收藏本站
《复旦大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

表皮生长因子受体介导的靶向性基因治疗导入系统

李宗海  
【摘要】:肿瘤基因治疗有望成为除手术、放疗和化疗等方法外的又一新的抗癌策略。尤其在抗肿瘤转移和复发方面将起重要作用。目前还缺乏将基因导入肿瘤细胞的高效靶向性载体系统,这是肿瘤基因治疗至今尚未成为临床常规治疗措施的关键因素之一。表皮生长因子受体(EGFR)由于在很多肿瘤有高表达,因此是一个很好的靶点。本研究旨在建立一种靶向EGFR受体的基因导入系统并检验其有效性,为肿瘤的靶向性基因治疗提供可靠的理论依据与实践指导。 第一部分 利用噬菌体多肽展示文库筛选表皮生长因子受体的配体多肽 【目的】寻求可以与表皮生长因子受体(EGFR)受体特异性结合的配体多肽。【方法】以EGFR蛋白为靶,利用噬菌体展示随机12肽库进行筛选;或者构建稳定高表达EGFR突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)胞外区的U87细胞系,以该细胞系为筛选靶,利用环7肽库和12肽库进行筛选。经过多轮筛选后,随机挑选克隆进行测序。把富集的克隆通过免疫组化及噬菌体回收试验鉴定获得可以与靶蛋白结合的克隆;进一步采用内吞实验研究噬菌体阳性克隆的特征。【结果】通过EGFR蛋白为靶筛选,经过三轮筛选获得展示GE11(YHWYGYTPQNVI)多肽的噬菌体Phage-GE11。噬菌体回收实验中,Phage-GE11可以和EGFR有效结合,而且可以被EGF和GE11多肽所竞争抑制。免疫组化结果显示Phage-GE11可以和EGFR表达阳性的细胞SMMC-7721,NCI-H460结合,但和EGFR表达阴性的细胞K-562细胞没有结合。此外,免疫荧光结果显示Phage-GE11可以被SMMC-7721细胞所内吞。但是,以高表达EGFR突变体Ⅲ的细胞系作为筛选靶进行筛选并没有获得阳性克隆。【结论】噬菌体文库展示技术是一项获得配体多肽的有效技术,特别是以纯化蛋白作为筛选靶可以更有效地获得阳性克隆。Phage-GE11可以与EGFR特异结合,并被EGFR表达阳性的细胞所内吞。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R346

手机知网App
【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 江秀玲;胡有根;石必枝;;抗人EGFRvⅢex单克隆抗体的制备及初步鉴定[J];实用医药杂志;2013年09期
2 江秀玲;毕富勇;王华茂;石必枝;张捷;汪茗;李宗海;;稳定表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞株的建立及其免疫原性分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年07期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 董荣春,周荣华,吕发度,陶文照;SMMC-7721人体肝癌细胞株的建立及其生物学特性的初步观察[J];第二军医大学学报;1980年01期
2 田培坤,任圣俊,任常春,滕青山,曲淑敏,姚明,顾健人;一种新的以细胞表面受体为靶向的基因导入系统[J];中国科学C辑:生命科学;1998年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨玉梅,李增曦;高血压的基因治疗[J];包头医学院学报;2005年03期
2 张武扬,陶文照,董荣春,吕发度,何德华;SMMC-7721人体肝癌细胞株的电镜和光镜观察[J];第二军医大学学报;1980年01期
3 张武扬,陶文照,董荣春,吕发度;人体肝癌细胞林中癌巨细胞形态发生的研究[J];第二军医大学学报;1981年03期
4 董荣春,吕发度,陈惠英,于赤兵,龚维振;血卟啉加激光照射对人体肝癌细胞系(SMMC-7721)作用的初步实验研究[J];第二军医大学学报;1983年01期
5 董荣春,吕发度,顾鸿椿,陈暨耀,诸长生,蔡怀新,许德余;血卟啉光敏剂加不同波段的光辐照对人癌细胞系杀伤作用的实验研究[J];第二军医大学学报;1984年03期
6 彭迁,范维杰;裸鼠简易饲养方法和裸鼠人肝癌细胞移植模型的初步研究[J];第二军医大学学报;1987年04期
7 孙尔维,卢建,徐仁宝,董荣春;糖皮质激素对糖皮质激素受体的调节 Ⅰ.人体肝癌细胞系(SMMC-7721)的研究[J];第二军医大学学报;1989年01期
8 吕发度,董荣春,刘振华,陈永裕,刘植珊,李光业;人体骨肉瘤细胞系的建立及其生物学特性观察[J];第二军医大学学报;1990年03期
9 陈永新,张光霁,许秀兰,赵瑞皎,金海英,卢亦成,朱诚,顾健人;中国人脑星形胶质细胞瘤中表皮生长因子受体的表达[J];第二军医大学学报;2002年12期
10 邹奇飞;侯瑛;刘健;葛瑞良;沈锋;;肝癌细胞系EHBC-512的建立及其生物学特性分析[J];第二军医大学学报;2009年10期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘顺芳;癌基因DJ-1在人肝细胞癌中的作用及其机制研究[D];华中科技大学;2011年
2 陈文芳;磁场对不同细胞的生物效应与磁场增强抗癌药物杀伤不同肿瘤细胞的机制初探[D];陕西师范大学;2011年
3 郑金旭;核素标记多肽K237在肺癌分子显像和靶向治疗中的实验研究[D];江苏大学;2011年
4 欧阳高亮;中国鲎鲎素对人肝癌SMMC-7721细胞诱导分化作用与机理研究[D];厦门大学;2001年
5 陈永新;靶向性非病毒载体GE7系统介导P21~(WAF-1/CIP1)基因治疗脑胶质瘤的实验研究[D];第二军医大学;2002年
6 马驰原;垂体生长激素腺瘤靶向性基因治疗的实验研究[D];第二军医大学;2003年
7 韩峻松;TIE2受体介导的靶向性非病毒载体的构建[D];复旦大学;2002年
8 戴菲寒;新型的以组蛋白H1~0为骨架的靶向于EGF受体的基因导入系统的构建[D];复旦大学;2002年
9 田波;人肝癌淋巴道转移模型体系的建立及转移机制的探讨[D];复旦大学;2004年
10 孙兴会;尿激酶受体介导的基因转移研究[D];复旦大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张愫华;牛磺酸棉酚的合成与抗肿瘤作用的研究[D];天津大学;2010年
2 付勇;肝细胞癌细胞系的细胞角蛋白异常表达及层粘连蛋白对细胞角蛋白19表达的诱导[D];第四军医大学;2001年
3 胡步荣;肽载体介导DNA转移的研究[D];安徽农业大学;2001年
4 楼朝阳;人肝癌细胞系FHCC-98的建立及其生物学特性研究与体外药理实验[D];第四军医大学;2004年
5 王凤梅;全反式维甲酸联用氟脲脱氧核苷治疗肝癌的研究[D];天津医科大学;2004年
6 林董;八种中草药中抗肿瘤活性物质体外筛选及其机制初探[D];福建农林大学;2004年
7 赵春玲;重组蛋白Adinbitor对人肝癌细胞株SMMC-7721黏附与增殖影响的初步研究[D];大连医科大学;2004年
8 陈文芳;稳恒磁场对肿瘤细胞杀伤作用的研究[D];陕西师范大学;2005年
9 邹满意;3-溴丙酮酸对SMMC-7721和H22肝癌细胞的作用研究[D];天津医科大学;2006年
10 陈江;甘氨脱氧胆酸钠诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡机制研究[D];重庆医科大学;2006年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 张兴梅;石玉生;;针对表皮生长因子受体Ⅲ型突变体的抗肿瘤研究进展[J];国际肿瘤学杂志;2006年11期
2 任新玲,沈丽英,金伯泉,马进;肺癌细胞系表皮生长因子的自分泌调节作用[J];解放军医学杂志;1998年03期
3 吴青;基因免疫[J];生命的化学(中国生物化学会通讯);1997年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 吴向华;TIE2配体寡肽的设计、筛选及其在基因治疗中的靶向导入作用[D];复旦大学;2004年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 周敏;石必枝;顾健人;李宗海;;抗EGFRvⅢ噬菌体抗体库的构建和筛选[J];中国生物工程杂志;2010年04期
2 张庆丽;石必枝;蒋华;周敏;王海;孔娟;谢海龙;;EGFRvⅢ特异性单链抗体的制备及其靶向性能[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2011年01期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 陈瑞铭,朱德厚,叶秀珍,沈鼎武,陆荣华;体外培养三个人体肝癌细胞系的建立及其特征[J];中国科学;1979年12期
2 陈瑞铭,朱德厚,叶秀珍,沈鼎武;人体肝癌体外细胞株(BEL-7402)的建立及其特征[J];科学通报;1975年09期
3 任常春,田培坤,曲淑敏,蒋惠秋,郑亚海,任圣俊,顾健人,滕青山;细胞周期素依赖的蛋白激酶抑制物诱导肝癌细胞凋亡[J];科学通报;1997年22期
4 周筱梅,陈渊卿,蒋惠秋,钱连芳,徐国威,顾健人,David Shafritz;人胰岛素样生长因子受体及其生长因子在原发性肝癌中同时过量表达[J];肿瘤;1991年06期
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026