收藏本站
《复旦大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

小鼠骨髓间充质干细胞向子宫内膜上皮细胞方向分化的体外研究

张雯碧  
【摘要】:子宫内膜异位症(endometriosis, EM)是妇科常见良性疾病,临床主要表现为痛经、不孕、性交痛等,严重影响着妇女的健康和生活。EM的发病有经血逆流、体腔上皮化生、免疫学说等多种学说,但至今病因不明确。随着干细胞研究的不断深入,越来越多的研究证明子宫内膜内存在干/祖细胞,这些干/祖细胞介导子宫内膜的周期性再生。因此有学者提出了EM的干细胞起源学说,认为异位病灶中的终末细胞不能维持病灶的长期发展,而干/祖细胞的分化增殖可能导致EM的发生。本课题组在前期研究中发现小鼠骨髓来源的干细胞在在位和异位子宫内膜内定植并向腺上皮方向分化,并且证实雌激素在该分化过程中起促进作用。本研究将原代培养的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)和小鼠子宫内膜间质细胞(ESCs)进行共培养,选择性加入外源性因素(雌激素和生长因子),从体外实验证实BMSCs可向子宫内膜上皮细胞方向分化,并对其分化的时间以及雌激素对其分化的影响进行分析。本研究目的旨为EM病因研究的干细胞学说提供理论依据,进而为EM的临床诊疗研究提供新的方向。 目的: 1、探讨小鼠骨髓间充质干细胞体外能否向子宫内膜上皮细胞方向分化。 2、探讨雌激素是否影响该分化过程。 材料与方法: 1、原代培养小鼠骨髓间充质干细胞和子宫内膜间质细胞,分别予流式细胞术和细胞免疫化学方法进行鉴定。 2、将第2代BMSCs分别进行如下四组处理。第1组:BMSCs单独培养,对照培养基2%FCS+DMEM/F12;第2组:BMSCs单独培养,诱导分化培养基2%FCS+DMEM/F12,1×10-7mol/L17β雌二醇,lOng/mlTGF-β, lOng/mlEGF, 1Ong/mlPDGF-BB;第3组:BMSCs与ESCs共培养,对照培养基;第4组:BMSCs与ESCs共培养,诱导分化培养基。用Realtime RT-PCR和免疫荧光化学方法检测培养5天后的BMSCs上皮细胞标记角蛋白7(CK7),角蛋白18(CK18),角蛋白19(CK19),上皮膜抗原(EMA)表达。 3、将第二代BMSCs与ESCs共培养,对照培养基。用Realtime RT-PCR方法检测共培养第1、3、5、7天后的BMSCs的上皮细胞标记(CK7,CK18,CK19,EMA)表达。 4、将第二代BMSCs与ESCs共培养,对照培养基,分别加入不同17β-雌二醇浓度(0,1X 10-9mol/L,1 X 10-8mol/L,1 X 10-7mol/L,1×10-6mol/L),用Realtime RT-PCR方法检测各组BMSCs上皮细胞标记(CK7,CK19),间质细胞标记波形蛋白(Vim),干细胞转录因子(Oct-4)的表达。 结果: 1、流式细胞术检测BMSCs表面标记Sca-1,CD117,CD29和造血干细胞表面标记CD34表达率分别为5.36%,2.41%,2.63%,0.68%。细胞免疫化学方法检测ESCs特异标记波形蛋白表达阳性。 2、Realtime RT-PCR结果提示:CK7的表达在各组中呈依次表达上升,在第4组表达中达到最高。CK18,CK19在第2、3、4组中均比第1组表达升高。EMA在第2、4组的表达比第1、3组表达升高。免疫荧光化学方法结果提示:第1、2组中角蛋白表达阴性,第3组表达弱阳性,第4组表达强阳性。 3、CK7表达量随着共培养时间的增加而上升,存在时间差异,在第5天开始出现显著上升。CK18,CK19,EMA的表达量随着共培养时间增加并无明显变化。 4、CK7和CK19表达量在1×10-8mol/L17β-雌二醇组中最高,CK7表达量在1×10-6mol/L17β-雌二醇组中最低。Vim和Oct-4表达量共培养5天后均下降,但不同17β-雌二醇浓度对其没有差异。 结论: 1、小鼠BMSCs在一定条件下体外可向子宫内膜上皮细胞方向分化。外源性因素(17p-雌二醇、TGF-β、EGF、PDGF-BB)和内源性间质细胞分泌因子的联合作用,其在促进BMSCs向子宫内膜上皮细胞方向分化的过程中作用最显著。 2、上皮细胞标记CK7表达量随着BMSCs与ESCs共培养时间的增加而上升,存在时间差异,在第5天开始出现显著上升。 3、1×10-8mol/L17β-雌二醇最大程度地促进了BMSCs向上皮细胞方向分化,1×10-6mol/L17β-雌二醇抑制了BMSCs向上皮细胞方向的分化。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R711.71

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 程明军;徐丛剑;;子宫内膜异位症的发病机制理论及学说[J];中国实用妇科与产科杂志;2007年07期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孟祥莲;腹腔镜下手术治疗卵巢良性病变91例临床分析[J];安徽医学;2005年04期
2 贺朝;曲宏伟;;子宫腺肌病治疗的研究进展[J];当代医学;2009年35期
3 孙建华;殷红阳;崔静;;卵巢巧克力囊肿破裂11例临床分析[J];当代医学;2010年13期
4 康佳丽;夏薇;李莉;聂妙玲;张爱云;;腹腔镜手术联合药物治疗子宫内膜异位症合并不育症的疗效观察[J];中国医师杂志;2006年04期
5 刘爱红,戴淑真,姚琴,李健;子宫内膜异位症大鼠模型复制[J];动物医学进展;2005年02期
6 程爱英;腹壁切口瘢痕子宫内膜异位症11例分析[J];临床医学;2005年01期
7 丁兰;;盆腔深部浸润型子宫内膜异位症的诊治进展[J];临床医学;2010年08期
8 卢水芬;;子宫内膜异位症的药物治疗进展[J];公共卫生与预防医学;2007年05期
9 陈琼华,曲军英,苏志英,高凌云,郑伟;子宫内膜异位症患者异位和在位子宫内膜ER和PR的表达[J];福建医科大学学报;2004年03期
10 江瑜;刘佳华;;子宫内膜异位症致输尿管梗阻3例报告[J];福建医药杂志;2007年06期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 苏迎春;肖素梅;吴和平;;子宫内膜异位症合并不孕的治疗[A];首届赣鄂湘中西医结合(生殖内分泌)学术研讨会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 彭冬先;慢病毒介导短发夹状RNA抑制survivin基因治疗子宫内膜异位症的实验研究[D];南方医科大学;2011年
2 潘芳;温阳祛痛中药复方治疗子宫内膜异位症、子宫腺肌病盆腔疼痛的临床研究[D];北京中医药大学;2005年
3 冷金花;子宫内膜异位症基础及临床几个重点问题的研究[D];中国协和医科大学;2004年
4 李华军;体外培养的子宫内膜异位症在位内膜细胞生物学行为及对不同药物反应性的研究[D];中国协和医科大学;2004年
5 邓姗;曼月乐对子宫内膜异位症患者在位内膜干预的临床与基础研究[D];中国协和医科大学;2005年
6 刘海元;子宫内膜异位症的比较蛋白质组学研究[D];中国协和医科大学;2005年
7 孙晓炜;Galectin-3在子宫内膜异位症的表达及调节[D];复旦大学;2007年
8 方小玲;内皮抑素转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的实验研究[D];中南大学;2007年
9 刘志能;子宫内膜间质细胞GJIC功能在EMs发病中的意义及ATRA调节EMs内膜间质细胞GJIC功能的探讨[D];重庆医科大学;2008年
10 李春艳;子宫内膜异位症比较蛋白质组学研究及相关蛋白的鉴定与表达[D];中国协和医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 于景岩;腹腔镜术后中药灌肠治疗子宫内膜异位症伴不孕的临床观察[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 张丽娜;从瘀论治子宫内膜异位症疼痛的系统评价[D];黑龙江中医药大学;2010年
3 李艳;痛可舒治疗子宫内膜异位症的临床观察[D];黑龙江中医药大学;2010年
4 刘敏;无髓鞘小神经纤维检测在子宫内膜异位症诊断及鉴别诊断中的应用[D];泰山医学院;2010年
5 杨秋丽;祛瘀化痰消癥法周期治疗血瘀挟痰型子宫内膜异位症的临床研究[D];山东中医药大学;2010年
6 杜冬琛;正宫胶囊治疗寒凝血瘀型子宫内膜异位症的临床研究[D];成都中医药大学;2010年
7 邓代荣;子宫内膜异位症对体外受精—胚胎移植结局的影响[D];广西医科大学;2011年
8 阳宇;孕三烯酮治疗保守性手术后子宫内膜异位症的系统评价[D];广西医科大学;2011年
9 彭永军;卵巢巧克力囊肿无水乙醇硬化术联合散结镇痛胶囊治疗的临床研究[D];广州中医药大学;2011年
10 郑梅金;曼月乐治疗38例子宫腺肌症的临床观察[D];福建医科大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 郎景和;子宫内膜异位症研究的新里程[J];中华妇产科杂志;2005年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 Farzad RAJAEI;Nasim BORHANI;Fatemeh SABBAGH-ZIARANI;Farhad MASHAYEKHI;;极低频率电磁场对小鼠生育能力及着床前期子宫内膜和输卵管上皮细胞高度的影响(英文)[J];中西医结合学报;2010年01期
2 董艳玲;何俊琳;刘学庆;丁裕斌;黄德培;王应雄;;早孕小鼠子宫内膜钙网蛋白的表达规律[J];细胞生物学杂志;2008年03期
3 覃致远;魏莎莉;孟君;王庆跃;杜芳;;早孕小鼠子宫内膜中凋亡蛋白抑制因子Survivin表达及对胚胎着床的作用[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年33期
4 陈思怀;朱周福;李小兰;;氟化物对体外培养孕鼠子宫内膜上皮细胞的影响[J];环境与健康杂志;2008年05期
5 马琰岩;范轶;白玛康卓;张金虎;何亚萍;喻琳鳞;岳利民;;孕激素诱导cyclin G1在小鼠子宫内膜上皮细胞的表达及其对细胞增殖的影响[J];生理学报;2008年04期
6 李晓兰;陈晓蓉;;激活素A在围植入期小鼠子宫内膜的表达[J];安徽医科大学学报;2011年03期
7 刘玮漪,刘承权;Gestodene和ZK98734对小鼠子宫内膜上皮细胞DNA含量的影响[J];生殖与避孕;1994年03期
8 王冬颖;SK Smith;Steve-Charnock Jones;;小鼠月经生理模型的探讨[J];中国实验动物学报;2005年04期
9 张昕原,朱正美,曹 詠清;着床期小鼠子宫内膜Le~y糖蛋白的动态变化[J];中国生物化学与分子生物学报;1996年05期
10 张炜,周剑萍,刘银坤,张俊慧;白血病抑制因子在小鼠围着床期子宫内膜的表达[J];生殖医学杂志;2000年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 燕秋;曹东旭;朱正美;;小鼠围着床期子宫内膜MAPK信号转导机制的初步研究[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年
2 顾娟;侯琼;隋琳琳;张雪瑞;朱正美;孔英;;Lewis~Y聚糖对胚胎发育和着床调控的研究[A];2008年全国糖生物学学术会议论文摘要[C];2008年
3 黄光英;;补肾益气活血方改善子宫内膜着床微环境的研究[A];全国第七届中西医结合妇产科学术会议论文及摘要集[C];2007年
4 刘润侠;刘艳巧;;补肾活血方对子宫内膜异位症不孕患者子宫内膜上皮细胞整合素亚单位β3表达的影响[A];全国中西医结合生殖健康学术研讨会论文及摘要集[C];2004年
5 吴云霞;黄光英;龚萍;;健胎液对小鼠子宫内膜植入点β3、粘蛋白-1表达的影响[A];湖北省药学会第十一届会员代表大会暨2007年学术年会论文汇编[C];2007年
6 刘艳娟;黄光英;杨明炜;龚萍;陆付耳;;健胎液调节着床期子宫内膜孕激素受体及mRNA表达的实验研究[A];全国中西医结合生殖健康学术研讨会论文及摘要集[C];2004年
7 田莉;沈浣;关菁;韩红敬;;经阴道超声监测不孕症患者自然月经周期子宫内膜改变的意义[A];中华医学会第五届全国计划生育学术会议资料汇编[C];2004年
8 成九梅;;子宫内膜间质肉瘤误诊为子宫粘膜下肌瘤一例[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
9 胡菲菲;徐静;陈娟;廖联明;崔毓桂;刘嘉茵;;产后小鼠子宫内膜边缘群干/祖细胞的分离纯化[A];江苏省遗传学会第七届二次代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年
10 卢永超;孟晔;师帅;张丹;丁国莲;潘洁雪;盛建中;黄荷凤;;SK3在雌激素依赖的子宫内膜上皮细胞增殖中的作用[A];2011中国妇产科学术会议暨浙江省计划生育与生殖医学学术年会暨生殖健康讲习班论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴一福;健胎液可有效促进胚泡着床[N];中国医药报;2005年
2 指导专家 山东省立医院妇产科副主任医师 许成岩 记者 杨春霞;拨开两大假相 破解子宫内膜癌[N];医药导报;2007年
3 陆维巧;子宫内膜增殖症是怎么回事?[N];大众卫生报;2007年
4 陆丽华;女性生殖器结核有何表现[N];家庭医生报;2007年
5 副主任医师 韩咏霞;子宫狭部妊娠是怎么回事?[N];大众卫生报;2006年
6 副主任医师 韩咏霞;子宫狭部妊娠是怎么回事[N];卫生与生活报;2006年
7 湖南邵阳 伍新华;月经期的肺部“怪病”[N];大众卫生报;2006年
8 白文佩;不宜用药物治疗的“功血”[N];健康报;2006年
9 ;绝经后阴道出血当心子宫体癌[N];卫生与生活报;2007年
10 广州医学院附属第三医院(原市二院)妇产科副主任医师 谭鹰 林江虹;急性子宫内膜炎的注意事项及预防[N];广东科技报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张雯碧;小鼠骨髓间充质干细胞向子宫内膜上皮细胞方向分化的体外研究[D];复旦大学;2010年
2 熊婷;外源性降钙素通过上调子宫内膜上皮细胞β3表达促进胚泡植入[D];华中科技大学;2012年
3 郭艺红;白血病抑制因子、胞饮突与子宫内膜容受性关系的实验研究[D];郑州大学;2006年
4 徐楗荧;希佩尔林道(VHL)基因在人妊娠输卵管及子宫内膜恶变组织中表达的研究[D];暨南大学;2011年
5 陈宁;Nrf2参与子宫内膜浆液性癌发病及耐药机制的研究[D];山东大学;2011年
6 谢铁男;多囊卵巢综合征子宫内膜胰岛素抵抗的分子机制探讨[D];吉林大学;2012年
7 胡菲菲;小鼠子宫内膜边缘群干/祖细胞的研究[D];南京医科大学;2010年
8 许袖;谷胱甘肽过氧化物酶3在小鼠围着床期子宫中的表达、调节与功能[D];东北农业大学;2011年
9 吴瑞瑾;IGF-Ⅱ与MMP-9在原因不明不孕症患者子宫内膜的表达及其性激素调控[D];浙江大学;2002年
10 潘卫;小鼠子宫内膜胚泡植入位点及其旁组织蛋白质组研究[D];重庆医科大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 秦迎;小鼠子宫内膜中DBA、ECL和RCA-Ⅰ受体在胚泡植入过程中的表达状况的实验研究[D];山东大学;2005年
2 王瑞玲;聚焦超声抗小鼠早孕后肿瘤坏死因子α在子宫内膜中的表达变化研究[D];华中科技大学;2006年
3 杨环;P16~(INK4A)在早孕小鼠子宫内膜的表达及作用研究[D];重庆医科大学;2009年
4 杨心弦;内异康复栓治疗大鼠子宫内膜异位症的实验研究[D];成都中医药大学;2004年
5 张宏;子宫内膜异位症细胞模型建立及侵袭粘附性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
6 王泽民;Survivin、Cox-2、Bcl-2在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义研究[D];苏州大学;2003年
7 王铁枫;乌丹丸改良方对大鼠子宫内膜异位症模型的影响[D];北京中医药大学;2005年
8 曾品鸿;MUC1和TGF-β1在子宫内膜的表达及其在着床窗期与雌、孕激素相关性的研究[D];重庆医科大学;2003年
9 谭冬梅;小鼠囊胚体外着床三维模型的建立[D];重庆医科大学;2004年
10 马英英;控制性超促排卵对小鼠子宫内膜种植窗期水通道蛋白2的影响[D];浙江大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026