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《黑龙江中医药大学》 2007年
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电针和BMSC移植联合应用对脊髓损伤再生修复的基因调控机制研究

张力  
【摘要】: 目的: 探索电针促进骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)分化为神经细胞的可行性;通过把现代BMSC移植技术与传统针刺疗法相结合,为临床中枢神经系统疾病的治疗及损伤修复开创一种新型、安全、有效的治疗方法,并揭示其基因调控机制。 实验动物: SD健康幼鼠8只,体重约100g左右,雌雄不限,用来进行BMSCs原代培养。 SD健康成年大鼠81只,体重250±20g,雌雄不限,随机分为五组: (1)假手术组:9只,仅咬除T_(11、12)棘突和椎板; (2) PBS组:18只,脊髓ALLEN’S打击伤后在损伤临近区注射PBS; (3) BMSC组:18只,脊髓ALLEN’S打击伤后在损伤临近区注射5-溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)标记的BMSCs; (4)电针组:18只,脊髓ALLEN’S打击伤后24h进行电针治疗; (5)电针BMSC组(电针与BMSC移植联合应用):18只,受损脊髓移植BrdU标记过的BMSCs后24h进行电针治疗; 以上各组分为移植后3d、7d、14d三个时相点。 实验方法: 1.体外分离培养BMSCs,镜下进行细胞形态学观察; 2.移植后3天、7天、14天,应用CBS评分法评价治疗前后损伤大鼠神经功能改善状况。 3.应用光镜观察损伤脊髓组织形态学变化;应用免疫组化技术检测BrdU标记的BMSCs在体内存活情况。 4.于移植后第14天应用免疫组化技术检测BrdU标记的BMSCs的神经元烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况。 5.移植后3天、7天、14天,应用原位杂交方法检测损伤大鼠脊髓BDNF、NGFmRNA表达变化情况。 结果: 1.BMSCs的原代和传代培养:原代细胞呈集落趋势贴壁生长,分布不均匀。接种10天左右,细胞融合达90%以上,此时进行传代培养。传代后细胞增殖迅速,7天左右细胞即融合。传代后的细胞生长均匀,大部分呈长梭形。 2.各时相点的各组动物神经功能均有不同程度的恢复。BMSC组、电针组与PBS组比较神经功能评分有显著性差异(P<0.05);电针BMSC组与PBS组比较有非常显著性差异(P<0.01);而电针BMSC组与单纯BMSC组和单纯电针组比较,神经功能恢复的更好,评分亦有显著性差异(P<0.05);而BMSC组和电针组比较无显著性差异(P>0.05)。 3.BMSC组、电针组损伤区的脊髓结构与PBS组相比,相对较完整,而电针BMSC组的脊髓结构明显优于单纯BMSC组和单纯电针组;进行了BMSCs移植的组织内可见BrdU标记的细胞在损伤区及其周边区明显聚集并存活。 4.BMSCs移植14d后,BrdU标记的阳性细胞表达NSE和GFAP的百分率分别为:BMSC组为7.2%和1.5%;电针BMSC组为7.9%和2.1%。 5.BMSC组与电针组损伤脊髓BDNF、NGFmRNA表达较PBS组有明显增加(P<0.05);电针BMSC组较PBS组表达增加更为明显(P<0.01);电针BMSC组与单纯BMSC组和单纯电针组比较BDNF、NGFmRNA的表达亦有明显增加(P<0.05);电针组与BMSC组比较无显著性差异(P>0.05)。 结论: BMSCs移植后可在宿主体内存活并分化为神经细胞;电针可以促进骨髓基质细胞分化为神经细胞;电针与骨髓基质细胞移植联合应用可以明显促进脊髓损伤大鼠的运动及感觉功能恢复;电针与骨髓基质细胞移植联合应用,可以改变脊髓损伤区的微环境,上调损伤脊髓局部的BDNF、NGFmRNA的表达,这可能是减少脊髓继发性损伤,促进损伤大鼠脊髓结构修复及其功能恢复的机制之一。
【学位授予单位】:黑龙江中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R246;R651.2

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