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《黑龙江中医药大学》 2010年
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定喘穴埋针对哮喘大鼠STAT6 EOTAXIN C-FOS蛋白mRNA表达及相关因子的影响

徐先伟  
【摘要】: 目的: 1、揭示定喘穴埋针对哮喘大鼠模型信号转导子和转录激活子(STAT6)蛋白含量,嗜酸性细胞特异性趋化因子(Eotaxin)蛋白含量及其mRNA表达,以及支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)含量及嗜酸性粒细胞(Eos)数的影响,探索定喘穴埋针治疗支气管哮喘的作用机制,从而为临床治疗哮喘提供新的治疗方法和理论依据。 2、揭示定喘穴埋针对各组大鼠不同时点(60m、90m和120m)肺组织中原癌基因蛋白质(c-fos)表达的影响,以明确定喘穴埋针在支气管哮喘治疗中的神经免疫作用途径及机制,进而丰富定喘穴埋针治疗支气管哮喘的科学内涵。 方法: 选取健康4-6周龄Wistar大鼠136只,采用卵白蛋白(OVA)激发致敏建立哮喘模型。实验一:大鼠随机分为正常对照组8只,哮喘模型组8只,地塞米松组8只,埋针组8只,穴位注射组8只。实验二:大鼠随机分为正常对照组24只、哮喘模型组24只、埋针组24只、埋针并损毁孤束核(NTS)组24只,每组间又随机分为60m、90m和120m三个时点,每个时点大鼠8只。 光镜观察肺组织病理形态学的变化,采用免疫组化法和原位杂交法检测哮喘大鼠模型STAT6、Eotaxin蛋白及其mRNA表达,酶联免疫吸附试验法(ELISA法)检测BALF及血清中IL-4、IL-5含量,瑞氏(Wright)染色法测定BALF中WBC数,Eos数及分类数。采用免疫组化法检测大鼠正常对照组、哮喘模型组、埋针组、埋针并损毁孤束核(NTS)组三个时点(60m、90m、120m)c-fos蛋白的表达。 结果: 1、造模成功后,经干预治疗,埋针组、地塞米松组和穴位注射组与哮喘模型组比较,大鼠激发后6-10min症状明显减轻,引喘潜伏期明显延长,跌倒率显著降低,经统计学处理,有显著性差异(P0.01);埋针组与地塞米松组相近,无显著性差异(P0.05);埋针组与穴位注射组比较有显著性差异,具有统计学意义(P0.01)。穴位注射组与地塞米松组比较有显著性差异,具有统计学意义(P0.01)。 2、哮喘大鼠模型组STAT6蛋白,Eotaxin蛋白及其mRNA表达明显高于正常对照组,经统计学处理,有显著性差异(P0.01);埋针组、地塞米松组和穴位注射组STAT6蛋白、Eotaxin蛋白含量低于模型组,其mRNA表达明显弱于模型组,经统计学处理,有显著性差异(P0.01);埋针组与地塞米松组相近,无显著性差异(P0.05);埋针组与穴位注射组比较有显著性差异,具有统计学意义(P0.01)。穴位注射组与地塞米松组比较有显著性差异,具有统计学意义(P0.01)。 3、哮喘模型组BALF及血清中IL-4、IL-5含量明显高于正常对照组,经统计学处理,有显著性差异(P0.01);埋针组、地塞米松组和穴位注射组BALF及血清IL-4,IL-5含量明显低于哮喘模型组,有显著性差异(P0.01);埋针组与地塞米松组相近,无显著性差异(P0.05);埋针组与穴位注射组比较有显著性差异,具有统计学意义(P0.01)。穴位注射组与地塞米松组比较有显著性差异,具有统计学意义(P0.01)。 4、哮喘模型组BALF中Eos绝对值及Eos%较正常对照组显著升高,经统计学处理,有显著性差异(P0.01);埋针组、地塞米松组和穴位注射组BALF中Eos绝对值及Eos%明显低于模型组,有显著性差异(P0.01);埋针组与地塞米松组相近,无显著性差异(P0.05);埋针组与穴位注射组比较有显著性差异,具有统计学意义(P0.01)。穴位注射组与地塞米松组比较有显著性差异,具有统计学意义(P0.01)。 5、哮喘模型组大鼠肺脏中c-fos表达明显高于正常对照组,经统计学比较,有显著性差异(P0.01);埋针组大鼠肺脏中c-fos表达明显弱于模型组,以120分钟组最为明显,经统计学比较,有显著性差异(P0.01);埋针并损毁孤束核(NTS)组大鼠肺脏中c-fos表达弱于模型组,以120分钟组最为明显,经统计学比较,有显著性差异(P0.01);埋针组哮喘大鼠模型肺脏中c-fos表达弱于埋针并损毁孤束核(NTS)组,以120分钟组最为明显,经统计学比较,有显著性差异(P0.01)。 结论: 1定喘穴埋针可以明显减轻大鼠哮喘症状发作程度。 2定喘穴埋针通过降低哮喘大鼠模型STAT6、Eotaxin蛋白含量以及下调STAT6mRNA、EotaxinmRNA在气道上皮细胞的表达,降低哮喘大鼠BALF及血清中IL-4、IL-5含量,降低BALF中Eos数,来干预气道炎症,从而达到治疗支气管哮喘的目的。 3定喘穴埋针可能通过干预哮喘炎性信息传入的低位整合中枢孤束核(NTS),从而减弱哮喘大鼠模型肺脏中c-fos蛋白的表达,这可能是定喘穴埋针实现其对神经免疫调节作用机制的途径之一。
【学位授予单位】:黑龙江中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R245

【引证文献】
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