抗旱、耐盐基因工程研究进展[J];草业学报;2003年03期
3 华慧,周思翔,王正荣;外源基因在巴斯德毕赤酵母中的表达[J];国外医学.生物医学工程分册;2003年03期
4 马龙;潘克厚;石娟;;α-双加氧酶及其研究进展[J];海洋水产研究;2007年06期
5 齐连权,陈薇,于长明,来大志,翁少洁,王海涛;两个新型多拷贝毕赤酵母表达载体的构建[J];军事医学科学院院刊;2002年04期
6 唐中华,郭晓瑞,张洋洋,安志刚,于景华,祖元刚;拟南芥MT-II过量表达提高抗旱性(英文)[J];植物研究;2005年04期
7 欧阳立明,张惠展,张嗣良,刘志敏;巴斯德毕赤酵母的基因表达系统研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2000年02期
8 王华春,陈清轩;充分利用EST数据库资源[J];生物化学与生物物理进展;2000年04期
9 李晶,赵晓祥,沙长青,张淑梅,田洁萍;甲醇酵母基因表达系统的研究进展[J];生物工程进展;1999年02期
10 邬小兵,乐国伟,张必武,施用晖;影响毕赤酵母高效表达外源蛋白的因素[J];生物技术;2002年04期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 史婧;蛇毒纤溶酶Alfimeprase在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定[D];西北农林科技大学;2007年
2 齐亚飞;小麦脂肪酸α-双加氧酶体外表达及在小麦中表达模式分析[D];西北农林科技大学;2007年
3 张美祥;拟南芥脂肪酸α-双加氧酶DOX1和DOX2的原核表达、纯化及DOX1可变剪切研究[D];西北农林科技大学;2007年
4 张小梅;拟南芥DOX1和DOX2基因的初步研究[D];西北农林科技大学;2008年
【二级参考文献】
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1 傅秀云,崔光泉,林昶;冬小麦耐盐力与脯氨酸含量的关系[J];山东农业科学;1988年02期
2 王春英,张秀清,潘月胜,巩东营;抗盐耐旱优良玉米杂交种——鲁单850[J];山东农业科学;2000年03期
3 黄承彦,楚秀生,杨平平,单承荣,殷毓芬,颜挺进;外源DNA导入技术培育抗旱耐盐小麦新品种[J];山东农业科学;2000年04期
4 孙梅霞,陈义红;烤烟不同水分条件下成熟期叶片植物学特性[J];安徽农业科学;2002年04期
5 全先庆,高文;盐生植物活性氧的非酶促清除机制[J];安徽农业科学;2003年03期
6 孙梅霞,祖朝龙,徐经年;干旱对植物影响的研究进展[J];安徽农业科学;2004年02期
7 刘贯山;干旱胁迫对烤烟早发的影响[J];安徽农业科学;1998年03期
8 孔凡明,彭怀俊,吴廷全,韦学平,王叶;烟草与TMV不同互作体系中部分生理指标的测定[J];安徽农业大学学报;2001年04期
9 陈学平,姚忠达,郭家明,陈良友,陈龙,孟晓辉;不同烟草品种感染TMV病程过程中CAT、PAL活力变化研究[J];安徽农业大学学报;2002年02期
10 孔凡明,杨光,陈学平,夏凯,许志刚,周燮;烟草与TMV不同互作体系中的活性氧及抗氧化酶系活性比较[J];安徽农业大学学报;2002年03期
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1 张瑞霞;烤烟激素与多胺对水分迫和氮肥形态的响应及其调节研究[D];河南农业大学;2004年
2 孙志宾;盐芥Th TRXh功能分析和盐芥不同生态型的比较蛋白质组学初步研究[D];山东师范大学;2006年
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1 潘刚;韩舒睿;沈智超;邸柄荣;孙银苹;赵卫国;楼程富;潘一乐;;桑树橡胶延伸因子基因的克隆与表达分析[J];蚕业科学;2009年04期
2 杨克强,王跃进,张今今,王西平,张剑侠,万怡震;基于表达序列标签(EST)的基因克隆和基因表达分析研究进展[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2002年04期
3 陈迪;陈永勤;杨之帆;张艳艳;肖柳青;;盾叶薯蓣环阿屯醇合酶基因克隆与表达(英文)[J];西北植物学报;2009年02期
4 李先文;余海波;孟琼;李峥峥;张新玉;;茶树一个冷诱导基因的克隆及其表达分析[J];中国农学通报;2011年19期
5 柏佳宁;马同锁;赵宝华;;鸡传染性支气管炎X毒株S1基因的克隆与真核表达[J];中国兽医学报;2006年02期
6 黄玉海;汪以真;单体中;刘建新;冯杰;;猪心型脂肪酸结合蛋白基因的克隆及不同生长阶段表达的差异[J];农业生物技术学报;2006年05期
7 潘宝华;潘刚;方荣俊;赵卫国;张林;程嘉翎;刘利;;桑树天冬酰胺合成酶基因的克隆与表达分析[J];蚕业科学;2011年01期
8 申望;叶茂;石戈;王日昕;;三疣梭子蟹Profilin基因全长cDNA的克隆与表达分析[J];动物学研究;2010年03期
9 张跃进;郝晓燕;梁宗锁;林文超;郭宏波;;莲藕多酚氧化酶基因(PPO)的克隆与表达分析[J];农业生物技术学报;2011年04期
10 许兰珍;何永睿;姜国金;刘小丰;陈善春;;cDNA文库构建及其在植物抗性研究中的应用[J];安徽农业科学;2007年03期
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1 冯小曼;侯海军;李加琪;;猪CAT基因克隆及在不同代次猪胎儿成纤维细胞中的表达规律[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
2 彭俊飞;强巴央宗;张浩;鲍海港;凌遥;吴常信;;藏鸡内皮型一氧化氮合酶基因克隆与胚胎尿囊绒毛膜组织表达[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
3 生书晶;赵树进;;何首乌Ⅲ型PKS基因的克隆和表达分析[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
4 潘刚;韩舒睿;沈智超;邸柄荣;孙银苹;赵卫国;楼程富;潘一乐;;桑树橡胶延伸因子基因克隆与表达分析[A];中南五省区蚕桑育种协作研讨会论文集[C];2009年
5 董飚;龚道清;孟和;顾志良;;鸭Rab6基因cDNA的克隆、序列分析及表达[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(上册)[C];2006年
6 张夏南;杨绍兰;王成荣;王然;;‘黄金梨'果实木质素合成途径相关酶基因的克隆及其在果实发育中的表达分析[A];中国园艺学会2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
7 黄有军;陈芳芳;周秦;郑炳松;王正加;夏国华;黄坚钦;;山核桃成花分子机理研究[A];第六届全国林木遗传育种大会论文集[C];2008年
8 李磊;吴茂森;陈华民;何晨阳;;受水稻白叶枯病菌抑制的水稻C端结合蛋白基因OsCtBP-A的功能鉴定[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
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1 记者 高原;吸烟会使人体基因表达异常[N];新华每日电讯;2010年
2 记者 李雪梅;酒精影响基因表达[N];人民日报;2006年
3 张忠霞;特制RNA轻推一下,就能“唤醒”基因[N];新华每日电讯;2007年
4 陈勇;基因表达有性别差异“对性下药”有望实现[N];医药经济报;2006年
5 张忠霞;美科学家利用RNA激活基因[N];医药经济报;2007年
6 记者 耿挺;脑是怎样发育的[N];上海科技报;2007年
7 海文;美找到激活基因新方法[N];中国医药报;2007年
8 记者 李含;诺奖得主引领学子探寻RNA微观世界[N];新清华;2007年
9 记者 操秀英姜海;美发现数百个控制女性生育基因[N];科技日报;2007年
10 刘洁;FDA接受默克新癌症治疗药物上市申请[N];医药经济报;2006年
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1 王昕;巨噬细胞集落刺激因子可溶性受体的克隆表达及其相关性研究[D];中国协和医科大学;1998年
2 邢继红;拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2006年
3 林展;小麦膨胀素基因的分离、克隆与功能鉴定[D];中国农业大学;2005年
4 戴艳;小麦组蛋白修饰酶基因及DNA甲基转移酶基因的分离及鉴定[D];中国农业大学;2005年
5 李志勇;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的CaM基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
6 谢科;水稻WRKY10基因的功能研究[D];浙江大学;2005年
7 温新宇;人CD38分子的克隆表达、单克隆抗体的制备及其功能的初步研究[D];第二军医大学;2005年
8 魏继承;白桦花期抑制性消减文库的构建及花发育相关基因的克隆[D];东北林业大学;2006年
9 赵明莲;食线虫真菌侵染性胞外蛋白酶的基因克隆与表达[D];云南大学;2003年
10 郭虹;弓形虫侵入相关分子ROP1基因的克隆及其DNA免疫研究[D];中山医科大学;1999年
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1 刘相萍;发育调控基因Pax2的克隆化及重组Pax2的真核表达[D];青岛大学;2004年
2 许慧霞;TTV抗原ORF1的基因克隆及原核表达[D];郑州大学;2005年
3 韩光;大菱鲆钙激活型钾离子通道TSKCa基因的克隆和时空表达特征[D];国家海洋局第一海洋研究所;2007年
4 张大伟;二色补血草LbGRP基因的克隆和抗逆性分析[D];东北林业大学;2009年
5 李运千;马尔尼菲青霉特异性基因的克隆表达及多克隆抗体的制备[D];广西医科大学;2005年
6 王改玲;鳜非特异性免疫因子的克隆及原核表达[D];西北农林科技大学;2005年
7 王瑞;人CDK4基因克隆与其在大肠杆菌中的表达[D];吉林大学;2006年
8 韩婷;人FOXL2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[D];山东大学;2006年
9 杨雅婷;来源于枯草芽孢杆菌的中温α-淀粉酶基因的克隆及在原核微生物中的表达[D];山东师范大学;2007年
10 葛琴雅;非纯培养物细菌蛋白酶DNA的克隆与表达[D];四川大学;2005年
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