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《黑龙江中医药大学》 2015年
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运用差异蛋白组研究虫草益肾方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织的影响

贠捷  
【摘要】:目的:通过建立单侧输尿管梗阻大鼠模型,研究虫草益肾方对肾间质纤维化大鼠肾功能和组织形态学的影响,并利用蛋白质组学方法探讨肾间质纤维化机制以及虫草益肾方抗肾间质纤维化的作用靶点。方法:将200只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、虫草益肾方组和福辛普利组五组各40只。采用单侧输尿管梗阻的方法建立肾间质纤维化模型,术后第一天开始给药,虫草益肾方组予虫草益肾方水煎液灌胃,福辛普利组予福辛普利钠水溶液灌胃,正常组、假手术组、模型组予等量蒸馏水灌胃,每日一次。在给药后的第6、13、20、27天随机选择各组10只大鼠置于代谢笼中(禁食,不禁水)24小时,收集全部尿液,计算尿量,用于24h尿蛋白含量测定;24小时后处死大鼠收集血清,用于肌酐、尿素氮等生化指标测定;收集肾组织一部分用于肾脏病理检测(HE、Masson染色),一部分用于蛋白质组学iTRAQ检测,一部分用于western blot检测蛋白质组学鉴定出的差异蛋白。结果:1.虫草益肾方可显著改善UU O大鼠一般状态,与模型组比较可增加体重和尿量(P0.05)。2.生化检测结果显示:造模后模型组大鼠24小时尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮水平上升,虫草益肾方组可降低24小时尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮水平(P0.05)。3.HE和Masson染色结果显示:虫草益肾方可改善UUO大鼠肾组织病理改变,与模型组比较可减少纤维化面积百分比(P0.05)。4.通过蛋白质组学共鉴定出模型组、正常组6793个蛋白,其中差异蛋白1862个,模型组上调蛋白875个,下调蛋白987个。5.通过生物信息学对差异蛋白分析,差异蛋白涉及多个生物过程如细胞过程、代谢过程、生物调控、应激反应、信号、免疫系统过程、生物附着、生长等。并提取出315条相关信号/代谢通路如PI3K-Akt、PPAR、MAPK、HIF-1、TNF-α、Toll样受体、VEGF、Wnt、Notch、TGF-β、Jak-STAT等。6.western blot结果显示:与模型组比较,虫草益肾方组肾组织Wnt4、β-catenin表达降低(P0.05)。结论:1. 虫草益肾方可改善大鼠一般状态,增加UUO大鼠体重、尿量。2. 虫草益肾方可减少UUO大鼠尿蛋白,降低血清肌酐、尿素氮水平,改善肾脏功能。3. 虫草益肾方可减轻UUO大鼠肾脏病理改变。4. UUO大鼠肾间质纤维化的机制与多个细胞因子、多条信号通路、多个生物过程有关。5. 虫草益肾方延缓肾间质纤维化的作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路实现的。
【学位授予单位】:黑龙江中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R285.5

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