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《东北林业大学》 2009年
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农杆菌介导TCS基因转入山新杨的遗传转化研究

王丹  
【摘要】: 山新杨(Populus davidiana×P.bollena)是我国多名育种专家耗时近半个世纪培育出的白杨派新品种,是由新疆杨为父本、山杨为母本杂交而成,是继银中杨后又一被广泛推广的优良树种,随着山新杨的广泛栽培,病虫害的发生越来越严重,其抗性育种显得尤为迫切。采用基因工程技术开展转基因杨树的研究,是培育抗逆、抗虫和抗病杨树新品种的有效途径。本研究将来自植物栝搂的具有抗真菌和病毒作用的天花粉蛋白基因通过根癌农杆菌介导法转入山新杨基因组内,使其获得抗真菌和病毒的能力,培育出优良抗性树种。主要研究结果如下: 利用冻融法将质粒pC-tPro-TCS-GUS和pC-tPro-TCS转入根癌农杆菌LBA4404中,制备一定量的工程菌。通过敏感性试验,确定了山新杨遗传转化过程中抑菌性抗生素头孢噻肟钠适宜浓度为500mg/L,选择性抗生素潮霉素抑制叶片分化和芽生根的浓度为2mg/L,抑制茎段生根浓度为6mg/L。 以生长20d左右的健壮的山新杨组培苗叶片为材料,探讨了预培养时间、菌液浓度和侵染时间等条件对转化效率的影响,得出山新杨遗传转化的较优条件为预培养时间2d,侵染菌液浓度OD_(600)=0.2,侵染时间5min;共培养时培养基pH值为5.8,AS浓度为200μmol/L,培养3d;脱菌培养基中加入3mg/L硝酸银抑菌效果较好;筛选采用延迟筛选,延迟选择时间为一周。 利用优化的农杆菌介导山新杨遗传转化体系,得到了7株抗性植株,通过PCR分子检测,出现了特异性扩增条带,而阴性对照没有特异性条带产生;通过PCR-Southern的进一步分子检测,均出现了特异性的杂交条带,阳性率为100%,说明外源基因已经整合到山新杨基因组中,对转基因植株的Northern杂交及Western杂交鉴定和抗病毒能力的检测还有待于进一步研究。
【学位授予单位】:东北林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S792.11

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