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《牡丹江师范学院》 2017年
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表达鸭肝炎病毒VP0蛋白重组鸭瘟病毒的构建

刘柏含  
【摘要】:鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis,DVH)由鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)引起雏鸭发病的烈性传染病,该病潜伏期短、死亡率高,是造成养鸭业经济损失的重要疾病之一鸭病毒性肠炎(Duck viral enteritis,DVE)别名鸭瘟(Duck plague,DP),是由鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)引起禽类致病的急性败血性传染病,该病主要特点是消化器官受损和实质器官的退行性病变。此病于1957年在我国初次爆发,随后全国大范围的流行对养鸭业造成了极为严重的经济损失。本研究以实验室保存的pET30a载体,针对DHAV-1 VP0基因进行设计引物并对VP0基因进行扩增,成功构建pET30a-VP0载体并进行蛋白的表达及纯化。纯化后的蛋白免疫新西兰大耳兔,3次免疫后采血进行免疫效价的测定,成功制备VP0蛋白兔多抗血清。运用实验室成功构建的转染粘粒拯救鸭瘟病毒系统,选用实验室保存的pCAGGS-VP0经过BP反应构建成为pDONR-PCA-VP0,再经过LR反应把PCA-VP0表达盒重组到粘粒2上命名为2-UL41-VP0,2-UL41-VP0代替2粘粒拯救表达VP0蛋白的重组病毒rDEV-VP0。rDEV-VP0在CEF上进行转染细胞经过培养传代后提取病毒DNA进行PCR鉴定,成功构建重组病毒。选取60羽雏鸭分组进行动物免疫效果评价试验,分为rDEV-VP0免疫2组,DEV攻毒对照组,DHAV攻毒对照组,C-KCE免疫对照组及阴性对照组。免疫四天进行DEV和DHAV强毒的攻击。结果表明rDEV-VP0免疫雏鸭4天后可对CSC DEV的攻击可以达到完全的免疫保护,对DHV 161/79的攻击可提供70%的免疫保护。
【学位授予单位】:牡丹江师范学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.65

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