收藏本站
《复旦大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

荧光脂质体技术研究天然产物的生物膜通透性

邓丹丹  
【摘要】: 天然产物是一类非常重要的药学活性成分,2001-2005年间,有23种治疗细菌、真菌感染、癌症、糖尿病、高血脂、皮炎、Alzheimer's症等疾病的天然产物药物面世。从天然产物中分离单体并衍生化是获得新药的重要手段之一。全世界每年有数以千计新的单体从天然产物中分离出来,又有更大量的衍生物被合成出来。要从浩如烟海的天然产物中选出适合的先导药物,快速准确的高通量筛选至关重要。 常规的筛选方法,如动物筛选法、细胞筛选法、受体筛选法、酶筛选法等实验周期较长、对实验设备有较高要求,应用于天然产物的快速、高通量筛选有一定的局限性。 本文构建了一种高通量筛选天然产物的荧光脂质体模型。模型筛选原理如下:药物的生物膜通透性与其活性密切相关,用脂质体模拟生物膜,通过测定药物对包封在脂质体内的荧光探针的荧光淬灭来评价药物的生物膜通透性,根据药物生物膜通透性的大小来筛选药物。 本文主要进行了以下几方面的研究工作: 1建立了适用于评价天然产物生物膜通透性的荧光脂质体模型 从研究药物在生物膜中的通透性角度进行药物活性成分的筛选,是近年来药物筛选研究的新热点。本课题从天然产物被动扩散进入生物膜能力的角度,构建了具有创新意义的天然产物生物膜通透性测定模型。我们建立了能够模拟生物膜的荧光脂质体,用以评价天然产物的生物膜通透性,具体包括: (1)选用三种合适的荧光试剂,DPH、TMA-DPH和NBD,分别位于脂质体的脂双层内部、中部和最外部。当药物进入脂质体的不同部位时会使位于该部位的荧光探针荧光强度变化,由此评价天然产物的生物膜通透性。 (2)使用多种材料制备脂质体,从脂质体电位、粒径、荧光强度、数据重现性等方面考察脂质体稳定性,发现DSPG能增强脂质体稳定性,而胆固醇对脂质体的稳定性没有贡献,最终确定了荧光脂质体的最佳组成为DSPG:PC 0.1:1(mol/mol)。所制备的荧光脂质体稳定性好、荧光试剂不易泄漏、试验数据重现性好。 2测定了多种天然产物对荧光脂质体模型的荧光影响 (1)考察了天然产物与荧光脂质体的作用时间,发现两者混匀10 min后荧光强度稳定,因此在以后的实验中选择10 min为反应时间。考察了2μM、4μM、8μM、12μM、16μM浓度的药物对脂质体荧光的影响,发现4μM药物对脂质体荧光有显著影响,荧光灵敏度较高、信号较稳定,所消耗样品量少,确定4μM为最佳药物浓度。 (2)选用了35种结构不同、药理活性不同的天然产物,测定它们对荧光脂质体荧光的影响。亲脂性好的药物对脂质体荧光淬灭较大,亲水性好的药物对脂质体荧光淬灭较小。 (3)测定天然产物对荧光脂质体荧光偏振度的影响,发现天然产物会导致脂质体的荧光偏振度上升,脂质体膜流动性减小,并且随着天然产物浓度的增加膜流动性逐渐减小,说明天然产物进入了脂质体膜相中,降低了膜相的流动性。 (4)测定天然产物对游离荧光探针DPH-TMA、NBD的影响,发现要极高浓度的天然产物才能使游离的荧光探针产生荧光淬灭,说明天然产物对荧光脂质体的荧光淬灭是由于天然产物进入了脂质体中,在荧光探针附近富集到了较高浓度而产生的。 (5)考察了药物对CF脂质体荧光的影响,结果药物对CF脂质体的荧光没有明显改变,表明药物没有破坏脂质体结构。 3测定了多种天然产物对荧光红细胞膜的荧光影响 (1)用荧光探针DPH和DPH-TMA标记大鼠红细胞膜,得到荧光红细胞膜。 (2)测定天然产物对荧光红细胞膜的荧光影响,亲脂性好的天然产物对红细胞膜荧光淬灭较大,亲水性好的天然产物对红细胞膜荧光淬灭较小。 (3)比较天然产物对脂质体和红细胞膜荧光的影响,发现两者有较好的相关性,对脂质体荧光淬灭大的天然产物对红细胞膜的荧光淬灭也较大,对脂质体荧光淬灭小的天然产物对红细胞膜的荧光淬灭也较小。在2μM-16μM的浓度范围内,天然产物对脂质体与红细胞膜的荧光淬灭百分率成线性相关,相关性良好。表明脂质体模型可以在一定程度上替代细胞膜,研究天然产物对生物膜的通透性。 4测定了多种天然产物的Caco-2细胞表观渗透系数和大鼠小肠吸收系数 (1)测定多种天然产物的Caco-2细胞表观渗透系数P_(app),P_(app)与天然产物对红细胞膜和脂质体的荧光淬灭百分率线性相关,相关性都较好。 (2)测定多种天然产物的大鼠小肠有效吸收系数P_(eff),P_(eff)与天然产物对红细胞膜和脂质体的荧光淬灭百分率线性相关,相关性都较好。 被动吸收是多数药物的主要吸收方式,被动吸收与药物的生物膜通透性相关,因此药物的吸收与其生物膜通透性相关。荧光脂质体模型可以评价药物的生物膜通透性,理论上也可以评价药物的吸收程度。实验证明,荧光红细胞膜与荧光脂质体模型与药物吸收相关性良好,表明荧光仿生膜可以评价天然产物的吸收。 5测定了多种天然产物与白蛋白的结合程度以及结合机理 (1)血清白蛋白与药物结合后血液中游离药物会减少,到达靶部位发挥药效的药物量会相应减少,我们首次用荧光脂质体模型来研究药物与白蛋白的结合程度,研究靶细胞与白蛋白对天然产物的竞争结合。 (2)蛋白质是生物体内具有重要生理功能的大分子,是药物发挥药效的重要载体和靶分子,我们用荧光法初步研究了天然产物与白蛋白作用的一些机理,对于了解药物发挥药效的作用机制,揭示药物药效的实质内涵具有重要意义。结果实验中所用的天然产物通过疏水作用力、静电引力或氢键、范德华力等结合力自发与白蛋白结合,静态淬灭白蛋白内源性荧光。 综合而言,荧光脂质体模型操作简便、对实验条件要求不高,可以在实验室中推广使用。荧光脂质体模型与荧光红细胞膜模型相关性好、与Caco-2细胞模型和大鼠小肠吸收模型相关性好,可以在一定程度上替代这几种模型研究天然产物的生物膜通透性和吸收系数。荧光脂质体模型测定快速、准确、重现性好、所用样品量少,非常适合在天然产物筛选的早期高通量筛选候选药物。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R965.1

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 牛真真;电化学法研究硫酸多粘菌素B与磷脂的相互作用[D];郑州大学;2011年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 程丽静;温筱煦;刘蔚;孙玲;冯端浩;;葛根水提取物对小鼠红细胞膜脂流动性和血常规的影响[J];解放军药学学报;2006年02期
2 陈立敏;吕秋军;温利青;陈媛媛;陈振花;谢洁琼;张敏;曹颖林;;葛根素对谷氨酸所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用[J];中国药理学通报;2006年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 贾淑琴;高分子材料在医药制剂中的应用[J];工程塑料应用;2000年06期
2 徐济恒;马凤余;周亚球;;缓释片剂的研究概况[J];安徽化工;2011年01期
3 韩越;;速释型药物分散片研究进展[J];中医药临床杂志;2006年04期
4 花永刚,王静;薄荷脑等透皮促进剂对泰必利体外释放的影响[J];安徽医药;2002年04期
5 唐丽琴,刘圣,陈礼明,陈象青,田莉;复方番泻叶微丸赋形剂的选择[J];安徽医药;2002年04期
6 仇多山;银翘彩丸生产工艺的研究[J];安徽医药;2002年04期
7 程民;;羟丙基β-环糊精对伏立康唑增溶作用的研究[J];安徽医药;2007年03期
8 吴进;李志浩;李鹏;郑芳;;RP-HPLC法测定藁本内酯脂质体的体外释放度[J];安徽医药;2010年06期
9 桂双英;温志强;彭代银;开伟华;;汉防己甲素脂质体包封率的测定[J];安徽中医学院学报;2009年05期
10 侯芳洁;宋军娜;;环糊精包合技术及其在中药药剂中的应用[J];北方药学;2011年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 程冀;季宇彬;王向涛;;脂质体载药方法的研究进展[A];中药饮片质量分析与中药鉴别技术交流研讨会论文集[C];2009年
2 王华明;王江;曹阳;;淀粉微球的制备和应用[A];2009中国功能材料科技与产业高层论坛论文集[C];2009年
3 田景振;张玉娟;;脂质体的研究进展[A];脂质体及紫杉醇脂质体学术论文集[C];2005年
4 田京辉;徐建斌;王玮;钱佩佩;曹凯;李晓曼;;吡拉西坦体外透膜释放的研究[A];中国成人医药教育论坛[2010(3)][C];2010年
5 程铁峰;凌春生;司端运;刘昌孝;;纳米药物与肿瘤靶向治疗[A];中国成人医药教育论坛[2010(3)][C];2010年
6 杨清敏;邓树海;唐玮;;肺靶向多西他赛聚乳酸微球的制备及体外释药的研究[A];第十二届山东省药剂学术会议论文集[C];2006年
7 刘春英;;SLB脂质纳米粒小鼠体内外相关性研究[A];2008年度山东省药学会药物化学与抗生素专业委员会年会会议论文及大会报告摘要[C];2008年
8 伍丽萍;贺林;叶利明;;定量保留―活性关系体外预测模型的研究[A];四川省药学会第七次全省会员代表大会暨学术年会论文集[C];2011年
9 沈圆圆;邱利焱;金一;;洛莫司汀脂质体的研制及其质量评价[A];“以岭医药杯”第八届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集[C];2006年
10 王洪亮;汪仁芸;刘玉玲;;胸腺五肽长效微球玻璃化温度测定及释放度加速试验方法的研究[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张雪琼;羧甲基壳聚糖智能释药肝靶向纳米传递系统的构建与评价[D];武汉理工大学;2010年
2 孙明辉;西罗莫司自微乳化释药系统的研究[D];华中科技大学;2011年
3 段菁华;姜黄素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒抗癌活性及逆转多药耐药研究[D];中南大学;2011年
4 庄宝雄;奥沙利铂脂质体的生物学研究[D];中南大学;2011年
5 迟春萍;人铜锌超氧化物歧化酶在毕赤酵母中高表达及其中试工艺研究[D];吉林农业大学;2011年
6 彭博;盐酸阿霉素离子交换型羧甲基壳聚糖磁定位微粒制剂的研究[D];沈阳药科大学;2011年
7 张婵;叶酸靶向羟基丁酸与羟基辛酸共聚物载药纳米粒缓释给药系统的研究[D];山西大学;2011年
8 杨明;肝苏缓释制剂的研究[D];成都中医药大学;2001年
9 赵建华;反义c-myc寡核苷酸提高膀胱癌细胞对MMC的敏感性和c-myc癌基因蛋白在膀胱移行细胞癌表达的临床意义[D];第四军医大学;2002年
10 查刘生;热响应性水凝胶纳米粒子和可生物降解聚合物纳米粒子的合成、表征与初步应用[D];复旦大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵红玲;液态奶评价方法及其体系稳定性影响的研究[D];山东农业大学;2010年
2 姜宇;秦皮甲素口服吸收特性及其药物动力学研究[D];湖南中医药大学;2010年
3 龙玉堂;瑞兴腰痛微丸制备工艺与质量标准的研究[D];湖南中医药大学;2010年
4 杨大伟;醋酸纤维素水分散体的制备方法研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
5 王帆;抗口腔溃疡炎膜剂的制备工艺及质量标准研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
6 陈香;灵芝酸单体T片剂的制备及其药动学研究[D];华东理工大学;2011年
7 姚文军;树枝状高聚物聚酰胺—胺—葛根素复合物的制备及其对角膜影响研究[D];烟台大学;2010年
8 刘毅;PAMAM包覆葛根素脂质体眼部释药系统的构建及初步评价[D];烟台大学;2010年
9 郑翠芳;硅壳/聚合物纳米颗粒制备与载药研究[D];武汉理工大学;2010年
10 邹新城;艾叶挥发油-β环糊精包合物的制备及其稳定性的研究[D];湖南农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵艳,方炎;双层类脂膜成膜过程的电化学方法研究[J];电化学;2004年01期
2 程志亮,杨秀荣;电化学交流阻抗技术表征自组装多层膜[J];分析化学;2001年01期
3 李爱学;崔小强;杨帆;杨秀荣;;F-肌动蛋白与负电荷磷脂膜的相互作用研究[J];分析化学;2009年01期
4 高宏,罗国安;双层磷脂膜的电化学性质及其在生物传感器中的应用[J];分析科学学报;2002年01期
5 李俊新,崔晓丽,童汝亭;金上硫醇自组装膜研究进展[J];河北师范大学学报;2000年02期
6 阮北,鲁彬,阮南,李晓艳,童汝亭;金/硫醇-类脂双层膜的研究进展[J];河北师范大学学报;2004年02期
7 李新民,李斌,张洪杰,倪嘉缵,袁春波,丁德胜,陆祖宏,刘举正;铕对磷脂酰胆碱LB单分子膜结构影响的原子力显微镜观察[J];化学学报;1998年07期
8 陈华丽,韦云隆,刘盛平;碘修饰的S-BLM生物传感器研究[J];汕头大学学报(自然科学版);2003年01期
9 蔡红,王斌,张占军,蔡生民,Tien H. Ti,Angelica Ottova;不锈钢支撑双层类脂膜离子传感器的电化学研究与应用[J];应用化学;2003年04期
10 崔晓丽,蒋殿录,李俊新,刁鹏,童汝亭,王心葵;Au/硫醇/卵磷脂双层膜的制备及其电化学表征[J];应用化学;1999年02期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 孙润广;生物膜分子与化学药物及磁场相互作用的研究[D];西安交通大学;1999年
2 马勇;模拟生物膜的电化学研究[D];华东师范大学;2007年
3 孙莹莹;葡萄糖氧化酶/纳米材料单层或多层膜用于构筑葡萄糖生物传感器[D];吉林大学;2008年
4 惠歌;人参皂苷分子与生物膜作用的研究[D];吉林大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 张超;单分子膜成膜性能及循环曲线研究[D];河南大学;2004年
2 惠飞;CTAB和PM-19与模拟生物膜相互作用的电化学研究[D];辽宁大学;2006年
3 江黎丽;生物小分子对模拟生物膜作用的电化学研究[D];辽宁大学;2007年
4 潘学诗;左氧氟沙星/异丙酚对支撑双层类脂膜的影响研究[D];同济大学;2008年
5 智福鹏;卟啉自组装膜电化学表征及其应用研究[D];西北师范大学;2009年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 代重山;黏菌素神经毒性小鼠模型建立、机制探讨及NGF保护作用[D];东北农业大学;2013年
2 冉瑜;新型抗菌肽与磷脂膜的相互作用研究[D];郑州大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 魏红艳,张龚,贺风义,李伟,李丽;葛根素对冠心病患者血液流变学及血脂的影响[J];淮海医药;2003年05期
2 邵念方,刘卫红;通脑灵对原代培养大鼠大脑皮层神经细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用[J];山东中医药大学学报;2000年01期
3 林克椿,聂松青;细胞膜的流动性[J];生理科学进展;1985年01期
4 张光成,方思鸣;葛根异黄酮的抗氧化作用[J];同济医科大学学报;1997年05期
5 田京伟,杨建雄,傅风华,蒋王林,王振华,王超云;白藜芦醇苷对羟自由基所致大鼠脑线粒体氧化损伤的保护作用[J];中国药理学通报;2003年11期
6 杨彦玲;谷氨酸转运体与神经退行性疾病[J];中国临床药理学与治疗学;2003年02期
7 邓培媛,李群娜,朱玉珍,裴振峨,张俊,翟伟,张京航,闫伟,詹思延;葛根素注射剂不良反应及其影响因素分析[J];药物流行病学杂志;2005年01期
8 郭建平,孙其荣,周全;葛根药理作用研究进展[J];中草药;1995年03期
9 董丽萍,韩明,袁芳,徐立新,王天佑;葛根素对大鼠星形胶质细胞的体外保护作用[J];中国应用生理学杂志;2001年02期
10 陈雨亭,陈惟昌;谷氨酸对大脑皮质神经元膜流动性的影响[J];中日友好医院学报;1996年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 方唯硕;抗肿瘤天然产物的研究进展[J];国外医学.药学分册;1994年05期
2 ;靛红等四种天然产物的最新研究信息[J];国外医药.植物药分册;1996年03期
3 聂纯;天然药物抗癌有效成分研究进展[J];中草药;1999年01期
4 赵文英;顾谦群;朱伟明;;组合生物合成技术在聚酮类天然产物研究中的应用[J];中国药学杂志;2006年19期
5 刘战;全星;;抗艾滋病天然药物的研究进展[J];中国医药导报;2006年33期
6 王普善;;重新审视天然产物药物发现战略[J];中国新药杂志;2006年08期
7 施琦渊;陈晓梅;郭顺星;;植物内生真菌来源的抗菌活性物质研究进展[J];中国药学杂志;2007年11期
8 侯志国;罗建光;孔令义;;高速逆流色谱联用技术应用于天然产物的研究进展[J];中国天然药物;2010年01期
9 ;Forskolin,一种有心脏活性和降压作用的天然产物的研究概述[J];国外医药.植物药分册;1980年02期
10 左风;天然产物中的药物研究[J];国外医学.中医中药分册;2000年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孟子晖;董美伶;周智明;;分子印迹聚合物用于提取天然产物中活性成分及药物筛选的应用[A];第七届全国天然有机化学学术研讨会论文集[C];2008年
2 吴毓林;;青蒿素——历史和现实的启示[A];第七届全国天然有机化学学术研讨会论文集[C];2008年
3 林忠辉;张余;李莉;陈莉莉;段文虎;郭跃伟;胡立宏;蒋华良;沈旭;;基于胰岛素信号转导通路的抗2型糖尿病活性天然产物分子发现[A];第七届全国天然有机化学学术研讨会论文集[C];2008年
4 王琳;朴志松;张兴权;;天然产物白藜芦醇的类似物合成及其对HIV-1的抑制作用[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年
5 江仁望;董福越;;单晶X-射线衍射分析在天然产物绝对构型测定中的应用[A];中国化学会第八届天然有机化学学术研讨会论文集[C];2010年
6 王佺珍;刘玉燕;崔健;;菊苣天然产物的药效及其开发前景[A];2009中国草原发展论坛论文集[C];2009年
7 张甜;董学畅;吴方评;;微柱高效液相色谱技术在天然产物质量监控中的应用[A];中国化学会第四届有机化学学术会议论文集[C];2005年
8 李欣;陈美芬;杨杏芬;沈汉明;;白杨素增敏鼻咽癌细胞对TNF-α诱导凋亡作用的研究[A];中国毒理学会第五次全国学术大会论文集[C];2009年
9 于法锋;刘红星;黄初升;崔建国;;三种异戊烯氧基苯丙素天然产物的全合成[A];第三届全国有机化学学术会议论文集(上册)[C];2004年
10 姚祝军;;超越自然创造力的“天然产物”化学[A];中国化学会第四届有机化学学术会议论文集[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 柯华 本报记者 洪继东;从天然产物里提取“金子”[N];成都日报;2010年
2 ;让“按需制药”成为可能[N];光明日报;2006年
3 记者 姚嘉通讯员 李赫宇;天津尖峰植提物产业化基地落成[N];医药经济报;2008年
4 李天舒;菊科植物活性成分被发现[N];健康报;2007年
5 记者 陈暄 实习生 肖晨歌;康宝莱拟在长建原料基地[N];长沙晚报;2010年
6 傅荣杰冯怡;天然产物微波萃取异军突起[N];中国医药报;2007年
7 华工;美发现一种制造抗生素药物前体新方法[N];医药经济报;2006年
8 记者 苏小红;为中药争取“国际通行证”[N];中山日报;2009年
9 吴佶谊李劼;广药灵芝孢子油年内有望打入美国市场[N];经理日报;2007年
10 高成森;我国天然产物数据库投入使用[N];中国医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 郑旭煦;Neuromedin U2受体激动剂高通量筛选模型与天然产物活性成分研究[D];重庆大学;2003年
2 陈彬;海蚯蚓(Arenicola cristata)中抗肿瘤活性成分的分离、鉴定及相关新技术研究[D];复旦大学;2005年
3 潘炘;黄花菜保鲜与保健功能的研究[D];浙江大学;2006年
4 杨绍波;天然产物Sphingofungin F的全合成研究[D];兰州大学;2008年
5 张寿德;计算机技术在天然产物结构和活性研究中的应用[D];上海交通大学;2012年
6 吴倩;1.新型抗肾衰药物的设计与合成 2.吡咯并喹啉类活性天然产物的全合成研究[D];北京协和医学院;2012年
7 彭宣嘉;几个萜类天然产物的全合成研究[D];兰州大学;2006年
8 崔庆;天然产物AB5046A、B和Cedarmycins A、B及其衍生物的合成与生物活性[D];南开大学;2010年
9 张琛;双环倍半萜类天然产物的全合成研究及抗高血压药物[D];兰州大学;2006年
10 李俊鹏;天然产物Goniothalesdiol A,12-Hydroxymonocerin和Sch 642305及其类似物的合成研究[D];兰州大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘苗苗;171种天然产物蛋白酶体抑制剂活性筛选[D];昆明医学院;2008年
2 周侠;抗乙型肝炎病毒药物的筛选和研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
3 杨静;四种杀微生物剂候选物体外抗HIV-1及其它性传播疾病病原体活性的初步评价[D];昆明理工大学;2004年
4 王瑞冬;独一味的生药学研究[D];第二军医大学;2005年
5 吴君臣;黄酮及噻唑类衍生物的合成研究[D];苏州大学;2005年
6 吴琼;天然产物LC微乳剂配方筛选及其活性成分的化学修饰研究[D];贵州大学;2006年
7 杨霄;酵母生物转化生产2-苯乙醇的研究[D];浙江工业大学;2007年
8 张丽娟;咖啡酰奎尼酸衍生物的设计、合成及生物活性研究[D];浙江大学;2008年
9 毕鹏禹;溶剂浮选法在天然产物成分分析和氨基酸分离富集中的应用[D];北京化工大学;2007年
10 李归浦;几种天然产物及食品添加剂的鱼鲞防蝇效果研究[D];浙江工商大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026