收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猴头菇CB1锰过氧化物酶全长cDNA的基因克隆及序列分析

尹立伟  
【摘要】: 白腐菌具有三种重要的木质素降解酶:锰过氧化物酶(Manganese Peroxidase/MnP)、漆酶(Laccase)和木质素过氧化物酶(Lignin Peroxidase/LiP)。因此,白腐菌对木质素具有很强的降解能力。其中MnP是木质素起始降解的关键酶之一,MnP是真菌分泌的一种糖基化含铁血红素的胞外过氧化物酶,分子量在38~62.5 kDa之间,广泛存在于白腐菌中。在Mn2+和H2O2存在时,MnP能氧化分解芳香环多聚体。目前国内对白腐菌MnP的研究多集中在酶学的基础上,染料的脱色、纸浆的生物漂白、有机污染物的降解等。对于白腐菌MnP的分子生物学研究还相对较少。猴头菇Hericium erinaceus是家喻户晓的药食两用的真菌,国内外对其营养功效、抗病机理及栽培特性已有具体研究,而猴头菇又是我国东北林区的一种木材白腐菌,其木质素降解酶系统及其基因的研究还尚属空白。研究猴头菇分解木质素的酶系统及其基因结构和表达,可为深入研究猴头菇分解木质素酶系统的作用机理以及酶基因的表达调控等分子生物学机制提供基础研究,对进一步构建优良工程菌株具有重要意义和理论价值。 本文对猴头菇菌株CB1和灰树花菌株迁西二号进行了系统发育分析和主要木质素降解酶系统的检测;并对猴头菇菌株CB1 MnP的cDNA基因进行了克隆和序列分析,主要研究结果如下: 1.对白腐菌猴头菇菌株CB1(H. erinaceus CB1)和灰树花菌株迁西二号(Grifola frondosa qx2)进行了ITS序列扩增与测序(GenBank登录号分别为GU584100和GU584099),并对猴头菇和灰树花及相关白腐菌进行了基于ITS序列的系统发育分析。结果表明H. erinaceus CB1和G. frondosa qx2与属下种间及其它相关的白腐真菌聚类成群。这些聚类成群的白腐菌之间遗传距离较近,亲缘与系统发育关系较密切。 2.采用LNAS培养基在4种不同的培养液中对白腐菌猴头菇菌株CB1(H.erinaceus CB1)和灰树花菌株迁西二号(G frondosa qx2)的木质素降解酶系统进行了锰过氧化物酶、漆酶和木质素过氧化物酶活性检测。结果表明,猴头菇和灰树花可同时产生MnP和Laccase。但都不产生LiP,两种酶的活性变化是有规律的。在含有Mn2+及添加了酶作用底物木屑和2,6-DMP的培养液中可同时检测到MnP和Laccase的活性变化;在不含Mn2+的培养液中这两种白腐菌均未检测到MnP的活性变化,但可检测到Laccase的活性变化;猴头菇在含Mn2+但未添加底物的培养液MnP最大酶活仅为3.23U·L-1,Laccase最大酶活仅为2.41 U·L-1;灰树花MnP最大酶活仅为2.82 U·L-1,Laccase最大酶活仅为4.49 U·L-1。证明了Mn2+是猴头菇和灰树花产生MnP的必要因子,而Laccase的产生则不受该条件的制约。在含Mn2+的LNAS培养基中加入木屑为底物条件下,猴头菇MnP最大酶活为45.56U·L-1,Laccase最大酶活为61.85U·L-1灰树花MnP最大酶活为8.06U·L-1,Laccase最大酶活仅为9.85U·L-1,表明不同白腐菌之间酶的活性差异很大。在培养液内添加酶作用的底物木屑和2,6-DMP后,可以轻微地提高MnP和Laccase的分泌量,表明底物对于白腐菌的木质素降解酶系统可产生诱导作用。 3.采用简并PCR、RT-PCR、RACE等方法扩增出猴头菇成熟菌丝中MnP的cDNA全长基因,命名为He-MnP(GenBank登录号为HM116841)。该基因含有1068 bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),起始密码子ATG,终止密码子TAA,编码355aa,5’非翻译区(5'UTR)有23个核苷酸,3’非翻译区(3'UTR)有130个核苷酸。根据He-MnP的cDNA基因,分别在起始密码子ATG和终止密码子TAA附近碱基设计上下游引物,以猴头菇基因组DNA为模板,扩增得到1535bp MnP全基因序列,经过NCBI对比两条基因的全长序列He-MnP共有8条内含子。并根据He-MnP的cDNA全长序列采用网络工具及分析软件推测了该基因的氨基酸及蛋白的生物学特性。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 余天;;猴头菇塑料大棚栽培技术[J];农村实用技术;2010年03期
2 石磊;;保健猴头菇栽培技术[J];中国农村小康科技;2009年11期
3 蕈园;;消费指导[J];食用菌;1990年05期
4 王正鹏;;猴头烹调四例[J];中国食用菌;1990年05期
5 刘明仁;佳肴良药──猴头菇[J];中国酿造;1996年02期
6 张涛;棉籽壳和玉米芯栽培猴头菇试验[J];安徽技术师范学院学报;2004年01期
7 夏良敏;陈志东;赖兆校;;"山珍"猴头菇栽培技术[J];温州农业科技;2004年04期
8 马光辉;李红超;;猴头菇优质高产栽培技术[J];现代农业科技(下半月刊);2006年09期
9 ;人工栽培猴头菇技术[J];成人教育;1994年Z1期
10 马立验;袋栽猴头菇高产技术[J];福建农业;1998年03期
11 于爱红,黎九贤,胡明伟;东北地区栽培猴头菇的几点体会[J];食用菌;1999年06期
12 龚发;开发山珍猴头菇前景广阔[J];资源开发与市场;2000年04期
13 古家齐;;猴头菇高产栽培技术[J];农村科学实验;2001年12期
14 高玉芳,赵晓光;春季平菇、猴头菇立体栽培关键技术[J];吉林蔬菜;2003年02期
15 丁湖广;;高档猴头菇栽培技术关键(下)[J];新农业;2005年12期
16 蔡铜元;砻糠粉栽培猴头菇初探[J];食用菌;1993年04期
17 ;冬闲田猴头菇栽培[J];技术与市场;2000年08期
18 朱雯;小兴安岭的猴头菇[J];食品与生活;2000年04期
19 王晓瑞;;猴头菇[J];农村实用科技信息;2006年03期
20 曹德宾;;猴头菇高产栽培技术要点[J];农家科技;2009年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 程汉良;姬南京;彭永兴;申欣;吴陈晨;许建和;董志国;;草鱼乙酰辅酶A羧化酶基因全长cDNA克隆[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
2 李西雷;汪桂玲;李家乐;;三角帆蚌GPX基因cDNA全序列克隆及其结构特征[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
3 李西雷;汪桂玲;李家乐;袁一鸣;;三角帆蚌GPX基因cDNA全序列的克隆及其编码蛋白的结构分析[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4 ;Constructing cDNA Microarray to Isolate Novel Differentially Expressed Genes Related to Human Glioma and Characterizations of Novel Full-length Gene PPIL-3[A];中国抗癌协会神经肿瘤专业委员会第八届学术会议论文集[C];2011年
5 刘丹丹;李建梅;韩宏晓;王尚尚;曹李琴;许金俊;陶建平;;巨型艾美耳球虫免疫原性相异株间差异表达基因消减cDNA文库的构建与分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
6 兰欢;卜友泉;崔涛;汪长东;易发平;刘革力;宋方洲;;肿瘤相关新基因PRR11的全长cDNA克隆及其功能初步解析[A];重庆市生物化学与分子生物学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
7 裴宗飞;张文娟;牛钟相;;鸭补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定[A];山东畜牧兽医学会禽病学专业委员会第一次学术研讨会论文集[C];2009年
8 郝丽;李和平;严历;;东北梅花鹿鹿茸尖端组织全长cDNA文库的构建[A];2010中国鹿业进展[C];2010年
9 熊梅;穆亚芳;刘家森;原东伟;郭东春;姜骞;林欢;曲连东;;兔肝cDNA文库的构建[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
10 李鹏;严洁;周开亚;;中华绒螯蟹翻译起始因子4G基因全长cDNA克隆和序列分析[A];第七届全国野生动物生态与资源保护学术研讨会论文摘要集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 覃川杰;瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)脂肪代谢相关基因cDNA的克隆及表达分析[D];华东师范大学;2010年
2 慎小晶;蝶蛹金小蜂cDNA文库抗菌肽基因筛选及表达研究[D];浙江大学;2010年
3 姜争;基于cDNA微阵列技术Ⅱ、Ⅲ期肠癌转移相关基因的筛选、鉴定及应用研究[D];复旦大学;2010年
4 徐庆刚;大熊猫Leptin、Ghrelin和IL-15基因的克隆表达及胃和脾脏cDNA文库的构建[D];浙江大学;2009年
5 李锋;转录组学、蛋白质组学研究海州香薷Cu吸收与耐性分子机理及其cDNA文库的构建[D];浙江大学;2009年
6 邓清超;具有高传播能力的栗疫菌低毒力病毒CHV1-CN280的基因组序列测定与可侵染性全长cDNA克隆构建[D];南京农业大学;2009年
7 方强;间日疟原虫全长cDNA文库的构建与PvGDH的克隆表达、表位鉴定及单抗研究[D];苏州大学;2010年
8 葛荣朝;小麦耐盐相关基因cDNA的克隆与功能研究[D];河北师范大学;2005年
9 刘媛;三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)cDNA文库构建、EST分析及抗脂多糖因子研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
10 许亮;应用cDNA阵列技术对肝细胞肝癌基因表达谱的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 尹立伟;猴头菇CB1锰过氧化物酶全长cDNA的基因克隆及序列分析[D];东北林业大学;2010年
2 郝言明;柔嫩艾美耳球虫两个抗药株消减cDNA文库的序列分析[D];福建农林大学;2010年
3 邓效禹;籽鹅垂体组织全长cDNA文库的构建及部分克隆序列分析[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
4 李付美;莱芜猪心脏组织cDNA文库的构建及部分表达序列标签的分析[D];曲阜师范大学;2010年
5 杜雯林;苹果褐斑病菌钙调素基因的cDNA克隆以及序列分析[D];西北农林科技大学;2010年
6 战晴晴;柴胡全长cDNA文库和遗传图谱的构建及蚕豆病毒属病毒的鉴定[D];东北林业大学;2010年
7 王金萍;枳根全长cDNA文库的构建及生物信息学研究[D];西南大学;2011年
8 刘磊;TMV侵染烟草基因差异表达的cDNA-AFLP分析[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
9 严福祥;乌龟孔雀石绿浸泡后的组织病理学研究及肝脏全长cDNA文库的构建与鉴定[D];暨南大学;2010年
10 杨朝霞;微小牛蜱雌蜱唾液腺消减cDNA文库的构建及卵黄蛋白原基因的原核表达[D];中国农业科学院;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 淑娴;猴头菇治病方[N];民族医药报;2005年
2 北京朝阳医院消化科副主任医师 杨立新;猴头菇是养胃降脂山珍[N];健康时报;2010年
3 王东;猴头菇的栽培[N];江苏科技报;2001年
4 曹德宾;猴头菇采收及采后注意啥?[N];山东科技报;2000年
5 通讯员 范小丽;云和仿原生态栽培猴头菇试验成功[N];丽水日报;2009年
6 周至县农技中心 刘军;如何栽培猴头菇[N];陕西科技报;2001年
7 孔凡真;猴头菇的药用价值及茹脯加工[N];中国特产报;2000年
8 小春;猴头菇栽培技术[N];江苏科技报;2008年
9 陈德明;巧解猴头菇发红[N];山西科技报;2004年
10 贾士龙;猴头菇栽培技法[N];陕西科技报;2007年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978