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《黑龙江中医药大学》 2007年
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电项针对大鼠脑缺血再灌注后神经干细胞相关因子表达影响的研究

马睿杰  
【摘要】: 缺血性脑病是临床上常见的急性脑血管疾病。治疗的关键在于挽救缺血半暗带濒临死亡的神经元和促进损伤后神经功能的恢复。项针在脑缺血急性期和后遗症期的治疗取得了显著疗效,但对于项针疗效的机理研究则刚刚开始。本课题从电项针干预内源性神经干细胞的研究入手,为针刺治疗缺血性脑病的机制研究开辟新的研究领域。 目的:观察电项针对大鼠脑缺血再灌注后神经干细胞相关因子表达的影响和变化规律,并与项针治疗作用进行对比,探讨电项针及项针治疗缺血性脑损伤的作用机制。 方法:采用改良的线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。将Wistar雄性大鼠,随机分成4组:假手术组、模型组、电项针组、项针组。各组随机分成1d、3d、7d、14d四个时间段,对大鼠进行实验观察:(1)观察实验各组大鼠在各时间点神经功能缺损评分及脑梗死体积测定;(2)HE染色和电镜观察脑组织形态学改变;(3)免疫组织化学技术检测大鼠脑缺血再灌注后核因子-κB(NF-κBp65)、转化生长因子(TGF-β1)、神经细胞黏附分子(NCAM)、巢蛋白(Nestin)的蛋白表达变化及电项针、项针治疗对它们的影响;(4)逆转录-多聚酶链(RT-PCR)反应检测大鼠脑缺血再灌注后TGF-β1、PSA-NCAM、Nestin、干细胞因子(SCF)基因的表达变化,以及电项针、项针治疗对这些基因表达的影响。 结果:(1)电项针和项针治疗可明显提高神经功能评分并缩小脑梗死体积,与模型组比较有显著性差异(p<0.05),其中电项针组与项针组比较亦有显著性差异(p<0.05)。(2)HE染色显示:与模型组比较,电项针组和项针组神经细胞肿胀减轻,神经元数量增多,新生毛细血管增多;电镜观察显示:与模型组比较电项针组和项针组神经元胞体内,可见丰富的高尔基复合体,线粒体和其它细胞器结构完整,突触膜活性区明显增多,突触小泡增加。其中,电项针组形态学改变明显好于项针组。(3)免疫组化结果显示:与模型组比较,电项针和项针治疗可明显提高皮质及纹状体区TGF-β1、NCAM和Nestin蛋白表达水平,并在早期抑制NF-κBp65蛋白表达。电项针组与同时间点项针组比较有显著性差异(p<0.01或p<0.05)。(4)RT-PCR结果显示:与模型组比较,电项针和项针治疗可明显提高TGF-β1、PSA-NCAM、Nestin、SCF mRNA的表达(p<0.01),而电项针组与同时间点项针组比较亦有显著性差异(p<0.01或p<0.05)。 结论:(1)电项针和项针治疗均可挽救脑缺血半暗带区神经细胞,增强梗死周围血液供应,达到改善神经功能,减少梗死体积的目的。(2)电项针和项针治疗可通过抑制NF-κBp65蛋白表达及提高TGF-β1蛋白表达,达到抑制细胞调亡的目的。(3)电项针和项针治疗可通过促进TGF-β1蛋白、NCAM和Nestin蛋白的表达,诱导血管再生和神经干细胞增殖、分化,促进神经功能恢复,从而减少脑缺血再灌注损伤。(4)电项针和项针治疗可通过促进TGF-β1、NCAM、SCF、Nestin mRNA的表达,诱导神经干细胞增殖,促进其迁移、分化,以达到促进神经再生、修复和功能重建的的目的。(5)通过对照研究发现电项针治疗在以上几方面均优于项针组,这可能与刺激强度及形成的电场作用有关。
【学位授予单位】:黑龙江中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R245.97

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