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《黑龙江中医药大学》 2015年
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基于TLR4/MyD88信号通路研究针刺“百会”透“曲鬓”穴拮抗脑出血大鼠炎性脑损伤

陈秋欣  
【摘要】:目的:探讨针刺“百会”透“曲鬓”穴对脑出血大鼠脑组织TLR4/MyD88信号通路调控作用。方法:采用自体血方法制备大鼠脑出血模型。将大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺+模型组(以下简称针刺组),每组按1d、3d、7d分为3个亚组。Longa评分法、肢体对称实验评分法、平衡木评分法对脑出血后大鼠神经功能进行评估;HE染色法观察脑组织病理形态;免疫组化法检测血肿TLR4、TNF-α、IL-6的表达;酶联免疫吸附法测定血清TNF-α、IL-6含量;Western-blot法检测血肿组织TLR4、MyD88、NF-kB蛋白的表达。结果:1.神经行为学:模型组大鼠出现不同程度的肢体瘫痪,术后3d神经功能缺损最重,术后7天仍有肢体活动不利症状。针刺组大鼠各时间点与模型组比较神经功能缺损明显减轻,差异显著(P0.01)。2.HE染色结果:模型组大鼠脑组织病理形态变化明显,可见明显出血灶,术后3d脑组织结构破坏最重,术后7d有所减轻,针刺组各时间点与模型组相比病理变化减轻。3.ELISA结果:假手术组可见少量TNF-α、IL-6表达,模型组在各时间点与假手术比较,差异有统计学意义(P0.01),模型组术后3d表达相对最多。各时间点针刺组与模型组相比较,差异显著(P0.01)。4.免疫组化结果:在各时间点假手术组大鼠脑组织可见少量IL-6、TNF-α、TLR-4蛋白表达;模型组在各时间点可见IL-6、TNF-α、TLR-4蛋白高度表达,且均高于假手术组(P0.01),模型组术后3d表达相对最多;针刺组在各时间点可见TNF-α、IL-6、TLR-4蛋白阳性表达,与模型组比较明显下调(P0.01)。相关性分析TLR-4与IL-6表达呈正相关,相关系数为0.871;TLR-4 与 TNF-α表达呈正相关,相关系数为0.982。5. Western blot结果:各组大鼠不同时间点脑组织均有TLR-4、MyD88、 NF-κ B蛋白表达。假手术组可见TLR-4、MyD88、NF-κ B阳性表达;模型组术后Id TLR-4、MyD88、NF-κ B蛋白表达增高,之后出现先上升再下降的趋势,术后3d与术后1d相比TLR-4、MyD88、NF-κ B蛋白表达明显上升,术后7d与术后3d相比TLR-4、MyD88、NF-κ B蛋白表达显著下降,各时间点模型组与假手术组相比(P0.01);针刺组各时间点TLR-4、MyD88、NF-κ B蛋白表达与模型组相比明显下调(P0.01)。相关性分析显示:TLR-4与MyD88表达呈正相关,相关系数为0914;TLR-4与NF-κ B表达呈正相关,相关系数为0.924;MyD88与NF-κ B的表达呈正相关,相关系数为0.999。结论:1.针刺“百会”透“曲鬓”穴可以降低脑出血大鼠神经功能评分,减轻脑出血大鼠脑组织损伤。2.针刺“百会”透“曲鬓”穴可以抑制.TLR-4蛋白的表达,降低血清及血肿组织中炎症因子TNF-α. IL-6的含量,减轻脑出血后继发性损伤。3.针刺“百会”透“曲鬓”穴通过调控TLR4/MyD88信号通路中TLR4、MyD88、 NF-κ B蛋白的表达发挥脑保护作用。
【学位授予单位】:黑龙江中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R245

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