雌孕激素与HPV在宫颈癌发生中的交互作用及相关因素研究

【摘要】：HPV感染是宫颈癌发生的主要因素，以高危型HPV16感染最常见，而与HPV16致癌密切相关的基因为DNA分子上的E2、E6蛋白。E6是病毒癌基因，它不仅可直接转化细胞，还可干扰正常细胞的周期调控，导致细胞无限增殖；E2蛋白是一种特异性DNA束缚蛋白，可以调节病毒mRNA和其它癌基因的转录及DNA的复制。值得注意的是，并非感染了HPV的妇女都发展为宫颈癌，寻找其它致癌因素或协同HPV作用的因素成为近年来研究的热点。在众多可能的协同因素中，雌性激素的作用是目前引起争议的热门话题。虽然有研究发现使用OCs的妇女患宫颈癌的危险性增加，但OCs作为外源性雌激素，进入体内后是否发生效应受机体敏感性及药物种类、剂量、时间长短等诸多因素的影响。内源性雌激素在每个个体均按照一定周期性规律变化，并在某一特定时期维持一个相对恒定状态，因此，研究内源性雌性激素与宫颈癌发生、发展的关系，似乎更能较为客观地反应雌激素与宫颈癌之间的关系。同时，结合HPV感染及其癌基因的表达状况进行综合分析，可了解雌孕激素与HPV在宫颈癌发生中的交互作用。然而，目前国内外的相关报道，多为单纯激素或HPV癌基因与宫颈癌关系的研究。国外虽有少数关于雌孕激素对HPV16致癌基因表达的报道，但均为动物实验和体外实验的结果，且存有争议。在人群中的类似研究尚未见报道。本研究的特点在于采用两种对照的病例对照研究方法，在广泛探索宫颈癌发生相关因素的基础上，从现场调查和实验研究两个方面重点对内源性雌孕激素、HPV及其癌基因，以及它们之间的交互作用进行分析，以期为宫颈癌的病因及其机制研究提供依据。 第一部分 HPV及其癌基因在宫颈癌中的表达 目的 探讨HPV、HPV16及其癌基因在宫颈癌发生中的作用，以及HPV16 E2、E6癌基因含量变化与宫颈癌发生的关系。 材料与方法 于2001年11月～2003年4月，在山西省肿瘤医院收集经病理学确诊的宫颈癌新发病人141例作为病例组，同时选择两种对照，对照1为在同一医院住院、经组织病理学确诊的子宫肌瘤患者137例；对照2为在山西省人民医院进行妇科健康体检的妇女。病例与对照均需排除孕妇、卵巢既往或现症病患者、 复旦大学博卜研究生毕业论文 中文摘要 其它癌症患者、拼体类激素使用者和精神病患者。全部对象均在知情同意的前 提下进入研究。对所有研究对象在入院后、系统治疗前收集宫颈脱落细胞;对 病例组和子宫肌瘤对照组患者于手术后采集宫颈组织标本。 对收集的手术组织标本和宫颈脱落细胞分别采用酚一氯仿提取法和异硫氰 酸肌一酚氯仿抽提法提取DNA，选择比较稳定的HPVL区基因序列片段的共用 引物进行HPVs DNA检测;选择HPV16 EZ和E6基因的特异性引物序列，进 行HPV16 EZ/E6基因的多重PCR扩增。 结果 HPvS、HPvl6及癌基因HPvl6 E6、EZ的阳性率在宫颈癌组均显著高于子 宫肌瘤对照组和健康妇女对照组。无论在绝经还是未绝经情况下病例组HPVs 阳性率均高于对照组，特别是未绝经组HPVS与宫颈癌的相关性和关联强度有 统计学意义。病例组HPV16E:缺失严重。HPV16E:和E6的平均含量均为病 例组高于对照组，差别有统计学意义。同时检测46份病理组织和脱落细胞的 HPVs、HPV16 E6和HPV16 EZ，其一致性分别为89.13%、89.13%和93.48%。 结论 宫颈癌的发生与HPV感染，特别是高危型HPV16感染密切相关，未绝经 时发生HPV感染患宫颈癌的危险性更大。从正常宫颈、子宫肌瘤到宫颈癌的 发展过程中，HPV 16E:和E6癌基因的阳性表达率呈逐渐上升趋势，其表达量 也在上升，同时伴随有HPV 16E:的缺失。用容易收集的宫颈脱落细胞标本可 替代宫颈组织标本检测HPV的感染情况。 第二部分雌、孕激素及其受体与宫颈癌发生的关系 目的 探讨雌孕激素水平及其受体与宫颈癌发生的关系。 材料与方法 于卵泡期采集研究对象空腹静脉血，应用ELJSA法批量测定血清中雌二醇 (EZ)和孕酮(P)的含量;将收集的宫颈癌、子宫肌瘤患者的术后宫颈组织 标本，按照SABC免疫组化操作步骤进行宫颈组织中雌激素受体(ER)和孕激 素受体(PR)的检测。 结果 E2和P含量在宫颈癌组均明显高于两对照组;按绝经与否分层后，E:与 宫颈癌的关联性在绝经(OR二6.448，95%Cl二2.767一15.028)和未绝经(OR=5.357， 950/04班=2 .081一13‘788)情况下均有统计学意义;孕酮水平(以ZPg/ml为界)在 病例组与对照组间无差别，按绝经因素分层后P与宫颈癌之间亦无统计学相关 复口_大学博卜研究生毕业论文 中文摘要 关系存在。病例组ER和PR的阳性率均低于子宫肌瘤组;按绝经因素分层后， ER和PR的阳性表达在绝经前、后均仍为子宫肌瘤组高于宫颈癌组，而绝经后 PR与宫颈癌之间有明显相关关系。 结论 内源性雌、孕激素的升高均可增加宫颈癌发生的危险性。相比而言，雌二 醇升高的危险性更强，且不受绝经因素的影响，而孕酮与宫颈癌的关系似乎较 弱。本研究特别发现，即使在绝经情况下，宫颈癌患者体内雌二醇的含量仍然 明显高于子宫肌瘤患者，进一步提示雌激素的升高对宫颈癌的发生可能有特异 作用。雌、孕激素受体对宫颈癌的发生具有一定的保护意义

【关键词】：宫颈癌 人乳头瘤病毒(HPV) 雌激素 孕激素 雌激素受体(ER) 孕激素受体(PR) 交互作用 相关因素
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R737.33
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