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《复旦大学》 2007年
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慢病毒介导的survivin基因稳定干扰对PC-3细胞株体内外生长的影响

陈智新  
【摘要】: 第一部分Survivin基因稳定干扰PC-3细胞系的建立 目的构建survivin基因稳定干扰的PC-3细胞系。 方法设计针对survivin基因的shRNA序列,构建survivin shRNA慢病毒载体并感染PC-3细胞,采用RT-PCR和流式细胞技术分别检测survivin mRNA和蛋白表达水平,并与阴性对照组和空白对照组PC-3细胞比较。 结果Survivin shRNA慢病毒载体感染PC-3细胞后survivin mRNA和蛋白水平分别为(5.89±0.12)%和(11.82+0.32)%,明显低于阴性对照组(55.17±0.87)%、(95.70±1.56)%和空白对照PC-3细胞(58.21±0.68)%、(95.90±1.78)%。 结论采用shRNA慢病毒载体成功构建了survivin基因稳定干扰的PC-3细胞系。 第二部分Survivin基因稳定干扰对PC-3细胞的生长及凋亡的情况 目的研究survivin基因稳定干扰对PC-3细胞凋亡及生长的影响。 方法对PC-3细胞、PC-3/c细胞、PC-3/i细胞分别行western-blot检测caspase-3蛋白质表达水平;流式细胞学检查各组细胞凋亡水平;细胞计数比较各组细胞生长。 结果各组细胞caspase-3的相对表达量分别为:PC-3细胞组(0.210±0.021)、PC-3/c细胞组(0.240±0.019)、PC-3/i组(0.574±0.041);PC-3细胞组和PC-3/c细胞组凋亡比率分别为2.3%和2.6%、PC-3/i细胞组凋亡比率为22.5%;PC-3/i细胞生长明显慢于PC-3和PC-3/i细胞。 结论慢病毒介导的survivin基因稳定干扰能在体外促进PC-3细胞凋亡、抑制细胞生长。 第三部分Survivin基因稳定干扰对PC-3裸鼠移植瘤生长的影响 目的研究survivin基因稳定干扰后PC-3裸鼠皮下移植瘤的生长和凋亡情况。 方法采用细胞悬液皮下接种的方法制作PC-3皮下裸鼠移植瘤,接种一周后开始测量肿瘤大小、并绘制移植瘤生长曲线;接种后第七周,处死裸鼠,称肿瘤重量,肿瘤标本行TUNEL检测肿瘤组织凋亡水平。 结果7周后各组肿瘤大小、重量分别为PC-3/i组:236.1±51.2 mm~3、0.21±0.04g;PC-3组:932.8±113.2 mm~3、0.75±0.12g;PC-3/c组:930.9±115.2 mm~3、0.71±0.11g;石蜡切片TUNEL检测凋亡阳性细胞百分比:PC-3/i组:38.4±9.8%;PC-3/c组:14.5±1.1%;PC-3组:12.3±1.2%。 结论Survivin基因稳定干扰能促进PC-3裸鼠移植瘤凋亡、抑制PC-3裸鼠移植瘤生长。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R737.25

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【参考文献】
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