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《复旦大学》 2010年
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小儿脑性瘫痪的临床与分子遗传学研究

程秀永  
【摘要】:第一部分脑性瘫痪的临床特征与发病相关因素分析 目的分析脑瘫的临床特征并探讨影响脑瘫发病的相关因素。 方法选择2008年5月至2009年10月在郑州大学第三附属医院脑瘫康复治疗中心、郑州市儿童医院脑瘫科和河南中医学院第一附属医院脑瘫科的住院脑瘫病人374例。回顾性分析脑瘫的临床特征及可能的危险因素。 结果1.性别和就诊年龄:374例脑瘫中,男性245例(65%%),女性129例(35%),男性患儿明显多于女性,男女之比为:1.9:1。就诊年龄最小为3月,最大为120月,平均16.90±12.62月。就诊年龄在0-3月、~6月、~12月、-24月、~48月和48月的患儿分别占全组病例的0%、17%、30%、29%、18%和6%。2.出生胎龄分布:出生胎龄30 wks.-32 wks.-34 wks.-37 wks和37 wks的患儿分别占全组病例的6%、5%、7%、13%、69%。在脑瘫的出生胎龄构成中以足月儿为主。3.出生体重分布:出生体重1000g.-1500g、~2500g、~4000g和4000g的患儿分别占全组病例的0%、2%、22%、75%、1%。在脑瘫的出生体重构成中以2500g-4000g为主。4.临床类型:痉挛型最多211例(56%),其次为混合型47例(13%)、肌张力低下型45例(12%)、共济失调型30例(8%)、不随意运动型24例(6%)和分类不明17例(5%)。5.影像学表现:158例有影像学资料(CT/MRI),其中有阳性发现者119例,阳性率64.32%。脑室周围白质软化最多见为34例(28.57%,),其次为大脑发育不全33例(27.73%),外部性脑积水24例(20.17%),先天性脑发育异常14例(11.76%),侧脑室扩大12例(10.08%),皮层萎缩2例(1.68%)。6.合并症:在374例脑瘫中有合并症者170例(45.45%),其中最常见的是智力低下(29.7%)。7.发病危险因素:在374例脑瘫中,133例(占35.6%)有与脑瘫发病的相关危险因素,新生儿缺氧缺血性脑病41.35%,早产28.57%,出生窒息7.54%为前三位原因。241例(64.4%)未发现有相关的危险因素。结论在已知的危险因素中,围产期缺氧缺血和早产是脑瘫发病的主要相关因素,然而尚有64.4%的病例没有发现危险因素。提示我们不仅要进一步提高围产保健和新生儿复苏技术以降低脑瘫的发病率,而且须进一步探讨脑瘫的其他危险因素。 第二部分MTHFR基因多态性与脑性瘫痪的关联性 目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与脑性瘫痪的关联性。 方法1.选择2008年5月至2009年10月在郑州大学第三附属医院脑瘫康复治疗中心、郑州市儿童医院脑瘫科和河南中医学院第一附属医院脑瘫科的住院脑瘫病人159例(女50例,男109例,平均年龄16.9±14.4月)及同时期在其年龄和性别相匹配的来自郑州大学第三附属医院儿童保健科健康体检的正常儿童169例((女64例,男105例,平均年龄16.4±13.8月)。2.采用酚氯仿法从静脉血提取DNA,采用TaqManTM基因分型技术对所选取的MTHFR基因的5个SNPs (rs4846049、rs1476413、rs1801131、rs1801133和rs9651118)进行基因分型,然后采用在线软件SHEsis (http://analysis.bio-x.cn)进行Hardy-Weinberg平衡检测,并比较两组单个位点等位基因和基因型频率,采用SNPSpD软件进行多重检验以及Haploview软件进行单倍型的分析,最后进行邦弗尼校正。 结果1. Hardy-Weinberg平衡检验:所有5个SNPs(rs4846049, rs1476413, rs1801131,rs1801133,rs9651118)的基因型分布都符合Hardy-Weinberg平衡(p0.05)。2.关联分析:所有5个SNPs的基因型及等位基因型频率在脑瘫和正常对照之间没有显著差异(p0.05)。进一步进行亚组分析发现,在脑瘫合并智力低下组和正常对照之间,3个SNPs (rs4846049. rs 1476413和rs1801131)的基因型及等位基因型频率存在显著差异(rs4846049, p= 0.031; rs1476413, p= 0.028; rs1801131 p= 0.014,p值均为SNPSpD校正后)。脑瘫合并智力低下组rs2433322 T等位基因频率、rs1476413 T等位基因频率和rs1801131 G等位基因频率明显高于正常对照。用5个SNPs位点构建单倍型,在单倍型分析中,发现单倍型T T G G T与脑瘫并智力低下有明显的关联性(p= 0.001, OR=2.695, 95%CI=1.470-4.941, p= 0.005,邦弗尼校正后)。在出生胎龄小于37周脑瘫组、出生体重小于2500g脑瘫组、出生窒息脑瘫组和正常对照之间,所有5个SNPs的基因型及等位基因型频率没有显著差异(p均0.05)结论我们的研究结果并不支持MTHFR基因的5个SNPs在中国汉族人群与脑瘫相关联。但我们发现3个SNPs与脑瘫合并智力低下有关联,因此,MTHFR基因多态性可能是脑瘫合并智力低下的相关危险因素。 第三部分AP4M1基因多态性与脑性瘫痪的关联性 目的探讨AP4M1基因多态性与脑性瘫痪的关联性。 方法1.选择2008年5月至2009年10月在郑州大学第三附属医院脑瘫康复治疗中心、郑州市儿童医院脑瘫科和河南中医学院第一附属医院脑瘫科的住院脑瘫病人159例(女50例,男109例,平均年龄16.9±14.4月)及同时期在其年龄和性别相匹配的来自郑州大学第三附属医院儿童保健科健康体检的正常儿童169例((女64例,男105例,平均年龄16.4±13.8月)。2.采用酚氯仿法从静脉血提取DNA,采用TaqManTM基因分型技术对所选取的AP4M1基因的4个SNPs(rs1 534310、rs4729577、rs2293479和rs13309)进行基因分型,然后采用在线软件SHEsis (http://analysis.bio-x.cn)进行Hardy-Weinberg平衡检测,并比较两组单个位点等位基因和基因型频率,采用SNPSpD软件进行多重检验以及Haploview软件进行单倍型的分析,最后进行邦弗尼校正。 结果1. Hardy-Weinberg平衡检验:所有4个SNPs(rs1534310、rs4729577、rs2293479和rs13309)的基因型分布都符合Hardy-Weinberg平衡(p0.05)。2.关联分析:所有4个SNPs的基因型及等位基因型频率在脑瘫和正常对照之间没有显著差异(p0.05)。我们用4个SNPs位点构建单倍型,在单倍型分析中,没有发现单倍型ACC、ACT、ATCA、ATTA和TCTT与脑瘫的关联性(p=0.410)。进一步进行亚组分析:所有4个SNPs的基因型及等位基因型频率在脑瘫并智力低下组、出生胎龄小于37周脑瘫组、出生体重小于2500g脑瘫组、出生窒息脑瘫组与对照组之间没有显著差异(p0.05)。 结论我们的研究发现AP4M1基因多态性在中国汉族人群与脑瘫无关联。 第四部分:同卵双生子脑瘫患儿全基因组DNA甲基化的研究 目的探讨DNA甲基化对同卵双生子脑性瘫痪的影响。 方法研究对象:郑州大学第三附属医院脑瘫康复治疗中心住院的2对双生子(均为一个是脑瘫患儿,一个是正常儿)作为研究对象。Twin pair I:男,14月,1号(序号)为痉挛型双瘫,2号为正常儿;Twin pair II:男,31月,5号为正常儿,6号为痉挛型四肢瘫。采用酚氯仿法从静脉血提取DNA,微卫星DNA基因分型技术进行双生子卵性鉴定。采用MBD亲和柱层析富集DNA甲基化片断,继而进行Solexa测序/生物信息学分析。 结果1.卵形鉴定:9个STR在每对双生子间的基因型完全一致,因此判定均为同卵双生子。2.DNA高甲基化区域:发现每对双生子脑瘫和正常儿间存在不同的DNA高甲基化区域,通过比较每对脑瘫和正常儿间DNA甲基化状态不同的片段,发现脑瘫特异性的高甲基化区域分别为:1号:25440个;6号:103885个;正常儿高甲基化区域分别为:2号:38772个;5号:3622个。将两例脑瘫或正常儿的高甲基化区域进行比较,我们发现脑瘫共同甲基化的区域有10679个,而正常儿共同甲基化的区域为626个。选择出脑瘫共同甲基化的区域和正常儿共同甲基化的区域的蛋白编码基因的启动子,发现前者有661个,后者有41个。 结论我们采用全基因组DNA甲基化分析技术对两对同卵双生子的脑瘫和正常儿的血细胞进行了分析,选择出了脑瘫共同甲基化的的启动子区域的蛋白编码基因。为进行大样本量的双生子和散发性脑瘫病的进一步研提供了依据。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R742.3

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6 秦雪梅;教育和康复整合干预对脑瘫儿童生活自理能力影响的个案研究[D];重庆师范大学;2012年
7 史梅;脑瘫儿童家属社区工作方案设计[D];华中师范大学;2013年
8 黄存泉;随班就读脑瘫学生辅助技术支持方案制定的研究[D];重庆师范大学;2011年
9 杨林林;脑瘫青少年平地行走步态特征研究[D];鲁东大学;2012年
10 隋连香;脑瘫青少年跨越障碍物的运动生物力学分析[D];鲁东大学;2013年
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