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《哈尔滨师范大学》 2017年
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大豆C_2结构域蛋白GmCap1的研究

赵娟莹  
【摘要】:Cap是含有一个C_2结构域的小蛋白,能够提高植物对非生物胁迫的抵抗能力,对促进自身的生长发育具有重要作用。本研究以大豆(Glycine max(L.)Merr)铁丰8号为材料,克隆得到了一个GmCap1基因,并从不同方面研究了它在响应逆境胁迫方面的作用。主要研究结果如下:1.GmCap1基因的克隆及表达模式分析利用反转录PCR从大豆材料中扩增得到GmCap1基因。该基因全长543 bp,编码180个氨基酸,包含一个C_2结构域。亚细胞定位结果表明,GmCap1蛋白定位于细胞膜中。实时荧光定量PCR结果表明GmCap1基因受盐、干旱、ABA和BR诱导表达。2.GmCap1转基因拟南芥的表型分析为了进一步研究GmCap1的功能,构建pCAMBIA1302-GmCap1表达载体,带有CaMV 35S启动子,转化农杆菌,利用花序侵染法得到过表达的转基因拟南芥。发芽率实验结果显示:在MS0培养基中,野生型WT、过表达株系(GmCap1-2和GmCap1-5)和突变体(mutant)发芽率基本一致,没有明显差异;胁迫处理时,过表达株系的萌发明显要比野生型和突变体早,例如100 mM NaCl处理3天时,突变体的萌发率只有20.8%,野生型发芽率为54.1%,而两个过表达株系的萌发率分别只有91.7%和75.0%,9%PEG和0.5 uM ABA处理时也得到了同样的结果,说明在胁迫处理下,与野生型相比,过表达株系萌发快,而突变体的萌发要明显晚于前两者。根长实验也同样表明,在胁迫处理下,过表达株系根的生长要好于突变体。3.GmCap1与GmPLZ的互作验证GmCap1是由GmPLZ筛选大豆cDNA文库得到,为了进一步研究GmCap1的作用机理,本实验通过酵母双杂交技术对GmCap1与GmPLZ的互作情况进行了研究,实验结果显示,GmCap1能够与GmPLZ互作,说明GmCap1与GmPLZ可能存在于同一条信号通路中,两者相互作用发挥功能,共同调控植物的生长发育。
【学位授予单位】:哈尔滨师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S565.1

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