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《复旦大学》 2008年
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色素上皮衍生因子对黑素细胞生物学活性的影响

张成锋  
【摘要】: 第一部分良、恶性黑素细胞及组织中色素上皮衍生因子表达的研究 目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)在皮肤良、恶性黑素细胞及组织中的表达及其意义。 方法 用免疫组化法检测正常皮肤组织、色素痣以及恶性黑素瘤组织中PEDF的表达与分布。用蛋白印迹法检测正常黑素细胞及恶性黑素瘤细胞株A375中PEDF蛋白的表达与分布。用RT-PCR法检测正常黑素细胞及恶性黑素瘤细胞株A375中PEDF mRNA的表达。 结果 1、PEDF蛋白在正常皮肤组织、色素痣以及恶性黑素瘤组织中的表达依次递减,三者差异在统计学上有非常显著意义(P<0.001)。 2、PEDF蛋白在正常黑素细胞中有表达,恶性黑素瘤细胞株表达减弱在统计学上有非常显著意义(P<0.001)。 3、PEDF mRNA在恶性黑素瘤细胞中的表达非常显著低于正常黑素细胞(P<0.001)。 结论 恶性黑素瘤细胞PEDF蛋白和mRNA表达均降低,可能与恶性黑素瘤的发病有关。 第二部分siRNA沉默人黑素细胞色素上皮衍生因子基因表达的研究 目的 应用小干扰RNA(siRNA)干扰人黑素细胞的色素上皮衍生因子(PEDF)基因的表达,了解PEDF基因对黑素细胞增殖的作用。 方法 将PEDF siRNA经LipofectamineTM2000脂质体转染人黑素细胞后,以实时荧光定量RT-PCR和蛋白印迹法检测细胞PEDF mRNA和蛋白的表达,MTT法检测干扰后细胞的增殖水平。 结果 转染后黑素细胞的PEDF mRNA与蛋白表达明显减弱(P<0.001)。黑素细胞增殖率在转染后显著升高(P<0.001)。 结论 PEDF小片段干扰RNA可显著抑制黑素细胞中PEDF基因的表达;PEDF对黑素细胞的过度增殖有抑制作用。 第三部分人恶性黑素瘤细胞株中色素上皮衍生因子基因的突变研究 目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)基因在恶性黑素瘤细胞系中的突变状况。 方法 采用聚合酶链反应一单链构象多态性分析(PCR-SSCP)对人恶性黑素瘤细胞株A375中PEDF基因的所有八个外显子进行突变检测。对SSCP分析有异常泳动条带样本的PCR产物进行DNA测序。 结果 恶性黑色素瘤细胞株A375与正常黑素细胞相比,第3到第7外显子都出现了DNA泳动变位,其中以外显子5,6最为明显。PEDF基因第5,6外显子均存在突变:第5外显子的突变类型以单个碱基的缺失为主,第6外显子的突变类型则以单个碱基的突变为主。 结论 PEDF基因的突变可能在恶性黑素瘤的发病中起一定作用。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R774.1

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【参考文献】
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