收藏本站
《复旦大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

糖化终末产物受体参与糖尿病视网膜病变机制及其干预研究

夏欣  
【摘要】:持续的高血糖是引起糖尿病并发症的一个重要因素,在高血糖环境中,还原性糖如葡萄糖与循环蛋白或结构蛋白通过共价交联,发生非酶糖化作用形成糖化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)。这些共价化合物与组织血液中多种细胞成份密切相关,其在各种组织蛋白上的过度沉积可引起老龄化和糖尿病的多种并发症。 糖化终术产物受体(Receptor for advanced glycation end products,RAGE)是近年来被明确称为细胞表面分子免疫球蛋白超家族新成员的AGEs的特异性受体,可在多种细胞表面表达。但是关于视网膜微血管内皮细胞和周细胞RAGE的表达尚在研究阶段,深入研究RAGE的特性和寻找有效阻断该受体的方法,有助于系统地探索糖化终末产物参与糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR)的病理机制。 本实验室在前期工作中通过免疫组化观察到糖尿病大鼠视网膜血管上AGEs的沉积,而且体外孵育的AGE-BSA和AGE-RSA能够诱导正常大鼠发生类糖尿病视网膜血管病变的发生。本研究应用选择性培养基进行牛视网膜微血管内皮细胞和周细胞的原代培养,观察微血管细胞上RAGE的表达以及针对RAGE序列的反义寡核苷酸的干预作用;并同时观察了随糖尿病病程的延长,体内RAGEmRNA表达的变化以及氨基胍是否具有干预作用。 第一部分 糖化终末产物受体参与糖尿病视网膜病变机制的研究 首先应用PCR方法,分别观察2wk,4wk和8wk糖尿病大鼠以及氨基胍干预8wk后视网膜RAGEmRNA的表达。本实验发现随着糖尿病病程的延长,4wk组糖尿病大鼠视网膜上RAGEmRNA的表达(relative IOD=0.3350+0.0696)较2wk组(relative IOD=0.2134+0.0554)明显升高(P<0.01),但其增加不是无限制的,8wk组视网膜上RAGEmRNA的表达(relative IOD=0.2956+0.0255)未见增加,与4wk组比较无统计学意义(P>0.05)。无论微血管组织或细胞表面的受体,都可能达到一定的饱和,所以在8wk病程糖尿病大鼠组,RAGEmRNA的表达与4wk组比较未见明显的升高。正常对照组在整个实验过程中,其RAGEmRNA均未见明显改变,但可见弱表达,说明正常组织中也存在RAGEmRNA的表达,持续的高血糖可能促进RAGEmRNA表达水平的上调,从 而加强AGE~RAGE的相互作用,促进DR的发展。本研究观察了swk病程组糖 尿病大鼠给予氨基肌治疗后,RAGEmRNA的表达(relative IOD=0.1237士0.0225) 较未予以氨基肌治疗组明显下降(:elative IOD=0.2956士0.0255)(P0.01),与正 常对照组(relative IOD=0.1460士0.0282)和氨基肌治疗对照组(relative IOD= 0.1055士0.0218)比较无明显差异(P0.05),推测氨基肌可能直接或间接调节细 胞AGES受体基因的表达,从而减少AGE-RAGE相互作用可能导致的组织病理 改变,提示氨基肌和其他AGES抑制剂在防治糖尿病慢性并发症中的重要意义。 其次本实验应用牛视网膜微血管进行消化分离,采用含10%人血清、 100协g/ml肝素(Heparin)的nulbeeeo改良的Eagle培养基(Dulbeeeo,5 Modified Eagle’s Medinm,DMEM)和含20%胎牛血清的DMEM培养基分别选择性培养内 皮细胞(Bovine Retinal Endothelial Cells,BREC)和周细胞(Bovine Retinal Pericytes,BRP)。通过荧光显微镜观察乙酞化低密度脂蛋白Dll一Ac一LDL吞噬情 况和应用Von Willebrand因子抗体免疫组织化学鉴定内皮细胞;以及a一平滑肌肌 动蛋白抗体免疫组织化学鉴定周细胞。选择性培养基的应用使得内皮细胞和周细 胞的纯度达到98%以上,并能连续传代。BREC早期似小鲤鱼状聚集在微血管碎 片周围,呈片状鹅卵石样单层生长,存在接触性抑制;周细胞多散布在距血管碎 片稍远处,形状不规则,呈无接触性抑制的生长。BREC可吞噬Dil一Ac一LDL, 细胞浆内有荧光表达;消化传代后BREC中Von Wlllebrand因子表达阳性,而a- 平滑肌肌动蛋白表达阴性;BRP的a一平滑肌肌动蛋白表达阳性,而Von Wilfebrand 因子表达阴性。本实验通过选择性培养基的应用和培养皿的处理,可分别获得较 高纯度的内皮细胞和周细胞,简单并具有良好的重复性,无需额外的步骤来去除 内皮细胞中混杂的周细胞。 本实验取第二代细胞应用多克隆抗R了、GE抗体,检测到BREC和BRP有糖 化终末产物受体的表达,内皮细胞和周细胞均为浆表达,核无染色。原代培养的 BREC和BRP在传代至第二代时提取BREC和BRP的总RNA,经Rl飞PCR扩增 出386bp的条带。确定了正常生物体内存在RAGE的固有基因,为进一步选择 性阻断糖化终末产物的致病途径提供有力的证据。 同时,本实验取终浓度somg/ml BsA,soommol/LD一Glucose,于37oC孵箱 内避光孵育12wk,制备外源性AGEs,经sePhaeryls一300层析纯化,SDS一队GE 蛋白电泳鉴定AGE一BSA和CO~assie法测定蛋白浓度。观察体外孵育的 AGE一BSA对BREC和BRP的毒性作用。发现随着AGEs剂量的增加,细胞被抑 制呈上升趋势,说明AGEs对B既c和BRP的抑制与浓度呈正相关。500林留ml AGE一BSA抑制内皮细胞为空白对照组的72.8月5.9%,抑制周细胞为空白对照组 的64.8士9%。本实验还发现低浓度AGES对内皮细胞有一定促增生作用,但与空 白对照组比较无统计学意义。应用相差倒置显微镜观察500卜g/ml AGE一BSA和 BSA
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R774.1

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 帅晓明;反义寡核苷酸作用机制研究进展[J];国外医学(分子生物学分册);2001年04期
2 王光璐,张风,袁申元,孟淑敏,朱良湘,卢宁,付汉菁,彭晓燕,胡虹莺,焦树玲;北京地区糖尿病视网膜病变及其他慢性并发症的调查[J];眼科;2001年03期
3 ;1994年中国糖尿病患病率及其危险因素[J];中华内科杂志;1997年06期
4 赵家良,贾丽君,睢瑞芳,LeonBEllwein,张承训,降丽娟,张红,孙国强,宋学峰,毛进;北京市顺义县50岁及以上人群中盲患病率调查[J];中华眼科杂志;1999年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭晓萍;夏群;张伟;张尧贞;楮德发;;80岁以上老年人的视力状况及眼部情况调查[J];北京医学;2006年12期
2 倪青;;早诊断截断病源防传变 早治疗先安未受邪之地——糖尿病早期并发症与中医“既病防变”[J];北京中医药;2008年06期
3 李才,侯芳玉,张国军,苗春生,邹雅斌;糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物含量与纤溶酶原激活物抑制物-1表达的关系[J];吉林大学学报(医学版);2002年06期
4 苗春生,赵丽艳,赵雪梅,张秀云,李才;糖肾安对糖基化抑制作用的体外研究[J];吉林大学学报(医学版);2003年06期
5 赵丽艳,苗春生,赵雪梅,张秀云,李才;糖肾安对糖尿病大鼠糖基化产物形成和氧化应激的抑制作用[J];吉林大学学报(医学版);2003年06期
6 梁雅静,李才,侯芳玉;牛磺酸对乙醇醛细胞毒性的抑制作用[J];吉林大学学报(医学版);2005年02期
7 郦琳琳;刘乃丰;张丽容;;糖基化终产物对小鼠胚胎成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响[J];吉林大学学报(医学版);2007年02期
8 孙敏;孙晶;朱荃;;复方HSF3对体外蛋白质非酶糖化反应的影响[J];中华中医药杂志;2006年10期
9 黄文智;梁晓春;王普艳;赵丽;李伯武;张彦东;;筋脉通对实验性糖尿病大鼠坐骨神经AGEs及其受体表达的影响[J];中华中医药杂志;2011年04期
10 唐斌;李治;罗羿;罗海燕;何艳楠;冯明娟;刘绍勇;袁晓会;;重庆市江北区城乡50岁及以上人群白内障的流行病学调查[J];重庆医学;2011年06期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 许震颖;;天津市1975—1996年糖尿病患者、病死率及住院情况分析[A];中华医院管理学会全国第11次病案管理学术会议论文集[C];2002年
2 管永光;王军;于淑娟;徐献兵;史文慧;;美拉德反应产物功能性及食用安全性研究[A];2010第二届中国食品安全高峰论坛论文集[C];2010年
3 高菊玲;;2型糖尿病合并高血压对心血管病变影响的分析[A];玉溪市第十一届内科学术年会论文集[C];2007年
4 倪青;;早诊断截断病源防传变 早治疗先安未受邪之地——糖尿病早期并发症与中医“既病防变”[A];第六次全国中西医结合中青年学术研讨会论文集[C];2008年
5 齐慧;杨琛;陈华;奚冬梅;杨黎明;;浦东新区陆家嘴街道60岁及以上人群盲和低视力流行病学调查[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文集[C];2010年
6 魏建丽;廖燕红;周宏健;章微微;蒋春琴;;高度近视眼CNV的光动力治疗(PDT)临床观察[A];浙江省中西医结合学会眼科专业委员会第十一次学术年会资料汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑锦花;天然抗氧化物拮抗胰岛素抵抗的分子靶点筛选[D];吉林大学;2011年
2 罗俊;武汉市糖尿病流行趋势及其预测的研究[D];华中科技大学;2010年
3 谢莹;晚期糖基化终产物诱导内皮细胞中的自噬[D];苏州大学;2011年
4 王孝勇;无症状2型糖尿病及糖尿病前期人群社区筛查策略研究[D];山东大学;2011年
5 孙健平;2型糖尿病影响因素的巢式病例对照研究[D];青岛大学;2012年
6 徐标;糖尿病血管并发症机制的研究[D];南京医科大学;2002年
7 封卫毅;周络通对糖尿病周围神经病变的保护作用及其作用机制研究[D];北京中医药大学;2003年
8 杜婧;肾康注射液对高糖培养肾小球系膜细胞周期异常的调节作用[D];成都中医药大学;2003年
9 江国荣;FIA检测AGEs和CAM整体模型实验方法的建立及其防治糖尿病血管并发症中药筛选[D];南京中医药大学;2003年
10 陈安术;PL-AG抗糖尿病并发症的药理学研究[D];沈阳药科大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王晓莉;涤纶线、肠线对衰老皮肤术区衰老因子影响的对比研究[D];山西医科大学;2011年
2 乔乙春;ERα和RIP140基因多态性与2型糖尿病关系的研究[D];吉林大学;2011年
3 林海;细胞因子VEGF、IGF-1与2型糖尿病视网膜病变的相关性研究[D];吉林大学;2011年
4 李莉娜;2008年我国糖尿病疾病负担研究[D];北京中医药大学;2011年
5 周宇琼;糖尿病患者中医医院住院费用影响因素分析及预测[D];北京中医药大学;2011年
6 杨永明;云南省大理市50岁及以上白族农民白内障患病和手术状况的调查[D];昆明医学院;2011年
7 李娟娟;大理50岁及以上农村白族人口屈光不正患病率和相关因素分析[D];昆明医学院;2011年
8 王雅静;基于核磁共振代谢组学对2型糖尿病脑血管并发症的研究[D];福建医科大学;2011年
9 苏晓庆;糖尿病视网膜病变证型与视野及尿白蛋白关系的研究[D];成都中医药大学;2011年
10 刘圣林;血浆RCS水平与NAFLD风险率的相关性研究[D];湖南师范大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 刘淑琴,郭玉銮,王盼程;首都钢铁厂职工糖尿病患者眼底荧光血管造影分析[J];眼科;1997年03期
2 潘孝仁,李进平,刘娟,李光伟,征革凡,胡英华,王继兴,刘平安,胡泽溪,林红;血糖、血浆胰岛素水平与血压升高的关系发生于糖尿病之前?[J];中华内分泌代谢杂志;1994年03期
3 袁申元,朱良湘,胡虹莺,潘素芳,袁明霞,郭丰祥,郑全良,詹化文,鲁宗学,傅汉菁,李淑清,陈建文,刘元涛,张风,王风茹,张鸣晓,初培芝,冯建平;北京地区 20682 人群糖尿病筛查及 1566 人 OGTT 的研究[J];中华内分泌代谢杂志;1997年02期
4 潘孝仁,李光伟,胡英华,王继兴,杨文英,安作新,刘娟,曹辉碧,胡泽溪,庞成言,张辉,郑辉,王金平,姜希贵,姜亚云;饮食和运动干预治疗对糖尿病发病率的影响──530例糖耐量低减人群六年前瞻性观察[J];中华内科杂志;1995年02期
5 ;1994年中国糖尿病患病率及其危险因素[J];中华内科杂志;1997年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘学政,萧鸿,王中彬,李瑞祥;糖尿病早期大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡研究[J];眼科研究;2001年01期
2 韩冰,徐强,朱荃,韩凌;周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、胶质细胞及巨噬细胞增殖的影响[J];国际眼科杂志;2004年05期
3 王林,熊密,车东媛,刘绍春,郝春荣;低氧对肺血管周细胞转化生长因子TGF-β1 mRNA及蛋白表达的影响[J];同济医科大学学报;1999年06期
4 刘学政,萧鸿,李永洋,李莉霞,李瑞祥;早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡及其特征[J];眼视光学杂志;2001年03期
5 冯一梅;邹仲敏;徐辉;;周细胞的研究进展[J];现代生物医学进展;2008年03期
6 王大江;糖尿病视网膜病变细胞凋亡的研究进展[J];锦州医学院学报;2002年02期
7 肖家翔;陈梅;张磊;;护网明目散对实验性糖尿病视网膜病变周细胞影响的研究[J];中国中医眼科杂志;2009年03期
8 杨婴;细胞因子与糖尿病视网膜病变微循环障碍[J];眼科新进展;1996年03期
9 刘学政,李永洋,萧鸿;糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡及相关基因的表达[J];第四军医大学吉林军医学院学报;2001年01期
10 刘学政,李锦平,萧鸿,曲维新,李瑞祥;糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡——TUNEL法研究[J];锦州医学院学报;1999年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张弘;赵小朋;张志光;;腺病毒-骨形成蛋白7对人脂肪周细胞向软骨分化影响的研究[A];第八届全国颞下颌关节病学及(牙合)学大会论文汇编[C];2011年
2 王清良;卞修武;肖华亮;蒋雪峰;;胶质瘤周细胞的分离培养及鉴定及其在肿瘤血管生成中的作用[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
3 袁斯明;陈荣亮;王修坤;周航波;沈卫民;周晓军;;婴幼儿血管瘤周细胞的体外和体内成脂肪实验[A];第七届中国医师协会美容与整形医师大会论文集[C];2010年
4 赵伟;蒋爱华;刘祖国;;大鼠角膜碱烧伤后新生血管对周细胞募集的研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
5 翟丽丽;杨迷玲;李争艳;刘杨;王正彩;王立峰;;周细胞的最新研究进展[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
6 王清良;卞修武;肖华亮;蒋雪峰;;胶质瘤周细胞的分离培养及鉴定[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
7 张继平;;医药科研课题的选题与设计[A];广东省药学会送学下乡地市药学人员继续教育学习班讲义[C];2007年
8 黄泽君;李锐;张莹;陈朝晖;袁曼丽;杨正春;;兔VX2肿瘤超声造影灌注定量参数与肿瘤组织周细胞变化[A];2010年贵州省医学会超声学分会学术会议论文汇编[C];2010年
9 邵素霞;周宏川;张雷;;胎儿心外膜下血管结构的扫描电镜观察[A];第二届全国扫描电子显微学会议论文集[C];2001年
10 廖方正;张虹;陈晓莉;蔡定均;;针刺对糖尿病大鼠视网膜病变、病理形态的影响[A];糖尿病中医研究进展——全国第六次中医糖尿病学术会议论文集[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前7条
1 苏蔚 张媛戴 德哉;糖尿病性视网膜病变治疗药研发阔步前行[N];中国医药报;2006年
2 仝小林 赵昱 毕桂芝 陈良;有独立于降糖药以外的络脉保护作用[N];中国中医药报;2006年
3 余志平;靶向攻击 围剿癌细胞[N];中国医药报;2004年
4 中华医学会糖尿病学分会主任委员 杨文英;多脏器损害缘起脂毒性[N];健康报;2007年
5 中国中医科学院眼科医院 周尚昆;糖尿病性视网膜病变 防治宜早不宜迟[N];中国中医药报;2010年
6 罗学宏;结核病青睐谁[N];大众卫生报;2007年
7 罗学宏;结核病“青睐”谁[N];家庭医生报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王清良;CD248在人脑胶质瘤微血管周细胞中的表达规律及其介导周细胞促血管生成作用的研究[D];第三军医大学;2011年
2 夏欣;糖化终末产物受体参与糖尿病视网膜病变机制及其干预研究[D];复旦大学;2004年
3 李辰;平阳霉素治疗后血管畸形的血管构型及细胞收缩表型改变[D];武汉大学;2005年
4 张朝然;VEGF和PDGFB受体酪氨酸激酶抑制剂对小鼠角膜新生血管抑制作用的实验研究[D];复旦大学;2008年
5 刘辉;色素上皮衍生因子对视网膜微血管周细胞保护作用及对MAPKs信号通路影响的研究[D];吉林大学;2008年
6 袁斯明;婴幼儿血管瘤病理演变机制研究[D];第二军医大学;2005年
7 刘熙朴;牛眼脉络膜毛细血管内皮细胞及周细胞的培养和鉴定[D];中国协和医科大学;1990年
8 王应利;视网膜周细胞对微血管内皮细胞生长和紧密连接形成影响的研究[D];第四军医大学;2006年
9 朱冬青;视网膜酸堆积对血管生长调节因子表达和血管细胞生长的影响[D];上海交通大学;2007年
10 章剑;脂质体转染影响糖尿病大鼠视网膜下神经干细胞移植的实验研究[D];华中科技大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 夏艳;小鼠、大鼠和人睾丸管周细胞体视学研究[D];暨南大学;2011年
2 陈兰悦;AGE对DR周细胞的影响机制及银杏叶对DR的保护作用[D];吉林大学;2004年
3 刘翩;α-干扰素联合化疗诱导黑色素瘤血管正常化中的初步研究[D];华中科技大学;2010年
4 李永梅;周细胞在心肌纤维化发生发展中的作用[D];吉林大学;2006年
5 刘卫东;锌对糖尿病大鼠视网膜病变治疗的研究[D];吉林大学;2012年
6 张翔;槲皮素对体外高糖培养牛视网膜毛细血管周细胞生长的影响[D];青岛大学;2009年
7 黎笑楠;坎地沙坦对糖尿病大鼠视网膜病变的影响[D];辽宁医学院;2011年
8 王坚;AGEs诱导的糖尿病微血管病变模型的研究[D];南京中医药大学;2001年
9 黄泽君;超声辐照载诺帝脂质微泡抗兔VX2肿瘤血管生成的实验研究[D];第三军医大学;2010年
10 陈琳琳;观察长期高脂饮食大鼠视网膜微血管的变化及吡格列酮干预疗效[D];河北医科大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026