电针干预“围绝经期综合征”大鼠模型效应的机制

【摘要】：随着世界人口的老龄化,大多数妇女在绝经后仍要渡过寿命的三分之一；社会生活和工作节律的加快,导致妇女进入绝经期的年龄提前；卵巢切除术或医源性卵巢功能丧失的病例也增多,众多因素使女性“围绝经期综合征”发病率上升。更年期妇女的健康问题也越来越引起人们的关注。虽然激素替代疗法(hormone replacement therapy, HRT)依然是围绝经期综合征的主流治疗方案,但安全而有效的针刺疗法在HRT的争议中逐渐确立了其在生殖内分泌疾病中的地位。因此,应用现代医学的语言阐释针刺治病的科学内涵,是更好的推广针刺疗法的需要。 我们以往观察到,去卵巢大鼠较好地模拟了“围绝经期综合征”的体内激素变化,导致下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovary axis, HPOA)功能异常,电针干预一方面通过促进外周肝脏和脂肪组织内芳香化反应,升高外周血雌二醇(estradiol, E2)水平；另一方面,电针也促进了下丘脑的芳香化反应,使下丘脑局部雌激素产生增多。因此,电针可能通过促进性腺外芳香化作用,提高了去卵巢大鼠体内雌激素水平,有效地调整去卵巢大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的异常功能。去卵巢大鼠模拟了“围绝经期综合征”的体内激素变化,是否也能模拟其他的症状和体征呢?电针提高的去卵巢大鼠体内雌激素水平,必需和雌激素受体(estrogen receptors, ERs)结合才能发挥效应,那么电针干预是否影响ERs的表达?这是本论文要回答的主要问题。因此,本论文以去卵巢大鼠为“围绝经期综合征”的动物模型,观察该模型对围绝经期症状的模拟及电针干预的效应。在此基础上,以子宫为切入点,研究电针的外周效应及其可能的机制。以下丘脑ERs为切入点,研究电针作用的中枢机制。 本论文采用的方法如下：(1)成年雌性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham)、假手术加电针组(Sham+EA)、去卵巢组(OVX)、去卵巢加电针组(OVX+EA)。电针穴位选用“关元”、“中极”、“子宫”和“三阴交”,观察去卵巢术以及电针对大鼠体重,组织脏器以及行为学的影响。(2)成年雌性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)、去卵巢加电针组(OVX+EA)。观察电针对阴道脱落细胞,外周血E2水平,子宫形态学以及子宫雌激素受体α(ERα)和β(ERβ)的影响。(3)分组同及处理同(2),观察下丘脑视前区促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone, GnRH)释放和mRNA表达,以及视前区至下丘脑前部(the preoptic area-anterior hypothalamus, POA-AH)和内侧基底下丘脑-正中隆起(The medial basal hypothalamus-median eminence, MBH-ME)的ERα、ERβ的mRNA水平和蛋白表达,并观察GnRH受体(GnRHR)在POA-AH的表达变化。(4)实验一：去卵巢大鼠随机分为收集推挽灌流液组和注射推挽灌流液组,收集推挽灌流液组又分为收集电针后下丘脑内侧视前区(medial preoptic area, MPO)推挽灌流液(简称“针刺灌流液”)组(EA-P)和收集去卵巢大鼠MPO灌流液组(OVX-P)。测定推挽灌流液中的单胺类和氨基酸类递质及β-内啡肽等物质的含量。注射灌流液组又分为注射针刺灌流液组(IOVXAP)、注射去卵巢灌流液组(IOVXP)和注射人工脑脊液对照组(IaCSF)。观察注射灌流液对去卵巢大鼠阴道脱落细胞,外周血E2水平以及子宫形态学的影响。实验二：去卵巢大鼠随机分成下丘脑内侧视前区损毁组(MPO-Lesioned)和下丘脑内侧视前区假损毁组(Sham MPO-Lesioned)。MPO-Lesioned又分为电针干预(EA Treatment)和电针对照组(EA Control); Sham MPO-Lesioned也分为电针干预(EA Treatment)和电针对照组(EA Control)。观察大鼠阴道脱落细胞,外周血E2水平以及子宫形态学的影响。 实验结果表明,(1)去卵巢动物模型能较好地模拟“围绝经期综合征”的潮热,生殖道萎缩,体重变化,脂肪分布改变及记忆力障碍等症状和体征。电针干预可以缓解模型大鼠的潮热,降低腹部脂肪贮备,减轻体重,增加子宫湿重和改善记忆,结果进一步提示,去卵巢大鼠可作为一种“围绝经期综合征”动物模型,用于围绝经期综合征的针刺治疗机制的研究；(2)电针干预可以增加去卵巢大鼠的子宫湿重、腔上皮厚度和肌层厚度以及子宫内膜腺体数目,有效的改善去卵巢大鼠子宫的形态和功能,电针的这一效应可能是通过促进子宫ERa表达、保持雌激素受体亚型a和β间的比例协调,以及提高外周血E2水平,在配体和受体的双重作用下实现的。(3)电针干预后,去卵巢大鼠下丘脑视前区GnRH释放和mRNA的表达均下降,POA-AH的ERα、ERβ蛋白和mRNA的高表达被下调,而MBH-ME的ERα、ERβ无显著变化；与此同时,POA-AH上调的GnRHR也回调到正常水平,提示电针作用于ERα、ERβ和GnRHR,通过受体作用,重建了雌激素对下丘脑GnRH神经原的负反馈抑制,促进GnRH神经原的自身稳定性,使去卵巢后异常活动的GnRH神经原趋于正常。(4)电针可以调节去卵巢大鼠下丘脑MPO神经活性物质的释放,电针后去卵巢大鼠MPO的灌流液异体注射到另一去卵巢大鼠的MPO后,可以提高去卵巢大鼠外周血E2水平,改善子宫形态,提示MPO可能参与电针治疗“围绝经期综合征”的效应。损毁去卵巢大鼠双侧下丘脑内侧视前区后,电针干预模型大鼠的效应大部分被阻断,结果进一步提示,下丘脑内侧视前区是电针干预模型大鼠效应的重要作用部位。 结论：(1)去卵巢大鼠可以较好地模拟了“围绝经期综合征”的症状和体征,用于雌性生殖内分泌的研究。(2)电针可能通过促进子宫ERa表达、保持ERα和p亚型的比例协调,以及提高外周血E2水平,在配体和受体的双重作用下,有效的改善去卵巢大鼠子宫的形态和功能。(3)POA-AH的ERs和GnRHR,可能参与了电针调整去卵巢后GnRH神经原异常活动的机制。(4)下丘脑MPO是电针干预模型大鼠效应的重要作用部位,MPO神经活性物质可能是电针效应的物质基础。

【关键词】：下丘脑内侧视前区 促性腺激素释放激素 促性腺激素释放激素受体 雌二醇 雌激素受体 下丘脑-垂体-卵巢轴 电针 卵巢切除大鼠
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R245
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