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《复旦大学》 2014年
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长链非编码RNA与醛固酮瘤发病机制相关性的研究

陈佳超  
【摘要】:第一部分CNC共表达注释寻找相关lncRNA目的 寻找lncRNA芯片中实验组与对照组相差较大的mRNA CYP11B2、PCP4、 VPREB3和PRRX1相关且具有表达差异的lncRNA。方法应用CNC(cod ing-non-cod ing)共表达注释的方法,以Pearson相关系数(Pearson correlation coefficient, PCC)=0.85结果作为相互关系对,得到与mRNA CYP11B2、PCP4、VPREB3和PRRX1相关的lncRNA,再将这些lncRNA与已有lncRNA芯片中差异表达的lncRNA进行逐个比对、筛选,得到与mRNA相关且差异表达的lncRNA。结果经CNC共表达注释得到mRNA CYP11B2、PCP4、VPREB3和PRRX1分别有35条、83条、0条和10条,经与lncRNA芯片结果中差异表达的lncRNAs比对、筛选,共发现相关且同时差异表达的lncRNA为7条,分别是NR_003023、 ENST00000417715、uc003zpr.2、ENST00000417262、CR605514 ENST00000503380和ENST00000512207。结论经分析,与mRNA CYP11B2、PCP4、VPREB3和PRRX1相关且差异表达的lncRNA有7条,分别为:NR_003023、ENST00000417715、uc003zpr.2、 ENST00000417262、CR605514、ENST00000503380和ENST00000512207。第二部分Real-time PCR验证相关且差异表达的lncRNA目的在扩大的样本中验证前述的7个lncRNA在实验组和对照组中的表达差异是否和CNC共表达注释及lncRNA芯片的结果一致,是否依旧有统计学意义,以期发现与醛固酮瘤发病相关的lncRNA。方法分别提取实验组(26例醛固酮瘤、7例肾上腺增生结节)和对照组(19例正常肾上腺)组织的RNA,分离纯化后反转录成cDNA,制作引物;待测lncRNA经GAPDH校正后在其中进行real-time PCR验证,以p0.05为有统计学意义。结果Real-time PCR验证结果显示:7个待验证的lncRNA中有6个,即NR_003023、uc003zpr.2、ENST00000417262、CR605514、ENST00000503380和ENST00000512207在实验组和对照组中的差异与之前CNC共表达注释和lncRNA芯片中的结果一致,且具有统计学意义,而lncRNAENST00000417715在实验组和对照组中的差异与之前CNC共表达注释和lncRNA芯片中的结果一致,但不具有统计学意义。将实验组按病理类型为醛固酮瘤或肾上腺结节增生分为实验组1和实验组2,再次进行统计分析,结果与前一致。根据各样本经GAPDH校正后的数值按实验组与对照组做分布图,发现lncRNA uc003zpr.2在腺瘤和增生亚组与正常肾上腺组相差最显著。结论LncRNA NR_003023、uc003zpr.2、ENST00000417262、CR605514、 ENST00000503380和ENST00000512207在实验组和对照组中的差异与之前CNC共表达注释和lncRNA芯片中的结果一致,且具有统计学意义(p0.05)。其中lncRNA uc003zpr.2在腺瘤和增生亚组与正常肾上腺组相差最显著,很可能与原发性醛固酮增多症发病机制密切相关。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R586

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