收藏本站
《复旦大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

糖原合成酶激酶-3β在子宫内膜样腺癌中的表达及孕激素对其调节作用

赵明智  
【摘要】: 目的: 通过子宫内膜样腺癌患者手术组织切片检测及体外细胞实验,探讨子宫内膜样腺癌糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)表达情况,及GSK-3β对子宫内膜样腺癌细胞增殖和侵袭的影响,以及孕激素对子宫内膜样腺癌细胞GSK-3β的调节作用。 材料与方法: GSK-3β在子宫内膜样腺癌中的表达 采用免疫组化法检测2006年1月-2006年12月在复旦大学附属妇产科医院诊治、经病理证实、病史资料完整的25例子宫内膜样腺癌、9例正常子宫内膜石蜡包埋标本中GSK-3β的表达情况。通过Real Time PCR法检测高、中、低分化子宫内膜样腺癌细胞Ishikawa、HEC-1-A和KLE中GSK-3βmRNA表达,并用Western blot法检测其蛋白表达。 GSK-3β对子宫内膜样腺癌细胞增殖和侵袭的影响 运用GSK-3β小分子干扰RNA(GSK-3βsiRNA)技术干扰子宫内膜样腺癌细胞,通过荧光显微镜观察转染后细胞内绿色荧光蛋白表达情况,并用RealTime PCR法和Western blot法检测GSK-3βmRNA及其蛋白活性形式(pGSK-3β~(Tyr216))的表达以测定干扰效率。然后采用Brdu掺入实验、流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率、以及Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3,研究细胞增殖力的改变;最后用Transwell侵袭试验和明胶酶谱法检测明胶酶-A(MMP-2)的活性,观察细胞侵袭力的变化。 孕激素及AKT信号通路对GSK-3β表达的调控 采用AKT小分子干扰RNA(AKT siRNA)干扰Ishikawa细胞,用Real TimePCR法和Western blot法检测AKT mRNA及其蛋白表达,以验证干扰效率;并检测GSK-3βmRNA及pGSK-3β~(Tyr216)蛋白表达情况,研究AKT对GSK-3β的调控;通过流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡率,Western blot法检测细胞周期相关蛋白pCyclinD1~(Thr286)、凋亡相关蛋白pCaspase-8~(Thr62)表达情况,了解AKT对细胞周期的影响。 将Ishikawa细胞预处理3天后加用醋酸甲羟孕酮(MPA),然后用Westernblot法检测不同浓度MPA作用24h、48h、72h后,AKT和pGSK-3β~(Tyr216)蛋白的表达情况;用MTT法检测细胞增殖力的变化;并通过明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性,了解细胞侵袭力的改变,从而研究孕激素对AKT和GSK-3β表达和功能的影响。 结果: GSK-3β在子宫内膜样腺癌中的表达 免疫组化结果显示:相对于正常子宫内膜,GSK-3β在子宫内膜样腺癌中高表达;其中,Ⅱ期、Ⅲ-Ⅳ期子宫内膜样腺癌GSK-3β表达高于Ⅰ期;Ⅲ级子宫内膜样腺癌GSK-3β表达高于Ⅰ级、Ⅱ级;有预后不良高危因素的高危组GSK-3β表达高于低危组。Real Time PCR和Western blot结果均显示中、低分化细胞GSK-3βmRNA及蛋白表达量高于高分化细胞。 GSK-3β对子宫内膜样腺癌细胞增殖和侵袭的影响 子宫内膜样腺癌细胞转染GSK-3βsiRNA后,GSK-3βmRNA及蛋白表达均下调,说明小干扰RNA能够有效抑制GSK-3β表达;Ishikawa、HEC-1-A细胞GSK-3βsiRNA组Brdu掺入率降低,流式细胞仪检测发现S期细胞数比例减少,细胞凋亡率增加,Western blot结果也显示凋亡相关蛋白caspase-3表达上调,细胞增殖力下降;Transwell侵袭试验中穿过滤膜细胞数减少,明胶酶谱结果显示明胶酶-A(MMP-2)活性减弱,细胞侵袭力下降。但是,转染GSK-3βsiRNA后各实验组间KLE细胞的增殖情况和侵袭能力无明显改变。 孕激素及AKT信号通路对GSK-3β表达的调控 Ishikawa细胞转染AKT siRNA后,AKT mRNA和蛋白表达均低于对照组,说明小干扰RNA能够有效抑制AKT表达;Western blot结果显示pGSK-3β~(Tyr216)蛋白表达上调;流式细胞仪检测结果发现S期细胞数比例减少、细胞凋亡率增加,Western blot结果也显示pCyclinD1~(Thr286)和pCaspase-8~(Thr62)蛋白表达上调。 10~(-8)mol/L MPA作用48h后,Western blot结果显示AKT和pGSK-3β~(Tyr216)蛋白表达下调,同时MTT实验中细胞存活率降低,明胶酶谱检测MMP-2、MMP-9活性下降。10~(-6)mol/L MPA作用48h后,Western blot结果显示AKT蛋白表达下调,但pGSK-3β~(Tyr216)蛋白表达不变,MTT结果显示细胞存活率与对照组相比无统计学差异;明胶酶谱检测MMP-2、MMP-9活性增加。 结论: GSK-3β蛋白在子宫内膜样腺癌中高表达,且与手术病理分期、组织分级相关、与细胞分化程度相关。pGSK-3β~(Tyr216)可促进高、中分化的子宫内膜样腺癌细胞的增殖和侵袭,对低分化的内膜样腺癌细胞的增殖和侵袭则无明显影响。在高分化子宫内膜样腺癌细胞Ishikawa中,AKT可抑制GSK-3β活性,低浓度的MPA抑制AKT和GSK-3β表达,抑制细胞增殖和侵袭;而高浓度MPA也能抑制AKT表达,但对GSK-3β表达和细胞增殖无明显影响,反而促进细胞侵袭。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R737.33

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 关婷;谭同焕;;子宫内膜样腺癌组织中OPN的表达及临床意义[J];实用预防医学;2011年06期
2 康谊;;子宫内膜样腺癌27例临床病理分析[J];中国煤炭工业医学杂志;2011年07期
3 王骅;张玉仙;;雌孕激素序贯疗法治疗青春期功血的临床分析[J];现代医药卫生;2011年17期
4 梁静;张贵宇;马本红;秦绪颖;李越;赵萌;;子宫内膜样腺癌组织中microRNA差异表达谱分析[J];山东大学学报(医学版);2011年08期
5 贾黎明;赵梦琳;谭丽;项云改;;术后腹壁瘢痕子宫内膜异位症36例分析[J];医药论坛杂志;2011年08期
6 赵文斌;;Culiin1和p53在子宫浆液性腺癌和高级别子宫内膜样腺癌中的表达及其意义[J];中国现代医生;2011年11期
7 李玉梅;黄燕奎;邬丽华;陈业芳;;米非司酮治疗子宫肌瘤52例临床疗效观察[J];现代医药卫生;2011年16期
8 赵蕾;丁岩;;宫腔镜联合孕激素治疗子宫内膜非典型增生的效果观察[J];中国妇产科临床杂志;2011年05期
9 黄媛;陈秋菊;孙兆贵;张健;孙晓溪;;孕激素对人子宫内膜间质细胞moesin表达的影响[J];生殖与避孕;2011年07期
10 朱丹;潘颖;柴新燕;李妞妞;王铁延;;Maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义[J];中国老年学杂志;2011年17期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 马秀敏;郭影;尤红煜;庞义存;;雌激素加间断孕激素对去卵巢大鼠子宫的影响[A];全国老年骨质疏松专题学术研讨会论文汇编[C];2000年
2 李尚为;靳松;龙江;谭宗建;李蕾;;类胰岛素样生长因子结合蛋白在入孕早期子宫内膜中的表达及其与孕激素的关系[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年
3 李尚为;李蕾;靳松;龙江;曹泽毅;彭芝兰;韩字研;;孕激素调控人早孕蜕膜胰岛素样生长因子-Ⅰ受体蛋白及基因表达[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
4 童琼;熊承良;;皮下埋植避孕的研究现状[A];湘鄂赣首届性与生殖健康学术研讨会论文汇编[C];2007年
5 袁开明;李军;曹红;连庆泉;;孕激素与神经保护及阿尔茨海默病相关研究进展[A];2009年浙江省麻醉学学术会议论文汇编[C];2009年
6 陆叶;廖秦平;;子宫内膜癌孕激素受体亚型A优势表达细胞模型的初步建立[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
7 杨清;王玉;;孕激素对子宫内膜癌细胞中ERK/cyclinD1通路的非基因作用[A];中华医学会第九次全国妇科肿瘤学术会议论文汇编[C];2006年
8 张晓金;归绥琪;邹琴娣;孙祖越;;补肾方对流产大鼠胎盘胰岛素样生长因子介导孕激素生成的影响[A];全国第八次中医妇科学术研讨会论文汇编[C];2008年
9 王自能;黄丹;郑佩娥;;人子宫内膜核仁管道系统形成与孕激素无关[A];第十二届全国电子显微学会议论文集[C];2002年
10 胡宝明;叶京英;丁秀;张玉焕;王江泳;;女性睡眠呼吸紊乱患者相关因素的分析及孕激素作用的研究[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编(上)[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 肖黄;乳腺癌与孕激素有关[N];中国医药报;2000年
2 蒲昭和;合用雌激素和孕激素增加患乳腺癌危险[N];中国医药报;2002年
3 李天舒;我国血清孕激素计量能力比肩国际[N];健康报;2007年
4 ;绝经妇女用雌激素加孕激素有风险[N];中国高新技术产业导报;2002年
5 戴文;后定诺适用于多种情况[N];医药经济报;2004年
6 高新军;新型孕激素屈螺酮能有效避孕[N];中国中医药报;2008年
7 李雨林;孕激素不能阻止子宫肌瘤生长[N];大众卫生报;2006年
8 王乐民;复合雌-孕激素疗法列入致癌目录[N];健康报;2006年
9 ;功能失调性子宫出血的止血治疗[N];农村医药报(汉);2006年
10 大桦;持续雌/孕激素联合替代治疗可减少患子宫内膜癌的危险[N];中国高新技术产业导报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵明智;糖原合成酶激酶-3β在子宫内膜样腺癌中的表达及孕激素对其调节作用[D];复旦大学;2008年
2 熊艳;几种肿瘤性标志物在子宫内膜样腺癌发生过程中的作用探讨[D];武汉大学;2010年
3 彭丽秀;激素受体与子宫内膜样腺癌发病的分子机制研究[D];中南大学;2009年
4 曾琪;子宫内膜容受性信号途径中NFκB作用的研究[D];复旦大学;2004年
5 穆琳;粘附斑激酶在子宫内膜异位症中的作用及调节机制的研究[D];浙江大学;2008年
6 尚美生;性激素对兔血管平滑肌细胞AT_1受体基因表达的作用及机制分析[D];山西医科大学;2004年
7 曹琦;糖原合酶激酶-3β对卵巢癌细胞增殖和化疗敏感性的影响及雌、孕激素对其调节作用[D];复旦大学;2006年
8 吴迪;猪HOXA10基因的表达调控研究及激素诱导型启动子转基因小鼠与猪的制备与鉴定[D];华中农业大学;2012年
9 王金桃;雌孕激素与HPV在宫颈癌发生中的交互作用及相关因素研究[D];复旦大学;2004年
10 潘晓玉;Claudin-3和claudin-4在子宫内膜恶性转化中的意义[D];山东大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高琨;雌、孕激素对卵巢癌细胞株体外生长的影响及其机制研究[D];广西医科大学;2001年
2 马艳华;人子宫内膜上皮胞饮突在自然月经周期与控制性超促排卵周期的表达及与雌激素受体、孕激素受体表达的关系[D];第一军医大学;2002年
3 谢娟;电针对乳腺增生病性激素水平影响的临床及实验观察[D];广州中医药大学;2006年
4 马会清;孕激素对不同类型子宫内膜增生过长MMP-9、TIMP-1表达影响的研究[D];青岛大学;2005年
5 张萍;HRT对围绝经期骨代谢的影响及其机理探讨[D];第一军医大学;2001年
6 张巍;更年期妇女抑郁症状与血清孕激素、叶酸、五羟色胺的相关性研究[D];吉林大学;2005年
7 孙义锡;孕激素、microRNA及IRAK1对单核巨噬细胞Toll样受体信号转导调控研究[D];浙江大学;2011年
8 秦华民;孕激素对人子宫内膜上皮细胞FUT7/sLe~x表达调控作用的研究[D];大连医科大学;2006年
9 姜华;外源性雌孕激素对人子宫内膜异位症裸鼠模型早期病灶中MMP_1、TIMP_1表达的影响[D];青岛大学;2007年
10 吴庆儒;雌激素和孕激素对体外培养奶牛破骨细胞增殖分化的影响[D];华中农业大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026