收藏本站
《复旦大学》 2006年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

新基因TH1的功能研究

刘伟成  
【摘要】:人Trihydrophobin 1(TH1)基因是果蝇Drosophila TH1基因的同源物,是D.T.Bonthron等人在2000年通过定位克隆方法得到的一个新基因。序列分析表明,该基因序列从Drosophila果蝇到人之间高度保守,其位于染色体20q13上,转录产物为2.4kb,蛋白产物分子量约为65.8kd。Nothern检测表明其在组织分布广泛,在心肌和骨骼肌,肾脏,肾上腺,甲状腺里高表达。尽管其进化上高度保守,目前对于其功能研究还是一片空白。 我们实验室首先报导了新基因TH1编码产物,Trihydrophobin1蛋白,无论在体外和体内都能够特异的与Raf激酶家族中的A-Raf激酶结合,而非B-Raf或C-Raf.为进一步研究其可能具有的生物学功能,我们构建了一系列TH1的缺失突变体,通过酵母系统和GST-pulldown实验证实了TH1蛋白N端1-372氨基酸组成的区域对于这种结合是至关重要的。在HEK293和SMMC-7721肝癌细胞中,无论在静息状态还是当A-Raf受到血清刺激或癌基因Ras和Src激活后都表现为与TH1蛋白的结合并且这种结合随着A-Raf激酶活性的增强而增强。这些现象促使我们进一步研究TH1与A-Raf的结合究竟会对A-Raf的激酶活性产生什么影响。我们发现在上述细胞系中过表达TH1后,A-Raf的激酶活性明显下降,并有明显的剂量依赖关系;而B-Raf和C-Raf激酶活性并不受影响。通过构建稳定表达TH1的细胞株,经过流式细胞仪检测后,我们发现过表达TH1蛋白能够使细胞在G0/G1期增多而S期细胞数明显减少,这与我们绘制细胞生长曲线的过程中观察到的细胞生长速度减缓现象是一致的。有趣的是我们还发现TH1蛋白也同样受到A-Raf激酶地调控,表现为其可以被具有激酶活性的A-Raf磷酸化,这提示TH1可能是一种新的A-Raf激酶底物分子,但是A-Raf作用于TH1分子中的具体位点还有待于进一步的确定。 在接下来的研究中,我们发现TH1还可以与A-Raf/MEK1/ERK1通路中的其他的组分比如MEK1和ERK1分别能够结合,这提示TH1可能作为构架蛋白的可能性。我们发现,TH1能够和A-Raf,MEK1,ERK1形成多元复合物,并能够分别与这些蛋白直接结合。在体外重组蛋白结合实验中,可以发现TH1能够干扰A-Raf/MEK1以及MEK1/ERK1间的相互作用,起到了分离阻隔上游激酶和下游底物之间的作用。同样的结果在体内结合实验中也得到了证实。有趣的是,TH1对于此通路激酶级联反应的调控主要作用于A-Raf/MEK1这个层次,它能够显著的抑制A-Raf激酶的活性,而对于下游的MEK1和ERK1的激酶活性并无明显影响。这表明在调控ERK MAPK 这条通路的过程中,它是高度特异性的一个调节分子。对于Elk-1报告基因的荧光素酶测活实验中,我们发现TH1的过表达确实能够显著的抑制ERK MAPK通路的激活,这与我们以前的发现细胞周期的阻滞,生长曲线实验中观察出来的结果是一致的,表明TH1是ERK MAPK信号通路的一个新的特异的抑制调节蛋白。 为了进一步丰富对于新基因TH1的认识,在运用酵母双杂交系统筛选人胎脑cDNA文库寻找TH1新的结合蛋白的过程中,我们发现了E6AP(UBE3A)和NP220这两种新的作用蛋白,并在体内免疫共沉淀实验中证实了与E6AP的相互作用。E6AP在依赖泛素的蛋白酶体降解通路中作为一种泛素—蛋白连接酶(E3)而发挥作用。我们发现TH1蛋白能够受到E6AP参与的泛素化降解调控。 本课题研究TH1蛋白与A-Raf间的相互调控关系;研究TH1与MEK1及ERK1等多者间的作用模式,阐明了TH1作用于该信号通路的机制;研究E6AP与TH1间的关系,以探索TH1与依赖泛素的蛋白酶体降解通路的间的关系。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q343

手机知网App
【共引文献】
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 杨延钟;Trihydrophobin 1相互作用蛋白以及Trihydrophobin 1与乳腺癌细胞化疗药物敏感性之间关系的研究[D];复旦大学;2007年
2 程春明;Trihydrophobin 1与PAK1的相互作用及其生物学功能的研究[D];复旦大学;2009年
3 邹惟莹;Trihydrophobin 1促进雄激素受体降解及其在乳腺癌进展过程中作用的研究[D];复旦大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 关晓颖;1. 小鼠生后睾丸发育中TH1表达与分布的研究 2. SGT与CD99抗原相互作用在酵母中的验证[D];南通大学;2006年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 阎晓宇,姚潇,王恒樑,冯尔玲,史兆兴,苏国富,游松,黄留玉;用酵母双杂交系统筛选与痢疾杆菌侵袭素IpaC相互作用的蛋白[J];遗传学报;2004年04期
2 刘鑫;于洪伟;王凤丹;王建醒;王淑娟;于晓光;;TNF-α转化酶酵母双杂交系统“诱饵”质粒的构建及鉴定[J];中国应用生理学杂志;2008年02期
3 贺凌婕;张澍田;朱圣韬;;COX-2诱饵载体的构建及其在酵母双杂交系统中自激活作用的检测[J];首都医科大学学报;2011年01期
4 马海蓉,李维琪;酵母双杂交衍生系统[J];中国生物工程杂志;2003年02期
5 徐春晓,喻宏,严馨蕊,黄国锦,姚立红,陈爱王君,张智清;应用酵母双杂交系统筛选hTNFα特异性结合肽[J];病毒学报;2005年05期
6 刘敏;张伟;陈天艳;蔺淑梅;刘锦锋;叶峰;赵英仁;张树林;;HCV核心蛋白在酵母双杂交系统中的表达及自激活作用检测[J];第四军医大学学报;2006年03期
7 杨继勇;沈定霞;;马红球菌酵母双杂交基因组文库的构建[J];中华医院感染学杂志;2007年10期
8 白芳;殷腾飞;徐海津;乔明强;;用酵母双杂交系统研究铜绿假单胞菌EtfA和EtfB蛋白的相互作用[J];南开大学学报(自然科学版);2008年02期
9 徐向红;李斌元;马云;廖永强;何淑雅;;耐辐射奇球菌基因组DNA表达文库的构建与鉴定[J];现代生物医学进展;2009年05期
10 秦少溥;;酵母双杂交及其衍生系统[J];生物学通报;2009年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王翀;刘北忠;王东生;郝坡;金丹婷;刘畅;;酵母双杂交系统筛选与PML-C相互作用的蛋白质[A];重庆市生物化学与分子生物学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
2 薛丽琰;罗兵;张贺翠;杨永军;杨红;彭一波;朱利泉;;利用酵母双杂交系统检测SCR蛋白不同区段与SRK蛋白胞外域高变区的相互作用[A];第二届模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2012年
3 袁顺宗;谭江琳;马兵;彭旭;贺伟峰;黄正根;程文广;杨世伟;杨俊杰;王晓娟;胡婕;甘成军;陈希炜;胡晓红;张小容;罗高兴;吴军;;以酵母双杂交系统从成人肝cDNA文库中筛选与研究P311相互作用蛋白的基因序列[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
4 姜立群;温绍君;王红月;陈兰英;;应用酵母双杂交系统筛选心脏文库中与calpain相作用的蛋白质[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
5 韩月恒;张晓光;刘新平;药立波;;在酵母双杂交系统中筛选与Tec家族蛋白酪氨酸激酶Itk PH结构域相互作用的蛋白[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
6 任宏伟;康巧华;陈巧林;茹炳根;;酵母双杂交系统筛选与GIF相互作用的G-蛋白Rab3a及dUTPase的研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
7 张则婷;周颖;邵苏强;李学宝;;棉花14-3-3蛋白在纤维发育中相互作用研究[A];基因开启未来:新时代的遗传学与科技进步——湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2009年
8 谢建平;霍克克;王洪海;;利用酵母表面展示系统筛选抗体和药物先导物[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
9 郑君;张西臣;宫鹏涛;杨举;李赫;张国才;李建华;;柔嫩艾美耳球虫Rhomboid蛋白与微线蛋白相互作用的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
10 秦崇涛;王一铮;吴世代;;“基因表达调控”的教学技巧探索[A];第四届第三次全国中西医结合临床教育会议论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 本报记者 冯海波;与免疫学“打交道”的巾帼精英[N];广东科技报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王文艳;用酵母双杂交系统从大鼠心肌细胞cDNA文库中筛选与血管紧张素-(1-7)相互作用的因子[D];浙江大学;2005年
2 郑君;柔嫩艾美耳球虫Rhomboid蛋白与微线蛋白相互作用的研究[D];吉林大学;2011年
3 解志红;斯氏假单胞菌固氮调节基因nifLA的表达调控机制研究[D];中国农业大学;2005年
4 孙现超;大麦条纹花叶病毒中国株基因组克隆分析和编码蛋白相互作用研究[D];西北农林科技大学;2006年
5 申海莲;SGT及其相关蛋白功能的研究[D];复旦大学;2005年
6 张建林;乙肝病毒X蛋白相关细胞因子的分离、鉴定及功能性研究[D];武汉大学;2004年
7 鲁宁;应用酵母双杂交和酵母三杂交系统研究G蛋白信号传导通路中的相关蛋白因子[D];中国协和医科大学;2002年
8 刘萍;硫氧还蛋白过氧化物酶Peroxiredoxin Ⅱ与前列腺癌关系的研究[D];华中科技大学;2007年
9 郝亚琦;BZR1靶基因的筛选及功能研究[D];西北农林科技大学;2012年
10 刘伟成;新基因TH1的功能研究[D];复旦大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨红;应用酵母双杂交系统研究甘蓝自交不亲和决定因子的相互作用[D];西南大学;2011年
2 林振;应用酵母双杂交系统筛选与CITED1相互作用蛋白[D];南方医科大学;2013年
3 柳文清;酵母双杂交系统筛选IEX-1相互作用蛋白的研究[D];中南大学;2010年
4 尹文偲;应用酵母双杂交系统筛选与禽流感核蛋白相互作用的蛋白质[D];华中农业大学;2010年
5 谭乘方;选择性雌激素受体调节剂的筛选及其活性评价[D];华东理工大学;2011年
6 陈静;应用酵母双杂交系统筛选与PITX2相互作用的蛋白[D];华中科技大学;2013年
7 郭晓旭;酵母双杂交系统筛选与Myosin X相互作用的蛋白质[D];东北师范大学;2010年
8 张言召;马链球菌兽疫亚种类M蛋白与猪血管内皮细胞互作蛋白筛选[D];南京农业大学;2011年
9 胡岩岩;酵母双杂交系统的抗HIV中草药的快速筛选[D];河南师范大学;2012年
10 马俊俊;利用酵母双杂交系统确定细胞型朊蛋白与浮舰蛋白相互作用的分子区域[D];中国农业科学院;2013年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026