收藏本站
《复旦大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

大黄素抑制血管平滑肌细胞增殖机制研究

王翔飞  
【摘要】: 第一部分大黄素抑制血管平滑肌细胞增殖机制研究 背景:大黄素(1,3,8-三羟基-6-甲基葸醌)是天然蒽醌化合物,可以抑制多种肿瘤细胞增生。然而,大黄素对平滑肌细胞的作用机制研究甚少。 大黄素能够促进肿瘤细胞(Mahlavu,HL-60)凋亡,Mahlavu细胞凋亡现象可被抗氧化剂(过氧化氢酶和环孢霉素A)部分阻断,但是HL-60细胞凋亡现象不能被抗氧化剂所阻断,因此ROS途径是否参与大黄素诱导细胞凋亡存在争议。大黄素在细菌中常有致突变效应(mutagenicity),在细胞中常有基因毒性(genotoxicity)。DNA损伤促进p53表达,p53途径活化后既可以抑制细胞生长,又可促进细胞凋亡。ROS途径和p53途径是大黄素发挥作用的可能途径。 大黄素可被细胞色素P450代谢酶(CYP)代谢转化为2-羟基大黄素,它抑制增殖效果强于大黄素。CYP抑制剂或者诱导剂可能改变大黄素作用特点。 方法:人血管平滑肌细胞(VSMCs)培养于M1 99培养液中。通过细胞计数、MTT法、细胞周期、细胞迁移等方法观察大黄素的作用特点。使用Annexin V和7-AAD双染法、乳酸脱氢酶释放来观察大黄素促VSMCs死亡的方式。对于ROS途径,利用ROS生成阻断剂观察大黄素促ROS生成途径,并观察ROS强度降低后VSMCs死亡方式的变化。对于p53途径,采用p53蛋白印迹、透射电子显微镜、激光共聚焦显微镜进行观察。使用CYP阻断剂和诱导剂观察大黄素作用特点(抑制VSMCs增殖、促进ROS)是否发生变化。利用基因芯片观察上述信号通路基因转录水平的变化。 结果:(1)低浓度大黄素(3-1、6.3μg/ml)抑制VSMCs增殖,高浓度大黄素(25.0μg/ml)促进VSMCs死亡。GOG1期细胞呈大黄素浓度依赖性增多,而S期细胞则显著减少,25μg/ml大黄素组S期细胞较正常对照组减少达80%(7.40±1.65%vs.39.05±5.88%,p<0.05)。不同浓度大黄素均可抑制VSMCs迁移,25μg/ml抑制率为89.6%(p<0.05)。(2)大黄素以持续稳定的方式促进细胞内ROS生成(r=0.97,p<0.01),NADPH氧化酶抑制剂(DPI或PDTC)可以抑制大黄素促ROS效应,而其他抑制剂(CsA、ABT、α-NF)则无抑制效果。细胞内抗氧化能力并无明显变化。大黄素促使VSMCs凋亡和坏死,以凋亡为主。DPI可以显著阻断200μM过氧化氢诱导的VSMCs坏死和凋亡(凋亡:12.6±0.98%vs.4.0±1.00%,p<0.05,坏死:32.2±2.99%vs.4.87±2.22%,p<0.05),也能显著阻断大黄素促VSMCs凋亡(14.55±2.29%vs.8.77±0.83%,p<0.05),对坏死并无明显影响(1.18±0.14%vs.1.25±0.28%。p>0.05)。乳酸脱氢酶活性测定显示大黄素促进VSMCs坏死,可被DPI轻微减轻。(3)大黄素干预后细胞出现非计划性DNA合成(DNA损伤修复标志)。DNA修复基因表达增强。p53蛋白表达也上调(25μg/ml大黄素组较对照组高1.69倍,p<0.05)。透射电子显微镜显示细胞核中异染色质增多。DPI未影响大黄素的UDS现象。(4)激光共聚焦显示大黄素能迅速渗透进入细胞内部,但在细胞内的分布呈明显的选择性:绝大多数大黄素分布于细胞浆中,仅有少量分布于细胞核内。(5)CYP抑制剂(ABT、α-NF)或者诱导剂(3-MC、β-NF)对大黄素抑制VSMCs增殖和促ROS生成效应均无明显影响。(6)大黄素呈浓度和时间依赖性促进VSMCs老化。我们还观察到大黄素干预后VSMCs自噬的现象。 结论:(1)低浓度大黄素抑制VSMCs增殖,高浓度促进VSMCs死亡。(2)ROS途径和p53途径是大黄素发挥效应的两个主要途径,ROS是大黄素促细胞凋亡效应的主要参与者,p53途径主要参与抑制细胞增殖,也涉及细胞凋亡。(3)培养的平滑肌细胞中没有CYP表达,大黄素自身发挥作用,而非代谢产物。 第二部分MTT法用于测定大黄素细胞毒性作用的效果 背景:MTT法被广泛用于测定药物的细胞毒性作用,但其特异性和敏感性也可以受一些因素的影响,如有颜色物质。我们将探索大黄素自身是否也是干扰因素。 方法:血管平滑肌细胞培养于M199培养液中。使用分光光度计测定大黄素和甲(?)的吸光度(O.D.)。 结果:在不同溶剂中,大黄素具有不同的吸收光谱。溶剂中存在水分时吸收光谱将向右移,与甲(?)的吸收光谱明显重叠。大黄素呈浓度依赖性直接将MTT还原为甲(?),大黄素的还原能力可被血清显著抑制。大黄素在细胞内含量非常微弱且其代谢转化非常缓慢。 结论:大黄素可以干扰MTT法的准确性,改良后的MTT法可用于评价大黄素的细胞毒性。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R285

免费申请
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 简嘉佳;;动物实验大黄素对降血糖有疗效[J];心血管病防治知识;2010年10期
2 金国华;房向东;;大黄素在延缓肾脏纤维化过程中的作用[J];山东医药;2011年32期
3 吕显林;王琴;陈清;陶亮;;大黄素对Cx32组成的细胞缝隙连接通讯功能的影响[J];中国现代药物应用;2011年10期
4 潘浩;张邢炜;王宁夫;杨建敏;周亮;徐坚;叶显华;李佩璋;;大黄素对内皮细胞一氧化氮合成的影响[J];中国现代医生;2011年16期
5 王智昊;吴扬;王英凯;;血管平滑肌细胞的增殖因素及机制[J];吉林大学学报(医学版);2011年03期
6 朱春城;彭力平;陈本超;何群;温清波;;高效液相色谱法测定消瘀贴中大黄素含量[J];现代中西医结合杂志;2011年22期
7 张娜娜;李茂莲;边云飞;高奋;杨慧宇;肖传实;;肾素(前体)受体miRNA干扰质粒的构建及鉴定[J];中国动脉硬化杂志;2011年05期
8 王青;周联;董燕;周婷;王培训;;大黄素对HT-29细胞MAPKs信号通路活化及IL-8分泌的影响[J];现代生物医学进展;2011年11期
9 夏玉树;;大黄在脾胃病中的研究与运用[J];中外医学研究;2011年20期
10 秦春明;侯华新;黎丹戎;梁燕;陈冬莲;;大黄素致鼻咽癌细胞CNE-1胀亡和线粒体膜通透性的研究[J];求医问药(下半月);2011年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 丁日高;王青秀;吴纯启;廖明阳;;大黄素诱导HK-2细胞周期阻滞和细胞凋亡的机制探讨[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
2 王彩花;谢传高;叶斌;蔡建庭;杜勤;;大黄素对大鼠慢性胰腺炎的治疗作用[A];2005年全国慢性胰腺炎学术大会专集[C];2005年
3 丁艳;黄志华;;大黄素药理作用研究进展[A];第十届全国中药药理学术会议论文集[C];2007年
4 陈英玉;郑合勇;胡建达;郑志宏;郑静;连晓岚;吕联煌;;大黄素抑制HL-60/ADR耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
5 江海燕;朱华;黄慧学;蒋利林;;虎杖不同炮制品中大黄素含量测定[A];中华中医药学会学术年会——创新优秀论文集[C];2002年
6 栾洋;李妍;戚新明;李明;任进;;大黄素诱导DNA双链断裂及其机制研究[A];中国环境诱变剂学会第14届学术交流会议论文集[C];2009年
7 马涛;齐清会;简序;杨文修;;大黄素收缩大鼠结肠环行平滑肌细胞的机制研究[A];第八届全国中西医结合普通外科临床与基础学术会议暨全国中西医结合外科危重病学习班论文汇编[C];2003年
8 李妍;栾洋;任进;;大黄素通过抑制ATP与拓扑异构酶Ⅱ的结合导致DNA产生双链断裂[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
9 刘丽军;邹洁;李臣宇;李新;胡芬;李俊英;;大黄素对P2X7受体介导的巨噬细胞死亡的抑制作用[A];全国生化与分子药理学药物靶点研讨会论文摘要集[C];2008年
10 陈英玉;郑合勇;胡建达;郑志宏;郑静;连晓岚;吕联煌;;带黄素抑制HL-60/ADR耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 怡勇;大黄素可望用于治疗介入后再狭窄[N];中国医药报;2004年
2 怡勇;大黄素可望用于心血管疾病的防治[N];医药导报;2004年
3 傅俊英;中山大学以大黄素合成抗肿瘤化合物[N];中国医药报;2006年
4 马秉智 高增平;北京中医药大学建立大血藤中大黄素含量测定新方法[N];中国医药报;2005年
5 俞长兴;大黄临床应用研究新进展[N];中国医药报;2003年
6 孙戎;五种降血脂中药[N];医药养生保健报;2006年
7 中国中西医结合学会肾病专业委员会;中药对肾脏有保护和改善作用[N];中国中医药报;2007年
8 武汉 曹霞;大黄治便秘不可长期用[N];家庭医生报;2003年
9 曹霞;便秘不可长期用大黄[N];大众卫生报;2002年
10 ;大黄临床应用研究新进展[N];农村医药报(汉);2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 朱清;肾素-血管紧张素系统及其阻断剂对血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化中的作用机理的研究[D];山东大学;2003年
2 耿庆信;糖尿病大鼠动脉损伤后新生内膜形成及冠心病合并糖尿病患者血管内皮功能的研究[D];山东大学;2004年
3 王志高;加味桃核承气汤不同配伍组方及提取方法对糖尿病血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响[D];广州中医药大学;2007年
4 彭侃夫;AOPP对血管平滑肌细胞MCP-1表达及其信号通路的研究[D];第三军医大学;2006年
5 张园;重组人组织因子腺病毒干扰载体的构建及其转染人血管平滑肌的体外研究[D];南方医科大学;2008年
6 高宇;血浆尾加压素Ⅱ水平在相关疾病中变化的临床和基础研究[D];吉林大学;2009年
7 吕平;赭曲霉发酵产大黄素及其生物合成途径和诱发机制的研究[D];天津大学;2009年
8 刘薇;大黄素肝肠代谢特征及性别差异研究[D];南方医科大学;2010年
9 朱小康;大黄素衍生物的合成与生物活性研究[D];西南大学;2011年
10 张慧娜;Sirt1对血管平滑肌细胞迁移的影响及分子机制研究[D];中国协和医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 姚婷新;大黄素对非酒精性脂肪肝大鼠内毒素性肝损伤的影响[D];中南大学;2011年
2 吴华慧;何首乌抗肿瘤化合物及衍生物抑制卵巢细胞SKOV3侵袭转移实验研究[D];广西医科大学;2011年
3 吴斌;大黄素影响大鼠胃平滑肌细胞钙敏感性调节机制的研究[D];天津医科大学;2005年
4 秦春明;大黄素衍生物合成及经线粒体介导的鼻咽癌放射增敏作用研究[D];广西医科大学;2011年
5 范仁根;大黄素(Emodin)诱导人肝癌细胞smmc-7721凋亡及其分子机制的实验研究[D];苏州大学;2005年
6 代智;顺铂细胞毒性及大黄素预防作用分子机制[D];大连医科大学;2003年
7 马玉哲;大黄素分子印迹聚合物的制备及应用[D];河北理工大学;2009年
8 边秀娟;电子自旋共振法测定何首乌中大黄素、二苯乙烯苷清除超氧阴离子自由基的实验研究[D];福建中医学院;2002年
9 察雪湘;大黄素对大鼠重症急性胰腺炎全身炎症反应肺损伤的作用研究[D];四川大学;2005年
10 车清明;金丝桃素的化学合成[D];甘肃农业大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026