收藏本站
《复旦大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

威灵仙注射液对骨关节炎软骨表型、IL-1β和组织学影响的实验研究

陈飞雁  
【摘要】:目的:骨关节炎(OA)是最常见的一种以关节软骨退变为特征的关节疾患,目 前尚缺乏经济且有效的治疗方法。本研究拟应用威灵仙注射液(WLX)干预体 外培养关节软骨细胞和 OA 模型动物,通过检测细胞因子 IL-1β、胶原和蛋白多 糖表型在细胞和分子水平的变化,以及 OA 关节软骨组织学和超微结构的改变, 探讨 WLX 治疗 OA 的可能机制,为临床进一步开发应用 WLX 防治 OA 寻找和 奠定理论基础。 材料与方法: 1.体外实验部分 获取兔关节软骨细胞行体外单层细胞培养,第二代传代细胞接 种于 25cm2培养瓶和预置盖玻片的 24 孔培养板,分三组刺激干预:I 组细胞分别 以不同浓度 WLX[ 0.00(空白)、0.075mg/mL、0.15mg/mL、0.30mg/mL、 0.60mg/mL、1.25mg/mL、2.50mg/mL ]干预 72 小时;Ⅱ 组先予上述不同浓度 WLX干预24小时,再予10ug/mL脂多糖(LPS)刺激72小时;ⅡI组则先以10ug/mL 的 LPS 刺激 24 小时,再予上述不同浓度 WLX 干预 72 小时。干预 72 小时后收 集三组细胞的培养上清液,放免法(RIA)测定 IL-1β水平;收集培养瓶中的软 骨细胞,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测三组软骨细胞 IL-1βmRNA 和 I、Ⅱ 型前胶原 mRNA 的表达水平。倒置显微镜下观察 24 孔培养板中预置的盖 玻片铺满软骨细胞后取出,固定、漂洗,免疫细胞化学法(ICC)检测比较三组 软骨细胞 I、Ⅱ 型胶原的表达情况;应用甲苯胺蓝染色,观察三组软骨细胞和基 质的异染情况。 2.体内实验部分 45 只健康成年新西兰白兔随机分为三组(S 组、D 组、K 组), 以右膝为实验侧,按 Hulth-Talhag 法造 OA 模型,术后第二天起分组用药干预。 按 Meer-Rubner 公式计算用药量,连续肌肉注射用药 4 周,S 组用 WLX 0.4mL/d, D 组用生理盐水(NS)0.4mL/d,K 组空白。分别于术后 6、12、24 周三个时点每 组各随机处死 5 只获取右膝关节标本:摄 X 线正侧位片,手术显微镜观察行软骨 显微解剖学分级;每具标本获取关节液 200μl,RIA 法测定比较 IL-1β水平 ;软 骨标本石蜡包埋,作 5μm 超薄切片,HE/SOFG 组化染色并 Mankin 评分,比较各 组关节软骨组织-组化水平的损伤程度;免疫组化(IHC)法检测比较各组关节 软骨基质 I、Ⅱ 型胶原的表达情况;切取每兔右侧股骨髁负重关节面 1×1×1mm3 软骨,透射电镜(TEM)观察比较各组关节软骨超微结构变化。 2 WP=7 结果: 1.体外部分: 细胞培养:倒置显微镜下可见原代细胞接种后 24 小时开始贴壁,72 小时后完全 贴壁,细胞呈圆形、椭圆形或上皮细胞样外观,10-14 天铺满瓶底形成单层,部 分区域可呈集落样生长或多层生长。传代培养的软骨细胞 24-48 小时完全贴壁, 5-7 天可达到亚融合状态。低浓度 WLX 干预 72h 的细胞生长情况良好;LPS 刺 激 72h 的细胞密度减低,并可见梭形细胞;LPS 刺激并应用 WLX 干预的细胞生 长无明显异常。三代以后的传代细胞中梭形细胞增多,分泌和增殖能力下降,传 代周期延长。 培养上清 IL-1β水平的比较:组间比较,WLX 浓度为 0 时,I 组和 Ⅱ、ⅡI 组间 差别均有显著意义(P0.01),Ⅱ、ⅡI 两组间差别没有统计学意义(P0.05);其 余各浓度 WLX 干预的细胞 I、Ⅱ、ⅡI 组间差别均无显著意义(P0.05)。 组内 比较,I 组在各浓度时差别无显著意义(P0.05);Ⅱ、ⅡI 组 WLX 浓度为 0 时与 其它各浓度(0.075mg/mL~2.50 mg/mL )时的 IL-1β水平差别有统计学意义 (P0.05), 其余各浓度之间 IL-1β水平差别无显著意义(P0.05)。 RT-PCR 结果:正常软骨细胞以及 WLX 干预的软骨细胞可低水平表达 IL-1βmRNA,经 LPS 刺激的软骨细胞在 WLX 浓度为 0 时,IL-1βmRNA 呈强阳 性表达,其余各浓度 WLX 干预组 IL-1βmRNA 低水平表达。正常软骨细胞不表 达 I 型前胶原 mRNA;经 LPS 刺激的软骨细胞在 WLX 浓度为 0 时可低水平表达 I 型前胶原 mRNA;其余各浓度 WLX 干预的软骨细胞不表达或极低水平表达 I 型前胶原 mRNA。正常软骨细胞表达 Ⅱ 型前胶原;LPS 刺激的软骨细胞 Ⅱ 型前 胶原 mRNA 表达水平降低,应用 WLX 干预后表达水平恢复。 ICC 结果:免疫细胞化学染色显示,正常关节软骨细胞不表达 I 型胶原,经 LPS 刺激的软骨细胞可低水平表达 I 型胶原,应用 WLX 干预后 I 型胶原表达水平显 著降低。正常软骨细胞表达 Ⅱ 型胶原;LPS 刺激后软骨细胞 Ⅱ 型胶原表达水平 降低,应用 WLX 干预后 Ⅱ 型胶原表达水平恢复。 组化染色结果:甲苯胺蓝染色显示,正常关节软骨细胞正染成浅蓝色,核仁呈深 蓝色;集落样生长区细胞和细胞外基质异染成紫红色,核正染成深蓝色。经 LPS 刺激的软骨细胞在 WLX 浓度为 0 时甲苯胺蓝染色以浅蓝色为主,部分细胞呈核 负染,ECM 染色变浅,应用低浓度 WLX 干预后细胞染色和正常软骨细胞接近。 2.体内部分: X 片和显微观察结果:X 线平片结果显示,S 组在 6 周时关节面光滑平整,关节 间隙正常、对称、无软骨下骨硬化和骨赘形成;12 周时内侧关节间隙稍变窄, 3 WP=8 软骨下骨硬化,密度稍增高,未见明显骨赘形成;24 周时可见典型 OA 表现, 关节面不平整,内侧关节间隙狭窄,软骨下骨硬化,有骨赘形成。D ?
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R285

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王杰松,张俊平,张珉,钱定华;芹菜素抑制IL-1和脂多糖诱导软骨细胞产生NO[J];第二军医大学学报;1999年06期
2 徐波,卢进宝;复方三生膏治疗膝关节骨性关节炎的临床研究[J];临床医学;2000年09期
3 潘海乐,曲波,王耶;参麦注射液对骨关节炎模型动物关节液中白细胞介素-1水平的影响[J];中华风湿病学杂志;2000年02期
4 卫晓恩,杨庆铭,邓廉夫,朱颖华;骨关节炎软骨基质蛋白多糖变化的实验研究[J];中华风湿病学杂志;2002年01期
5 陈崇伟,卫小春;关节软骨胶原变化与骨关节炎的关系[J];中华风湿病学杂志;2003年01期
6 陈崇伟,卫小春,杨自权,郝一勇,吕智,李鹏翠,焦强;伸膝制动骨关节炎动物模型软骨内胶原变化的观察[J];中华风湿病学杂志;2003年06期
7 李靖年,丁振国,赵文志,王东昕,王鸿飞,东海潮,高延明,南丰;谷康泰灵对犬骨关节炎修复作用的实验研究[J];骨与关节损伤杂志;2003年01期
8 邓廉夫;正常关节软骨的胶原表型与骨关节炎关节软骨的表型异常[J];国外医学(创伤与外科基本问题分册);1996年03期
9 吕丹;威灵仙的药学研究[J];海峡药学;1999年04期
10 罗十足;综合疗法治疗膝关节骨性关节炎66例[J];湖南中医药导报;2000年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘毅斌;程红亮;吴劲松;;手法调整膝关节肌力平衡治疗膝关节骨性关节炎的临床研究[J];中医药临床杂志;2009年06期
2 张国有;王淑珍;张庆萍;韩为;;中医治疗膝骨性关节炎的实验近况[J];中医药临床杂志;2010年02期
3 何正锋;;中医辨证分型治疗膝骨关节炎临床观察[J];中医药临床杂志;2011年05期
4 张梅,陈朝晖,李平;中药治疗骨关节炎机制的研究进展(综述)[J];安徽卫生职业技术学院学报;2003年02期
5 沈卫华;潘伟忠;张聪武;;原发性干燥综合征16例误诊分析[J];安徽医药;2007年01期
6 裴济民;贺占坤;何惠生;;关节镜手术和硫酸氨基葡萄糖治疗膝骨关节炎[J];安徽医药;2009年10期
7 李刚;中医药治疗膝关节骨性关节炎的研究进展[J];安徽中医学院学报;2003年06期
8 陈朝晖,曹日隆;中药外治法治疗膝关节骨性关节炎研究进展[J];安徽中医学院学报;2004年04期
9 陈鹏;朱琳;邹荥;杜红莲;周云;顾向浩;;雷公藤多苷联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎的随机对照试验[J];安徽中医学院学报;2011年06期
10 冯伟,石印玉,沈培芝,徐宇;补肾方和柔肝方含药血清对软骨细胞增殖动力学研究[J];浙江中医学院学报;2001年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘毅;张天宏;吴术红;;关节镜清理术治疗中晚期膝关节骨性关节炎[A];2007年贵州省医学会骨科学分会学术年会论文汇编[C];2007年
2 刘圣根;段早辉;许晓华;蒋云根;林斌;;治疗强直性脊柱炎中药疗效观察[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
3 李烨;黄海东;;膝关节腔穿刺注射药物治疗骨关节炎[A];中国药学会全国骨科药物与临床应用学术研讨会论文集[C];2006年
4 丁敬沛;;关节腔内注射玻璃酸钠治疗膝骨性关节炎疗效观察[A];中国药学会全国骨科药物与临床应用学术研讨会论文集[C];2006年
5 周正球;吴炅;周定华;;中药熏蒸治疗膝骨关节炎56例临床观察[A];中国药学会全国骨科药物与临床应用学术研讨会论文集[C];2006年
6 戴七一;刘靖;王大伟;兰靖杰;黄明棣;;玻璃酸钠对实验兔膝关节软骨细胞DNA氧化性损伤影响的研究[A];中国药学会全国骨科药物与临床应用学术研讨会论文集[C];2006年
7 杨茝;;痛风发作的诱因、饮食指导及防治策略[A];中国康复医学会疗养康复专业委员会2008年学术会议论文汇编[C];2008年
8 张俊红;谷雪;林涛;;不同剂量甲氨蝶呤治疗幼年类风湿关节炎疗效观察[A];中国康复医学会疗养康复专业委员会2008年学术会议论文汇编[C];2008年
9 周泉;王拥军;施杞;侯宝兴;莫文;胡志俊;刘梅;周重建;孙鹏;;益气化瘀方对椎间盘纤维环细胞凋亡的影响[A];全国中西医结合学会骨伤科专业委员会第十二次学术年会浙江省中西医结合学会骨伤科专业委员会第十次学术年会论文汇编[C];2004年
10 章建华;童培建;陈俊杰;季卫锋;;膝关节骨性关节炎的综合治疗[A];全国中西医结合学会骨伤科专业委员会第十二次学术年会浙江省中西医结合学会骨伤科专业委员会第十次学术年会论文汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨帆;雷公藤甲素急性肾毒性作用机制及抗氧化剂维生素C对肾脏的保护作用的研究[D];华中科技大学;2011年
2 陈江;静水压下芹菜素对人椎间盘髓核细胞凋亡及基质代谢的影响[D];北京中医药大学;2011年
3 巫子涵;电温针对膝骨关节炎患者血清细胞因子与生存质量的影响[D];广州中医药大学;2011年
4 刘渊;膝骨关节炎病证特征及与CTX-Ⅱ和COMP的相关性研究[D];广州中医药大学;2011年
5 曾兆晖;经筋刺法治疗膝关节骨性关节炎的临床研究[D];广州中医药大学;2011年
6 李俐慧;独活寄生颗粒配合耳穴贴压治疗膝骨关节炎的临床研究[D];广州中医药大学;2011年
7 张婷;藏木香和云木香化学成分及生物活性研究[D];北京协和医学院;2011年
8 秦梦;骨痹舒片对膝骨关节炎组织形态、氧自由基及Coll-Ⅱ、MMP-1、MMP-13影响的研究[D];福建中医药大学;2011年
9 韩尽斌;养阴清络法对类风湿关节炎骨质破坏的干预作用及机制研究[D];南京中医药大学;2011年
10 滕加文;补肾壮骨胶囊干预实验性膝骨性关节炎机理研究[D];南京中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周宇;髋臼撞击综合征骨凸的组织学研究[D];郑州大学;2010年
2 陈永源;追风除痹胶囊治疗膝关节骨性关节炎阳虚寒凝证的临床研究[D];湖南中医药大学;2010年
3 毛滔;透明质酸钠配合独活寄生汤离子导入治疗膝关节骨性关节炎(肝肾不足证)的疗效观察[D];湖南中医药大学;2010年
4 王政光;健膝壮骨方对大鼠骨性关节炎软骨细胞凋亡及其调控基因P53、Bcl-2表达作用的影响[D];浙江中医药大学;2010年
5 刘光东;中药口服治疗膝关节骨性关节炎的系统评价[D];黑龙江中医药大学;2010年
6 胡晓枚;梅州市骨关节炎患者全髋关节置换术后生存质量的调查[D];暨南大学;2010年
7 田明;合擦手法为主治疗膝关节骨性关节炎的临床研究[D];山东中医药大学;2010年
8 郑靖宇;自制小针刀治疗膝骨性关节炎的临床疗效评价[D];山东中医药大学;2010年
9 张耀文;补肾安坤汤治疗肾阴阳两虚型绝经综合征的临床研究[D];山东中医药大学;2010年
10 孙欣光;雷公藤药材有效组分群制备及其质量分析[D];石河子大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 韦家杰;镇痛消风汤治疗痛风18例[J];安徽中医学院学报;1989年02期
2 武步经;武步涛;;威灵仙临证运用一得[J];甘肃中医;1993年05期
3 邓廉夫;IL-1、TNF和IL-6与骨关节炎[J];国外医学(创伤与外科基本问题分册);1996年02期
4 吕丹;威灵仙的药学研究[J];海峡药学;1999年04期
5 陆焕清;李瑞之;孙明爱;;威灵仙治疗胆石症临床疗效和实验观察[J];河南中医;1987年06期
6 苏冬生,戴河渗;威灵钩藤排石汤治疗上尿路结石52例[J];基层中药杂志;1994年03期
7 闫芳,马东升;黄芪及参麦注射液治疗病毒性心肌炎临床疗效观察[J];宁夏医学杂志;1999年01期
8 史庭仁;威灵溶石汤治疗尿路结石26例[J];四川中医;1997年11期
9 王耶,刘建宇,宋艳,孟繁莉;丹参和透明质酸钠注射液对骨性关节炎治疗作用的实验研究[J];中国生化药物杂志;1998年05期
10 杨灿荣;参麦注射液治疗肺心病并冠心病心力衰竭60例分析[J];实用医学杂志;1999年08期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邵乐南,程鹏,马绪臣,陈卫民;雌二醇对兔髁突软骨细胞增殖与分化的影响[J];同济医科大学学报;2000年06期
2 何清义,李起鸿,许建中;两种诱导方法对去分化软骨细胞II型胶原的诱导[J];中国矫形外科杂志;2004年Z4期
3 肖进;徐心侨;刘登峰;詹静;谷志远;;兔颞下颌关节盘前移位后髁突软骨细胞Fas及Caspase-8表达研究[J];口腔医学研究;2008年02期
4 周国顺;李雄峰;管国华;蒋雪生;黄胜;陈成冬;;兔软骨细胞的高密度培养及生物学特征[J];浙江医学;2008年07期
5 李景学 ,蔡跃增;自我测验[J];国外医学.临床放射学分册;1986年05期
6 张春雷 ,王金华 ,孙美乐 ,石玉霞 ,姚洪菊;锌对软骨细胞保护作用的电镜观察[J];哈尔滨医科大学学报;1989年S1期
7 张春雷,孙美乐,姚洪菊;抗氧化剂和透明质酸对软骨细胞的保护作用[J];中国地方病学杂志;1992年06期
8 李宏强,许善锦,常淑云,王夔;活性氧和黄腐酸使软骨细胞分泌蛋白多糖异常[J];科学通报;1994年04期
9 姚向前,马绪臣,张震康;兔下颌骨髁状突软骨细胞的分离、培养和鉴定[J];北京医科大学学报;1996年06期
10 王松艳!儿科学院儿保科;长骨干骺端生长板发育的调控[J];重庆医科大学学报;1999年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 冷薇;冯文周;邹学农;;骨性关节炎(OA)临床研究进展及药物治疗[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
2 张继帅;郝振明;谭晓红;王友亮;毛春明;吕娅歆;程萱;杨晓;;软骨细胞特异性Smad4基因剔除导致小鼠长骨发育异常[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
3 赵阳;柳子星;王颖;张惠珍;王树军;葛海良;;大鼠IL—10真核表达载体在软骨细胞中的瞬时表达[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
4 刘献祥;;毫米波抑制TNF-α诱导NF-κB信号转导通路的实验研究[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年
5 任宏造;;软骨细胞的超生结构病理[A];第六次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1990年
6 张亚;王晓东;尹航;张锡庆;董寅生;;兔骺板软骨细胞与多孔聚乳酸、多孔丝素材料的体外相容性[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年
7 张春雷;孙美乐;姚洪菊;;抗氧化剂和透明质酸对软骨细胞的保护作用[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
8 张艳;柴岗;刘伟;周广东;崔磊;曹谊林;;体外培养过程中去分化的人软骨细胞基因表达谱的变化[A];第四届华东六省一市整形外科学术会议暨2007年浙江省整形、美容学术会议论文汇编[C];2007年
9 钟玉;李荣亨;;复元胶囊含药血清对软骨细胞P38信号通路的影响[A];全国第七届中西医结合风湿病学术会议论文汇编[C];2008年
10 曲彦隆;杨卫良;陆晓峰;杜劲松;;骨髓基质干细胞及相关因子在软骨损伤修复中的应用研究进展[A];第五次全国创伤康复暨第七次全国运动疗法学术会议论文汇编[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 保健时报特约记者 方序;体外“养”一块软骨补膝盖[N];保健时报;2011年
2 记者 邰举;韩用猪软骨细胞制成生物材料[N];科技日报;2008年
3 吴一福;西安交大:用人胎儿软骨细胞培养成功软骨组织工程种子细胞[N];中国医药报;2006年
4 陈如为;骨关节炎折磨千万人软骨细胞缺氧是元凶[N];医药经济报;2000年
5 于峰;哪些运动有助孩子长高[N];中国中医药报;2008年
6 徐亚静;上海两项自然科学基金项目通过鉴定[N];中国医药报;2005年
7 杨春;药物增高不可信[N];大众卫生报;2005年
8 姚乐;保护关节要趁年轻[N];农村医药报(汉);2008年
9 黄爱群;药物增高不可取[N];中国医药报;2001年
10 健康时报记者 王志胜;软骨细胞移植治软骨损伤[N];健康时报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李元城;微流控芯片上胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对兔关节软骨细胞体外增殖的影响[D];大连医科大学;2010年
2 孙宝宾;鼻中隔软骨细胞与神经肽关系的实验研究[D];复旦大学;2004年
3 杨朝晖;钠离子通道阻断剂利多卡因体内外干预关节软骨的生物学效应[D];山西医科大学;2011年
4 杜佳梅;以小耳残耳软骨细胞为种子细胞的组织工程软骨的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
5 杨运东;骨炎定对体外培养软骨细胞的影响[D];广州中医药大学;2001年
6 胡建华;骨性关节炎软骨细胞凋亡的研究[D];中国协和医科大学;1999年
7 傅捷;含软骨细胞的纤维蛋白胶修复兔关节软骨缺损的实验研究[D];第二军医大学;2000年
8 周强;异体软骨细胞复合透明质酸苄基酯凝胶修复关节软骨缺损[D];中国医科大学;2005年
9 祁军;大鼠骺板软骨细胞体外三维培养及细胞响应力学信号的初步机制[D];华中科技大学;2011年
10 陈书军;组织工程软骨的构建及修复关节软骨缺损的实验研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邱丽燕;人骨髓间充质干细胞的分离、培养及向软骨细胞方向的诱导[D];浙江大学;2003年
2 孙和炎;自固化磷酸钙/纤维蛋白凝胶双相支架负载软骨细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究[D];安徽医科大学;2003年
3 温叶飞;耳廓软骨细胞生物学特性研究及组织工程软骨的体外构建初探[D];西北农林科技大学;2004年
4 王结果;异种关节软骨与MSCs体外共同培养的实验研究[D];南京医科大学;2010年
5 杨万波;胰岛素样生长因子对软骨细胞复合物体外成软骨能力的影响[D];武汉大学;2004年
6 王利刚;中药鹿茸生长素对家兔关节软骨细胞代谢的影响[D];江西医学院;2004年
7 王宁;等离子刀不同能量对软骨辐射效应的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
8 孙涛;同种异体软骨细胞移植术后关节软骨蛋白多糖的测定[D];青岛大学;2003年
9 陈哲峰;利用PLA,PGA,PLGA三种支架再生兔关节软骨的实验研究[D];南京医科大学;2005年
10 李雪盛;人鼻中隔软骨细胞和新型与改性聚乳酸支架在软骨组织工程的应用前期研究[D];第一军医大学;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026