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《复旦大学》 2008年
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超临界CO_2流体技术制备纳豆激酶口服制剂的研究

马晓文  
【摘要】: 本实验室前期针对NK蛋白质的结构特点和特殊的理化性质,克隆了NK的全长基因,构建了大肠杆菌/枯草杆菌穿梭表达质粒,实现了在枯草杆菌中的高效表达,开发研制了基因重组表达的纳豆激酶蛋白。 作为具有活性的生物大分子药物,纳豆激酶直接口服生物利用度不高。纳豆激酶在pH6~12、50℃以下时均较稳定;具有抗胃蛋白酶及胰蛋白酶性能,但对酸性环境敏感;因此要提高纳豆激酶口服后的生物利用度,最重要的是防止胃酸环境的破坏,促进纳豆激酶在十二指肠后段肠腔中的吸收。本课题利用超临界CO_2流体技术以pH敏感的肠溶材料Eudragit(?) L100-55对纳豆激酶的载药微丸进行包衣。 主要研究: 1.优化纳豆激酶的摇瓶发酵表达及纯化; 2.建立以超临界CO_2流体技术制备纳豆激酶肠溶微丸的工艺; 3.模拟胃肠环境下评价微丸中药物活性、含量的方法; 4.对纳豆激酶特殊口服制剂进行初步的药理学、药效学研究。 我们选择超临界CO_2流体作为反应体系,在乙醇作为助溶剂,增塑剂柠檬酸三乙酯和抗粘剂滑石粉存在的条件下,以pH敏感的肠溶材料Eudragit(?)L100-55对纳豆激酶的载药微丸进行包衣。在制备工艺研究中,根据预实验,包衣工艺受多种因素影响,主要有温度、压力、包衣材料和载药微丸比例、搅拌棒转速、助溶剂乙醇、抗粘剂滑石粉和增塑剂柠檬酸三乙酯的用量和配比以及反应时间等。为保证试验精度,对一些影响因素较小、易确立的实验条件,如反应温度、搅拌棒转速、增塑剂柠檬酸三乙酯的应用等采用单因素法确定,对影响因素较大的处方工艺条件如反应压力、包衣材料和载药微丸比例、助溶剂乙醇和抗粘剂滑石粉的配比4个可变因素进行正交设计,确定最佳条件,考察指标为微丸的平均粒径。 结果显示最适反应条件为:包衣材料和载药微丸质量比为1:2,反应压力和温度分别为20MPa、35℃,增塑剂柠檬酸三乙酯及助溶剂乙醇均为10%(v/m),抗粘剂滑石粉虽对包衣反应稍有影响,但能显著改善微丸粘连问题。 体外实验结果表明肠溶微丸在人工胃酸(pH1.2)环境中2h仅释放9.7%,并能保持近90%的活性状态;在pH6.8的模拟肠液释放介质中2h内快速释放达75%。以超临界CO_2流体技术制备的纳豆激酶口服肠溶包衣微丸,在人工胃酸环境中几乎不释药,可避免胃酸环境对纳豆激酶活性的破坏;在pH6.8的类肠液环境中药物释放快速而完全,有利于纳豆激酶在肠道中的吸收。 以大鼠和大白兔对纳豆激酶特殊口服制剂做初步的药理、药效学研究,经口腔灌胃纳豆激酶特殊肠溶制剂后,考察对APTT、PT、TT、FIB和FDP指标的影响。结果显示口服大剂量纳豆激酶制剂后,两种动物PT值均明显延长,Fib含量降低。显示肠溶制剂显著提高了纳豆激酶的口服生物利用度,表现出了明显的生物学指标变化。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R94

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王正刚,丁贵平,蔡正森;纳豆激酶的发酵工艺研究[J];氨基酸和生物资源;2001年02期
2 谢秋玲,郭勇;纳豆激酶液体发酵条件的优化[J];华南理工大学学报(自然科学版);1999年05期
3 熊迎新;尹宗宁;杨超;;纳豆激酶的发酵工艺及其制剂学研究[J];华西药学杂志;2005年06期
4 董明盛,江晓,江汉湖,陈伯祥;溶栓纳豆菌的筛选鉴定及其发酵特性研究[J];南京农业大学学报;2001年01期
5 傅俐,李荣萍,李晶,张淑梅,张云湖,赵晓祥,杨志兴;一株具有纤溶活性的枯草杆菌(Bacillus Subtilis)的研究——液体发酵条件的选择[J];生物工程进展;1997年03期
6 刘宇峰,王金英,孙岸弢,王占斌,杨洪波;纳豆激酶制剂——恩开胶囊的生产工艺中试研究[J];生物技术;2000年02期
7 鲍艳霞,倪孟祥,钱之玉,陈钧,王萍;纳豆激酶摇床发酵条件的优化[J];药物生物技术;2005年01期
8 鲍时翔,田艳,黄惠琴,凌华,吕家森;纳豆菌液体发酵生产纳豆激酶的研究[J];药物生物技术;2002年06期
9 梅乐和,胡升,许静,姚善泾,郑晓冬;纳豆枯草杆菌的筛选和纳豆激酶发酵条件优化[J];浙江大学学报(工学版);2004年10期
10 谢秋玲,郭勇,凌均建;产纳豆激酶之菌种的分离与培养[J];中南林学院学报;1999年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王正刚,丁贵平,蔡正森;纳豆激酶的发酵工艺研究[J];氨基酸和生物资源;2001年02期
2 丁贵平,蔡正森,王正刚;纳豆激酶的分离纯化及生化研究[J];氨基酸和生物资源;2001年03期
3 鲍艳霞,陈钧,王萍;影响纳豆激酶酶促反应速度因素的研究[J];氨基酸和生物资源;2004年03期
4 江晓,董明盛,江汉湖,陈伯祥;产溶栓酶纳豆菌的筛选及特性的研究[J];安徽农业技术师范学院学报;2000年02期
5 王峰;李术娜;朱宝成;武翠红;袁洪水;;W-15菌株产生的纤溶酶蛋白的提取与纯化[J];河北农业大学学报;2007年01期
6 鲍艳霞,钱之玉,陈钧,倪孟祥,王萍;豆渣固体发酵产纳豆激酶的工艺优化及其部分酶学性质研究[J];大豆科学;2005年01期
7 薄金岭;纳豆激酶高产菌株的筛选及发酵条件的优化[J];大豆通报;2004年02期
8 张玉晶,张苓花,叶云生,王运吉;重组纳豆激酶工程酵母菌发酵研究[J];大连轻工业学院学报;2004年02期
9 郎亚军,隋海澜,于育玲,张苓花;纳豆枯草杆菌的分离鉴定及发酵条件优化[J];大连轻工业学院学报;2005年01期
10 黄志立,罗立新,凌均建,杨汝德,梁世中;纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];广东药学院学报;2000年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙婕;刘宁;;纳豆的保健功效与人类健康[A];食物功效成分与健康——达能营养中心第九次学术年会会议论文集[C];2006年
2 高秀娟;张世轩;;PLGA微球注射剂的研究进展[A];大连理工大学生物医学工程学术论文集(第2卷)[C];2005年
3 丁有学;刘兰;;纳豆激酶研究进展[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
4 刘辉;潘卫三;汤韧;;超临界流体技术及其在药物制剂中的应用[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
5 董英;张菊芬;张红印;;响应面法优化宇佐美曲霉产菊粉酶发酵条件[A];农业机械化与新农村建设——中国农业机械学会2006年学术年会论文集(下册)[C];2006年
6 杨艳燕;李顺意;高尚;闫达中;陈勇;;豆豉纤溶活性物—纳豆激酶的分离分析[A];中医药现代化研究学术大会论文集[C];2001年
7 高大海;梅乐和;林东强;姚善泾;;纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的研究[A];首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集[C];2004年
8 梅乐和;胡升;许静;姚善泾;郑晓冬;;纳豆枯草杆菌的筛选和纳豆激酶发酵条件优化[A];首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集[C];2004年
9 Tatsumi Eizo;Yamaki Koji;;Acetylcholinesterase Inhibitory Activities of Douchi, a Traditional Chinese Food[A];都市农业工程科技创新与发展——2005北京都市农业工程科技创新与发展国际学术研讨会论文集(Ⅰ)[C];2005年
10 ;益生菌研究进展及在食品工业中的应用[A];第十一届中国国际食品添加剂和配料展览会学术论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋斌波;超临界流体技术制备无载体茂金属催化剂微粒的研究[D];浙江大学;2001年
2 彭勇;豆豉溶栓酶的纯化及其基因的克隆与表达研究[D];四川大学;2002年
3 雷引林;球形纤维素/钛白粉复合扩张床吸附剂的制备及其在蛋白质纯化中的应用[D];浙江大学;2003年
4 张立央;SA/CS-CaCl_2/PMCG微胶囊及其固定化微生物细胞的培养[D];浙江大学;2003年
5 刘晓兰;根霉纤溶酶发酵、纯化和酶学性质研究[D];天津科技大学;2004年
6 高柱虎;两种新型多功能纤溶酶的鉴定及其分子生物学特性研究[D];武汉大学;2004年
7 陆瑾;温度诱导双水相金属螯合亲和分配技术的研究[D];浙江大学;2004年
8 冮洁;基因工程菌株里氏木霉合成t-PA发酵条件及r-PA基因在甲醇毕赤酵母中表达的研究[D];天津科技大学;2005年
9 刘东;根霉纤溶酶发酵过程优化及其溶栓作用的试验研究[D];天津科技大学;2005年
10 肖璐;溶栓酶基因的克隆及表达[D];四川大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 梁思宇;枯草杆菌溶纤酶高产菌株的选育及发酵条件的优化[D];南京农业大学;2000年
2 刘诚;纳豆激酶液体发酵条件及其酶学稳定性研究[D];南京农业大学;2000年
3 田艳;纳豆菌液体发酵产生纤溶酶的研究[D];华南热带农业大学;2001年
4 杜木英;毛霉型豆豉生物速成发酵技术的研究[D];西南农业大学;2001年
5 王光利;芽孢杆菌纤溶酶的纯化、性质及其发酵条件的研究[D];西南农业大学;2001年
6 张勇;离子诱变选育纤溶酶(Plasmin)高产菌以及部分酶学性质研究[D];四川大学;2002年
7 章小忠;纤维素硫酸钠制备工艺的放大和产纳豆激酶枯草杆菌微胶囊培养研究[D];浙江大学;2003年
8 胡升;新型溶栓酶——纳豆激酶的基础研究[D];浙江大学;2003年
9 倪剑锋;BN137菌株发酵产纳豆激酶的条件及酶的分离纯化、理化性质的研究[D];沈阳药科大学;2002年
10 温晓明;溶血栓作用的纳豆激酶基因导入莴苣植株的研究[D];广西大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 王正刚,丁贵平,蔡正森;纳豆激酶的发酵工艺研究[J];氨基酸和生物资源;2001年02期
2 谢秋玲,郭勇;纳豆激酶液体发酵条件的优化[J];华南理工大学学报(自然科学版);1999年05期
3 王正刚,丁贵平,蔡正森;纳豆激酶的研究进展[J];中国生化药物杂志;1998年06期
4 熊迎新,尹宗宁,李婉宜;纳豆激酶固体浅盘发酵工艺的优化[J];中国生化药物杂志;2005年01期
5 傅俐,李荣萍,李晶,张淑梅,张云湖,赵晓祥,杨志兴;一株具有纤溶活性的枯草杆菌(Bacillus Subtilis)的研究——液体发酵条件的选择[J];生物工程进展;1997年03期
6 谢秋玲,郭勇,林剑;纳豆激酶活性测定方法[J];广东药学;2000年06期
7 唐绍庆 ,韦世秀 ,汤圣希;蛇毒纤维蛋白溶解酶活力的试管定量测定法[J];中国药理学与毒理学杂志;1987年04期
8 鲍时翔,田艳,黄惠琴,凌华,吕家森;纳豆菌液体发酵生产纳豆激酶的研究[J];药物生物技术;2002年06期
9 李晶;王玉霞;王佳龙;张淑梅;赵晓宇;;纳豆激酶活性测定方法的比较[J];黑龙江医药;2003年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 凌均建,罗立新,杨汝德;纳豆激酶的分子生物学研究进展[J];广东药学院学报;1999年04期
2 金文;;日本纳豆激酶协会倡导——常吃纳豆激酶有助于预防血栓[J];临床合理用药杂志;2011年17期
3 徐涛,宋文延;一种新型纤溶活性物质——纳豆激酶[J];中国生化药物杂志;1995年04期
4 王萍,陈钧;纳豆激酶纤溶活性研究[J];江西农业大学学报(自然科学版);2004年03期
5 鲍艳霞,倪孟祥,钱之玉,陈钧,王萍;纳豆激酶摇床发酵条件的优化[J];药物生物技术;2005年01期
6 刘北域,宋后燕;纳豆激酶的研究进展[J];药物生物技术;1998年04期
7 江晓,董明盛;纳豆、纳豆激酶与人体保健[J];中国酿造;2001年04期
8 王俊菊,李培锋,关红;纳豆激酶抗凝血作用的研究[J];中国生化药物杂志;2004年05期
9 段智变,江汉湖,张书霞,江晓,董名盛,赵晓燕;纳豆激酶粗制液对家兔溶血栓作用及其机制研究[J];营养学报;2003年01期
10 袁淑云;纳豆激酶粗提液对小鼠实验性高脂血症的降脂作用[J];现代医院;2005年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 何彬彬;柴同杰;;纳豆激酶的功能及研究进展[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(上册)[C];2008年
2 丁有学;刘兰;;纳豆激酶研究进展[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
3 王正刚;丁贵干;蔡正森;;纳豆激酶的溶栓作用研究[A];全国中西医结合周围血管疾病学术研讨会论文选编[C];2001年
4 伍树明;钟瑾;还连栋;;纳豆激酶S3位点的定点突变及突变体的分析[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
5 柴燚;温源;梅乐和;姚善泾;;中空CMC-ALG微胶囊的制备、性质和固定化发酵纳豆激酶的研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
6 高大海;梅乐和;林东强;姚善泾;;纳豆激酶的分离纯化及酶学性质研究[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
7 杨艳燕;李顺意;高尚;闫达中;陈勇;;豆豉纤溶活性物—纳豆激酶的分离分析[A];中医药现代化研究学术大会论文集[C];2001年
8 高大海;梅乐和;林东强;姚善泾;;纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的研究[A];首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集[C];2004年
9 刘俊果;邢建民;马志亚;阳承利;刘会洲;;反胶团分离纯化纳豆激酶:从模拟体系到实际体系[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
10 杨艳燕;李晓翔;熊少伶;张静;;豆豉纳豆激酶基因的高效表达研究[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李木子;纳豆不等于纳豆激酶 说纳豆溶血栓是张冠李戴[N];粮油市场报;2011年
2 记者何德功;纳豆激酶可溶化血栓[N];人民日报;2003年
3 徐铮奎;纳豆激酶陷信任危机 行业亟待规范自律[N];中国医药报;2010年
4 济南大学 张炳文;为了健康吃豆豉吧[N];科技日报;2003年
5 黄世涛;纳豆食品可调理人体生理机能[N];消费日报;2008年
6 钟可芬;赢销创新:润都民彤成长加速度[N];医药经济报;2008年
7 刘永坤;台湾生物科技产业闪烁科技之光[N];中国企业报;2010年
8 汪洋 本报记者 施渊;打造中国消费者最信赖的日本保健食品[N];中国食品质量报;2010年
9 张洪军;餐餐吃豆易“受伤”[N];中国医药报;2006年
10 ;药物经济学:医保关注的领域[N];中国劳动保障报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 冷静;三七通舒肠溶微丸(胶囊型)的研究[D];成都中医药大学;2009年
2 刘朔;纳豆激酶基因密码子优化设计与合成及在毕赤酵母中的高效表达[D];南京农业大学;2007年
3 郑忠亮;纳豆激酶结构与功能的研究[D];武汉大学;2005年
4 谢秋玲;纳豆激酶液体发酵的条件优化及其调控的研究[D];华南理工大学;1999年
5 朱立成;纳豆激酶和hGM-CSF在家蚕杆状病毒表达系统中表达纯化及活性研究[D];浙江大学;2005年
6 吕淼华;固体生物质对扩张床吸附的影响和方法研究[D];浙江大学;2005年
7 雷引林;球形纤维素/钛白粉复合扩张床吸附剂的制备及其在蛋白质纯化中的应用[D];浙江大学;2003年
8 陆瑾;温度诱导双水相金属螯合亲和分配技术的研究[D];浙江大学;2004年
9 赖玲;三七总皂苷口服肠溶制剂的研究[D];广西医科大学;2011年
10 贾焱;纳豆激酶分子内分子伴侣的研究[D];武汉大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 马晓文;超临界CO_2流体技术制备纳豆激酶口服制剂的研究[D];复旦大学;2008年
2 陈景鑫;纳豆激酶微胶囊的制备及其稳定性研究[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
3 霍金柱;高效纳豆激酶菌株的筛选及纳豆生产[D];重庆师范大学;2011年
4 梁爽;纳豆激酶肠溶胶囊的制备及其抗血栓作用的研究[D];吉林大学;2011年
5 黎婉园;纳豆激酶液体发酵的研究[D];华南理工大学;2011年
6 王建;纳豆激酶的发酵、纯化条件的优化及开发应用[D];陕西科技大学;2012年
7 李妍;产纳豆激酶细菌的筛选及酶学性质的研究[D];山东农业大学;2012年
8 路龙女;纳豆固体发酵和纳豆激酶的催化特性[D];安徽农业大学;2011年
9 李莹;纳豆激酶的基因工程制备[D];重庆师范大学;2010年
10 李会荣;纳豆激酶的优化、提取分离纯化及基因克隆[D];河北联合大学;2011年
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