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《复旦大学》 2006年
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Rho激酶抑制剂(Y27632)对房水流畅率的作用及其机制

陆肇曾  
【摘要】: 目的;研究选择性Rho激酶和细胞收缩抑制剂Y27632(简称;Y27)对牛眼房水流畅率、房水引流的流体模式和房水丛内壁和邻管组织(JCT)形态的作用及其机制。 方法;12只离体牛眼在15mmHg的压力下,用5.5M葡萄糖磷酸缓冲液(GPBS)灌注,连续记录房水流畅率。在达到稳定的房水流畅率后,7只牛眼用50μM Y27葡萄糖磷酸缓冲液做7ml前房内容交换,并灌注0.5ml;另5只牛眼仅用GPBS交换前房内容和灌注作为对照。然后12只牛眼再用直径为0.5μm的荧光微球溶液(0.002% v/v)交换前房内容,并灌注0.5ml,以标记房水引流的流体模式。最后全部牛眼用Karnovsky固定液灌注固定。牛眼所有4个像限均在角巩缘处做垂直和平行与角巩缘的组织切片(1-1.5mm厚),用共聚焦显微镜观察,并沿房水丛的内壁照相。根据共聚焦显微镜照片测量房水丛内壁的长度(TL)和荧光微球标记的内壁长度(L)(16照片/眼),并计算平均有效滤过长度百分比(PEFL=L/TL)。含有房水丛的标本再经进一步处理后,用光学显微镜和电子显微镜检查。在光学显微镜照片上(16照片/眼),测量房水丛内壁总长(TL)和内壁与JCT有分离的长度(SL),计算平均分离长度百分比(PSL=SL/TL)。 结果;在使用Y27后,牛眼房水流畅率平均增加0.83±0.26μl/min/mmHg(58.2±18.9%);而在对照眼其改变仅为0.04±0.14μl/min/mmHg(6.0±9.3%),这一差异在统计学上有显著意义(P=0.03和0.04)。在对照眼,荧光微球在小梁网呈现节段性分布,沿房水丛内壁斑点状标记,在集合管口有荧光微球的聚集。而使用Y27的牛眼则显示较为均匀的荧光微球分布和沿内壁更广泛的荧光微球标记。在使用Y27的牛眼,平均有效滤过长度百分比(PEFL)(57.6±6.6%)是对照眼(18.2±4.5%)的3倍(p=0.001)。光学显微镜和电子显微镜检查均显示,与对照眼相比,使用Y27的牛眼有明显的房水丛内壁与JCT的膨胀,有显著房水丛内壁与JCT之间的分离,并向房水丛管腔内隆起。在使用Y27的牛眼,平均分离长度百分比(PSL)(59.3±3.6%)是对照眼(20.8±2.0%)的2.8倍。(P0.001) 结论;Y27可以明显增加牛眼房水流畅率、沿房水丛内壁的有效滤过长度百分比和分离长度百分比。Y27的作用可能是通过重新分布房水引流到一个更广泛的房水丛内壁和JCT区域而发挥增加房水流畅率的作用。这一发现也支持我们的假设,即房水丛内壁与其下JCT连接的完整性是调节房水外流阻力的重要因素。 目的;研究选择性Rho激酶和细胞收缩抑制剂Y27632(Y27)对猴眼房水流畅率、房水引流的流体模式和Schlemm氏管内壁和邻管组织(JCT)形态的作用及其机制。 方法;8只离体猴眼在15mmHg的压力下,用5.5M葡萄糖磷酸缓冲液(GPBS)灌注,连续记录房水流畅率。在达到稳定的房水流畅率后,4只猴眼用50μM Y27葡萄糖磷酸缓冲液做5ml前房内容交换,并灌注0.3ml;另4只猴眼仅用GPBS交换前房内容和灌注作为对照。然后8只猴眼再用直径为0.5μm的荧光微球溶液(0.002% v/v)交换前房内容,并灌注0.3ml,以标记房水引流的流体模式。最后全部猴眼用Karnovsky固定液灌注固定。猴眼所有4个像限均在角巩缘处做垂直和平行与角巩缘的组织切片(1-1.5mm厚),用共聚焦显微镜观察,并沿Schlemm氏管的内壁照相。根据共聚焦显微镜照片测量Schlemm氏管内壁的长度(TL)和荧光微球标记的内壁长度(L)(16照片/眼),并计算平均有效滤过长度百分比(PEFL=L/TL)。含有Schlemm氏管的标本再经进一步处理后,用光学显微镜和电子显微镜检查。在光学显微镜照片上(16照片/眼),测量了Schlemm氏管内壁总长(TL)和内壁与JCT有分离的长度(SL),计算平均分离长度百分比(PSL=SL/TL)。 结果;在使用Y27后,猴眼房水流畅率平均增加0.59±0.11μl/min/mmHg(114.9±14.9%);而在对照眼其改变仅为0.18±0.05μl/min/mmHg(44.3±9.7%),这一差异在统计学上有显著意义(p=0.03和0.01)。在对照眼,荧光微球在小梁网呈现节段性分布,沿Schlemm氏管内壁斑点状标记,在集合管口有荧光微球的聚集。而使用Y27的猴眼则显示较为均匀的荧光微球分布和沿内壁更广泛的荧光微球标记。在使用Y27的猴眼,平均有效滤过长度百分比(PEFL)(82.5±1.2%)是对照眼(24.2±4.2%)的3.4倍(p0.001)。光学显微镜和电子显微镜检查均显示,与对照眼相比,使用Y27的猴眼有明显的Schlemm氏管内壁与JCT的膨胀,有显著Schlemm氏管内壁与JCT之间的分离,并向Schlemm氏管管腔内隆起。在使用Y27的猴眼,平均分离长度百分比(PSL)(75.2±4.0%)是对照眼(33.5±5.3%)的2.2倍。(p=0.001) 结论;Y27可以明显增加猴眼房水流畅率和沿Schlemm氏管内壁的有效滤过长度百分比和分离长度百分比。Y27的作用可能是通过重新分布房水引流到一个更广泛的Schlemm氏管内壁和JCT区域而发挥增加房水流畅率的作用。这一发现也支持我们的假设,即Schlemm氏管内壁与其下JCT连接的完整性是调节房水外流阻力的重要因素。 目的;研究选择性Rho激酶和细胞收缩抑制剂Y27632对人眼房水流畅率、房水引流的流体模式和Schlemm's管内壁和邻管组织(JCT)形态的作用及其机制。 方法;8只离体人眼在15mmHg的压力下,用5.5M葡萄糖磷酸缓冲液(GPBS)灌注,连续记录房水流畅率。在达到稳定的房水流畅率后,4只人眼用50μM Y27葡萄糖磷酸缓冲液做5ml前房内容交换,并灌注0.3ml;另4只人眼仅用GPBS交换前房内容和灌注作为对照。然后8只人眼再用直径为0.5μm的荧光微球溶液(0.002% v/v)交换前房内容,并灌注0.3ml,以标记房水引流的流体模式。最后全部人眼用Karnovsky固定液灌注固定。人眼所有4个像限均在角巩缘处做垂直和平行与角巩缘的组织切片(1-1.5mm厚),用共聚焦显微镜观察,并沿Schlemm's管的内壁照相。根据共聚焦显微镜照片测量Schlemm氏管内壁的长度(TL)和荧光微球标记的内壁长度(L)(16照片/眼),并计算平均有效滤过长度百分比(PEFL=L/TL)。含有Schlemm's管的标本再经进一步处理后,用光学显微镜和电子显微镜检查。 结果;在使用Y27后,人眼房水流畅率平均增加0.02±0.01μl/min/mmHg(8.1±3.0%);而在对照眼其改变也有0.02±0.03μl/min/mmHg(11.3±13.4%),这一差异在统计学上无显著差异(p=0.98和0.83)。在对照眼,荧光微球在小梁网呈现节段性分布,沿Schlemm氏管内壁斑点状分布,在集合管口有荧光微球的聚集。而使用Y27的人眼也显示荧光微球在小梁网呈现节段性分布,沿Schlemm氏管内壁斑点状标记,也在集合管口有荧光微球的聚集;在使用Y27的人眼,平均有效滤过长度百分比(PEFL)为47.4±6.5%,对照眼为39.0±12.5%,两者无显著性差异(p=0.41)。光学显微镜检查显示,Y27用药眼和对照眼,Schlemm氏管内壁与JCT基质紧密相贴,无Shlemm氏管内壁与JCT之间的分离。电镜下可见Schlemm氏管内壁与其下的细胞外基质结构对合,JCT组织较紧密,无内壁与其下JCT的分离;细胞与细胞及细胞与基质间的连接保持完整。在Schlemm氏管内壁下、JCT组织和小梁组织中,可以看见大量纵向、垂直和斜行排列的弹性纤维。 结论;Y27不能增加人眼房水流畅率和沿Schlemm氏管内壁的有效滤过长度,也不引起Schlemm氏管与JCT组织的分离。这可能与人眼JCT区域和小梁网中大量的弹性纤维网增强了Schlemm氏管内壁与JCT的连接,而使其难以发生分离有关。这一发现也支持我们的假设,即Schlemm氏管内壁与其下JCT连接的完整性是调节房水外流阻力的重要因素。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R775

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