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《黑龙江中医药大学》 2015年
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电针对吗啡戒断后大鼠学习记忆能力及不同脑区NR2B表达的影响

刘铁镌  
【摘要】:目的:观察电针对吗啡戒断后大鼠的空间学习记忆能力及不同脑区内突触界面结构变化、谷氨酸受体NR2B亚单位表达的影响,探讨电针改善吗啡戒断后大鼠学习记忆能力的作用机制。方法:SD大鼠,48只,雄性,随机分为对照组、模型组、针刺组以及电针组,每组12只。除对照组外,其余三组以递增剂量背部皮下注射盐酸吗啡,末次注射后3h给予纳洛酮快速戒断,通过改良的柳田司知戒断症状评分法确立吗啡戒断模型成功建立。通过不同方法对各组大鼠进行实验观察:(1)观察各组大鼠在不同时间点的体重变化;(2)Morris水迷宫对各组大鼠进行定位航行及空间探索测试,记录平台逃避潜伏期及跨越平台次数;(3)HE染色法、透射电镜法观察各组大鼠在PFC、NAc、AMG、VTA脑区组织病理形态学变化;(4)测量吗啡戒断后大鼠P FC、NAc、AMG、VTA脑区突触界面活性区长度、突触后致密物质厚度、突触间隙宽度及突触界面曲率的变化及不同处置方法对其产生的影响;(5)蛋白印记法检测吗啡戒断大鼠PFC、NAc、AMG、VTA脑区内NR2B蛋白表达的变化及不同处置方法对其产生的影响;(6)RT-PCR法检测吗啡戒断大鼠的PFC、NAc、AMG、VTA脑区内NR2BmRNA表达的变化及不同处置对其产生的影响。结果:(1)吗啡成瘾大鼠在戒断后体重较对照组明显降低,且体重增长迟缓,差异有统计学意义(P0.01),针刺及电针可以促使戒断后大鼠体重增长趋势的恢复,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。(2)Morris水迷宫定位航行测试结果显示,针刺及电针组的大鼠平台逃避潜伏期较模型组显著减少(P0.01),电针组较针刺组明显减少(P0.05);在Morris水迷宫空间搜索实验中,针刺组及电针组较模型组的大鼠穿越平台次数明显增多(P0.05,P0.01),电针组较针刺组显著增多(P0.01)。(3)HE染色观察显示,与模型组比较,针刺及电针对戒断大鼠PFC、NAc、AMG、VTA等脑区内神经组织水肿,神经细胞丢失、萎缩,细胞周围间隙增宽等有明显改善,电针效果优于针刺。透射电镜观察显示,与模型组比较,针刺组在PFC、NAc、AMG、VTA脑区内神经元形态、内质网脱颗粒、线粒体嵴断裂等细胞器损害有所改善,电针组有明显改善。(4)突触结构参数的比较显示,与模型组比较,电针组在PFC、NAc、AMG、VTA脑区的突触活性区长度和突触后致密物质厚度方面明显增加(R0.01,P0.05),在PFC突触间隙宽度方面明显降低(P0.05),在AMG脑区显著降低(P0.01);针刺组在AMG脑区的突触间隙宽度方面较模型组明显降低(P0.05),在其他脑区的突触活性区长度、突触间隙宽度及突触后致密物质厚度等方面较模型组有恢复趋势,但无统计学差异(P0.05)。(5) Western-blot以GAPDH为内参照结果显示,在PFC脑区,模型组NR2B蛋白表达显著下降(P0.01),与之相比较,针刺及电针组显著上升(P0.01),且电针组较针刺组明显(P0.01);在NAc脑区,模型组NR2B蛋白显著下调(P0.01),与之相比较,针刺及电针组显著上升(P0.01),且电针组较针刺组明显(P0.01);在AMG脑区,模型组大鼠NR2B蛋白表达显著下降(P0.01),针刺组及电针组较模型组显著升高(P0.01),且电针组升高更加明显(P0.01);在VTA脑区,模型组NR2B蛋白表达下降(P0.01);与模型组比较,针刺组和电针组蛋白均升高(P0.01),电针组表达较针刺组升高更加显著(P0.01)。(6)RT-PCR结果显示,在PFC脑区,模型组NR2BmRNA表达下降(P0.05),与之相比较,电针组表达上升(P0.05),针刺组虽有上升趋势但无显著性差异(P0.05);在NAc脑区,模型组NR2BmRNA表达下调(P0.05),与之相比较,电针组表达升高(P0.05),而针刺组表达虽有上升趋势但无显著性差异(P0.05);在AMG脑区,模型组大鼠NR2BmRNA表达下降(P0.05),电针组较模型组表达上升(P0.05),而针刺组表达虽有上升趋势但无统计学意义(P0.05);在VTA脑区,模型组NR2BmRNA表达下降(P0.05);与模型组比较,电针组基因表达有所升高(P0.05),而针刺组升高无统计学意义(P0.05)。结论:(1)针刺与电针均可以恢复吗啡戒断后大鼠体重的丢失。电针可以缩短戒断后大鼠逃避潜伏期,增加跨越平台次数,恢复受损的学习记忆能力,其效果优于针刺组。(2)电针能够减轻神经组织水肿,神经细胞丢失、萎缩,细胞周围间隙增宽等病变,改善吗啡戒断后不同脑区神经细胞及突触超微结构的损害,增加突触界面活性区长度、突触后物质厚度,并且特异性的减小前额叶和杏仁核脑区神经突触间隙的距离,增强突触连接强度,改善突触功能,其效果优于针刺组。(3)电针能够更好地回调吗啡戒断后大鼠不同脑区谷氨酸受体NR2B亚单位在蛋白和基因水平的表达,改善吗啡戒断后大鼠学习记忆的能力。
【学位授予单位】:黑龙江中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R245

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10 徐莉;康复训练对脑梗死大鼠大脑可塑性机制的研究[D];第四军医大学;2002年
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